焦鑫陽，李軍,2，孫立秋,2，王金蘭,2，王丹,2，時(shí)志春,2，趙明,2，張樹軍,2

花椒葉化學(xué)成分研究

焦鑫陽1，李軍1,2＊，孫立秋1,2，王金蘭1,2，王丹1,2，時(shí)志春1,2，趙明1,2，張樹軍1,2

（1.齊齊哈爾大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2.黑龍江省工業(yè)大麻加工技術(shù)創(chuàng)新中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

將花椒葉甲醇提取物采用硅膠柱色譜、重結(jié)晶、HPLC進(jìn)行分離純化，得到10個(gè)單體化合物，根據(jù)理化性質(zhì)與文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)對(duì)照鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)分別為：表羽扇豆醇(1)、羽扇豆醇(2)、樺木酸(3)、-香樹脂醇(4)，-谷甾醇(5)、齊墩果酸(6)、熊果醇(7)、苯甲酸(8)、-黑麥草素(9)、-黑麥草素(10)。其中化合物5、7、9、10為首次在該植物中分離得到。

花椒葉；黑麥草素；三萜

花椒（Maxim.）屬蕓香科花椒屬落葉小喬木[1]，在我國主產(chǎn)于遼寧、河北、四川、陜西。花椒果殼是中藥材也是生活中最常用調(diào)味品，據(jù)報(bào)道花椒果殼中山椒素和多酚含量高，具有多種生理活性[2]，在部分地區(qū)使用花椒葉替代花椒果殼做調(diào)味品，花椒葉化學(xué)成分中含有揮發(fā)油、山椒素、木質(zhì)素和黃酮等，資源豐富，利用較少，大量花椒葉被丟棄或焚燒，造成藥用資源的浪費(fèi)。目前，國內(nèi)外研究最多的是花椒果皮和花椒籽，而對(duì)于花椒葉的研究較少。為進(jìn)一步開發(fā)研究花椒葉資源的應(yīng)用途徑，本文對(duì)花椒葉的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到10個(gè)化合物，分別為表羽扇豆醇(1)、羽扇豆醇(2)、樺木酸(3)、-香樹脂醇(4)、-谷甾醇(5)、齊墩果酸(6)、熊果醇(7)、苯甲酸(8)、-黑麥草素(9)、-黑麥草素(10)。化合物5、7、9、10為首次從該植物中分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

花椒葉于2018年11月10日購自陜西省渭南市韓城市，經(jīng)甘肅省慶陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院高級(jí)農(nóng)藝師肖正璐鑒定為花椒葉，標(biāo)本號(hào)為HJ-201811。甲醇記作M，化學(xué)純，安耐吉化學(xué)公司；正己烷記作H，化學(xué)純，安耐吉化學(xué)公司；乙酸乙酯記作E，化學(xué)純，北京伊諾凱科技有限公司。

X-6顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀，北京泰克儀器有限公司；AV-600核磁共振波譜儀，Bruker公司；HITACHI L-7100半制備高效液相色譜儀，日本日立公司；不銹鋼色譜柱為5m的PREP-SIL（柱參數(shù)：250 mm×10 mm）；200～300目硅膠，青島海洋化工廠；薄層色譜硅膠板，煙臺(tái)化工廠。

1.2 提取與分離

取花椒葉3.5kg烘干后，經(jīng)研缽研碎并用M（25.0L）在25℃下浸泡，過濾，得浸提液減壓蒸餾后加水至一定體積，用H萃取4次，減壓蒸餾后得到正己烷萃取物質(zhì)量為106.7g。

取正己烷萃取物30.0g，進(jìn)行硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E)=95∶5（3.3 L）, 6∶4（5.5 L）, 3∶7（3.5 L），0∶1（3.2 L），(E)∶(M) = 5∶5（1.5 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同組分，濃縮得到9個(gè)組分（H-1～H-9）。H-4（876.0 mg）經(jīng)H重結(jié)晶后得化合物5（230.5 mg）。H-7（683.9 mg）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E) = 7∶3（2.0 L）, 5∶5（1.0 L）, 0∶1（1.0 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，濃縮得到5個(gè)組分（H-7-1～H-7-5）。H-7-1（56.1 mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 85∶15, 流速：4 mL/min）得到化合物2（3.3mg,R= 9.87 min）, 4（1.3mg,R= 12.35 min）。H-7-2（67.1mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 85∶15，流速：4mL/min）得到組分H-7-2-6, 化合物1（3.3 mg,R= 11.17 min）, 6（1.3mg,R=14.86min）。H-7-2-6（17.1 mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 9∶1, 流速：4mL/min）得到化合物3（2.1mg,R= 27.86min）。H-7-3（322.7mg）用正相高效液相色譜分離（(H)∶(E) = 85∶15, 流速4mL/min），濃縮得到6個(gè)組分（H-7-3-1～H-7-3-6）。H-7-3-6（74.4mg）用正相高效液相色譜分離（(H)∶(E) = 8∶2, 流速：4mL/min）, 得化合物8（1.1mg,R= 7.26 min）, 9（2.0 mg,R= 37.34 min）。H-8（752.5 mg）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E) = 7∶3（2.0 L）, 5∶5（1.0 L）, 0∶1（1.0 L）洗脫，薄層色譜檢測(cè)合并相同組分，得到5個(gè)組分（H-8-1～H-8-5）。H-8-2（107.1mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 8∶2, 流速：4mL/min）得到化合物7（5.3 mg,R= 9.63 min）, 10（176.2mg,R= 10.37min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 198～201℃;1H-NMR(600 MHz, CDCl3): 4.69(1H, br s, H29a), 4.57(1H, br s, H29b), 3.39(1H, t,= 3.0 Hz, H3）,1.68 (3H, s, H30), 1.03 (3H, s, H26), 0.96 (3H, s, H23), 0.93 (3H, s, H27), 0.84 (3H, s, H25), 0.83 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H28);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 151.1 (C20), 109.4 (C29), 76.3 (C3), 50.2 (C9), 49.0 (C5), 48.3 (C18), 48.0 (C19), 43.0 (C14), 42.9 (C17), 41.1 (C8), 40.0 (C22), 38.0 (C13), 37.6 (C4), 37.3 (C10), 35.7 (C16), 34.2 (C7), 33.3 (C1), 29.9 (C21), 28.3 (C23), 27.4 (C15), 25.5 (C2), 25.1 (C12), 22.2 (C24), 20.8 (C11), 19.4 (C30), 18.3 (C6), 18.0 (C28), 16.0 (C25), 15.9 (C26), 14.7 (C27)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，鑒定為表羽扇豆醇。

化合物2：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 173～175℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 4.68 (1H, br s, H29a), 4.56 (1H, br s, H29b), 3.19 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 1.67 (3H, s, H30), 1.03 (3H, s, H26), 0.97 (3H, s, H23), 0.94 (3H, s, H27), 0.83 (3H, s, H25), 0.79 (3H, s, H28), 0.76 (3H, s, H-24);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 151.0 (C20), 109.3 (C29), 79.1 (C3), 55.4 (C5),50.6 (C9), 48.3 (C18), 48.0 (C19), 43.1 (C17), 42.8 (C14), 40.9 (C8), 40.0 (C22), 38.9 (C4), 38.8 (C1), 38.0 (C13), 37.2 (C10), 35.5 (C16), 34.1 (C7), 29.7 (C21), 28.2 (C23), 27.5 (C2), 27.4 (C15), 25.2 (C12) , 20.9 (C11),19.4 (C30), 18.3 (C6), 18.2 (C28), 16.3 (C25), 16.0 (C26), 15.5 (C24), 14.6 (C27)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，鑒定為羽扇豆醇。

化合物3：白色針狀晶體（乙酸乙酯），mp: 285～287℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：4.74 (1H, br s, H29a), 4.61 (1H, br s, H29b), 2.95 (1H, m, H19), 1.64 (3H, s, H30), 0.93 (3H, s, H27), 0.87 (3H, s, H26), 0.85 (3H, s, H23), 0.76 (3H, s, H25), 0.64 (3H, s, H24);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 177.7 (C28), 150.8 (C20), 110.3 (C29), 77.5 (C3), 56.1 (C17), 55.5 (C5), 50.6 (C9), 49.2 (C19), 47.1 (C18), 42.5 (C14), 40.7 (C8), 39.1 (C1), 38.7 (C4), 38.2 (C13), 37.2 (C10), 36.8 (C22), 34.5 (C7), 32.2 (C16), 30.7 (C15), 29.8 (C21), 28.7 (C23), 27.6 (C2), 25.6 (C12), 21.0 (C11), 19.4 (C30), 18.4 (C6), 16.5 (C25), 16.3 (C26), 16.2 (C24), 15.0 (C27)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，鑒定為樺木酸。

化合物4：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 188～189℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.12 (1H, t,= 3.0 Hz, H12),3.24 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 1.07 (3H, s, H27), 1.00 (3H, s, H26), 0.99 (3H, s, H23), 0.95 (3H, s, H25), 0.92 (3H, d,= 6.0 Hz, H30), 0.80 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H28), 0.79 (3H, d,= 6.0 Hz, H29);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 139.7 (C13), 124.4 (C12), 79.0 (C3), 59.1 (C18), 55.2 (C5), 47.7 (C9), 42.0 (C14), 41.5 (C22), 40.0 (C8), 39.7 (C19), 39.6 (C20), 38.8 (C1), 38.7 (C4), 36.9 (C10), 33.8 (C17), 32.9 (C7), 31.3 (C21), 28.8 (C15), 28.2 (C23), 28.1 (C28), 26.6 (C2), 26.6 (C16), 23.4 (C11), 23.3 (C27), 21.4 (C30), 18.4 (C6), 17.5 (C29), 16.9 (C26), 15.7 (C25), 15.6 (C24)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，鑒定為-香樹脂醇。

化合物5：白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp: 132～134℃; 薄層色譜分析，經(jīng)過不同極性的薄層展開劑顯示，與谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品R值一致, 鑒定為谷甾醇。

化合物6：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 259～263℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.28 (1H, br s, H12), 3.22 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 2.82 (1H, dd,= 13.2, 3.6 Hz, H18), 1.27 (3H, s, H27), 1.15 (3H, s, H25), 1.00 (3H, s, H29), 0.94 (3H, s, H30), 0.93 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H23), 0.77 (3H, s, H26);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 183.4 (C28), 143.5 (C13), 122.6 (C12), 79.0 (C3), 55.2 (C5), 47.6 (C9), 46.5 (C17), 45.8 (C19), 41.6 (C14), 41.0 (C18), 39.0 (C8), 38.5 (C4), 38.2 (C1), 37.2 (C10), 33.6 (C29), 33.0 (C7), 32.6 (C21), 32.2 (C22), 30.4 (C20), 28.3 (C23), 27.4 (C15), 27.1 (C2), 25.7 (C27), 23.3 (C16), 23.4 (C30), 22.7 (C11), 18.1 (C6), 17.0 (C26), 15.5 (C24), 15.3 (C25)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，鑒定為齊墩果酸。

化合物7：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 208～210℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.13 (1H, t,= 3.6 Hz, H12), 3.54 (1H, d,= 11.0 Hz, H28a), 3.23 (1H, dd,= 11.3, 4.9 Hz, H3), 3.21 (1H, d,= 11.0 Hz, H28b), 0.79 (3H, s, H24), 0.94 (3H, s, H25), 0.97 (3H, s, H26), 1.00 (3H, s, H23), 1.17 (3H, s, H27), 0.95 (3H, d,= 6.1 Hz, H30), 0.82 (3H, d,= 5.9 Hz, H29);13C-NMR (150 MHz, CDCl3):138.7 (C13), 125.1 (C12), 79.0 (C3), 70.0 (C28), 55.2 (C5), 54.0 (C18), 47.7 (C9), 42.2 (C14), 40.0 (C8), 39.4 (C19), 39.4 (C20), 38.8 (C1), 38.0 (C4), 36.9 (C10), 35.2 (C17), 32.7 (C7), 30.6 (C21), 30.6 (C22), 28.1 (C15), 27.4 (C23), 26.0 (C2), 23.4 (C27), 23.3 (C11), 23.3 (C16), 21.3 (C30), 18.3 (C6), 17.4 (C26), 16.8 (C29), 15.7 (C25), 15.6 (C24)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，鑒定為熊果醇。

化合物8：白色針狀晶體（乙酸乙酯），mp: 120～122℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：8.13 (2H, d,= 7.2 Hz, H2,6), 7.63 (1H, t,=7.2 Hz, H4), 7.49 (2H, t,= 7.2 Hz, H3,5);13C-NMR (150 MHz, CDCl3)：171.5(C7), 133.8 (C4), 130.2 (C2,6), 129.2 (C1), 128.5 (C3,5)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，鑒定為苯甲酸。

化合物9：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 147.3～148.7℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.69 (1H, s, H7), 4.33 (1H, m, H3), 2.47 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2a), 1.96 (1H, br,= 13.9 Hz, H2b), 1.76 (3H, s, H9), 1.45 (3H, s, H11), 1.25 (3H, s, H10);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 182.1 (C8), 172.2 (C6), 112.7 (C7), 86.4 (C1), 66.6 (C3), 47.2 (C2), 45.4 (C4), 35.7 (C5), 30.4 (C9), 27.2 (C10), 26.2 (C11)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，鑒定為-黑麥草素。

化合物10：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 147～148℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.69 (1H, s, H7), 4.33 (1H, m, H3), 2.47 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2a), 1.96 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2b), 1.76 (3H, s, H9), 1.45 (3H, s, H11), 1.25 (3H, s, H10);13C-NMR (150 MHz, CDCl3)：182.3 (C8), 171.6 (C6), 112.7 (C7), 86.4(C1), 66.6(C3), 47.2(C2), 45.4(C4), 35.7(C5), 30.5 (C9), 27.2 (C10), 26.3 (C11)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，鑒定為-黑麥草素。

3 結(jié)論

本研究從花椒葉中分離鑒定了10個(gè)單體化合物，其中化合物5，7，9，10為首次在花椒中分離得到?；衔?有降膽固醇、用于II型高脂血癥[12]?；衔?加速皮膚自愈能力作用[13]、對(duì)小鼠的黑色素堆積有一定的抑制作用?；衔?對(duì)腦瘤、神經(jīng)外胚層瘤、白血病等惡性腫瘤細(xì)胞[14]也有抑制作用，化合物6具有保肝、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗病毒、抗焦慮等多種生物活性[15]，這些具有活性的成分均可在花椒葉中分離得到，同時(shí)證明花椒葉具有較好的藥物開發(fā)前景。

[1] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典. 一部[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社，2015: 159-160.

[2] ZHANG Y L, WANG M M, DONG H H, et al. Anti-hypoglycemic and hepatocyte-protective effects of hyperoside fromleaves in mice with high-carbohydrate/high-fat diet and alloxan-induced diabetes[J]. International Journal of Molecular Medicine, 2018, 41(1): 77-86.

[3] 楊彩霞，張正凱，劉寧，等. 艾膠算盤子的化學(xué)成分研究[J]. 中草藥，2012, 43(8): 1471-1474.

[4] 錢春香，孫麗娜，薛璇璣，等. 乳苣全草石油醚部位化學(xué)成分的研究[J]. 中草藥，2017, 48(7): 1302-1305.

[5] 汪巖，蘇丙賀，周曉玉，等. 水紅花子炮制品化學(xué)成分研究[J]. 遼寧中醫(yī)雜志，2012, 39(3): 505-509.

[6] 李小第，姜會(huì)敏，霍雅玉，等. 刺玫果果肉石油醚層化學(xué)成分及胰脂酶和-糖苷酶抑制活性研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2015, 27(6): 1011-1015.

[7] 鄒娟，董明洪，周浪，等. 荔波產(chǎn)香茶菜化學(xué)成分研究[J]. 中草藥，2020, 51(17): 4405-4410.

[8] 楊志友，韓娜，康榮明，等. 藍(lán)花菜的化學(xué)成分研究[C].中藥與天然藥高峰論壇暨全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)，2012.

[9] 曾貴俊，黃玉平，楊瑤，等. 闊葉蒲桃的化學(xué)成分研究[J]. 云南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2020, 40(6): 50-52.

[10] TADAHIRO K, TAKAHITO I, KAORI K, etal. Germination response in wheat grains to dihydroactinidiolide a germination Inhibitor in wheat husks, and related compounds[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2003, 51(8): 2161-2167.

[11] 王金蘭，趙巖磊，王丹，等. 大籽蒿化學(xué)成分研究[J]. 中草藥，2017, 48(17): 3486-3492.

[12] 史棟棟，況媛媛，王桂明，等. 細(xì)胞代謝組學(xué)用于羽扇豆醇干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的機(jī)理探究[J]. 色譜，2014, 32(3): 278-283.

[13] 魏金婷，劉文奇．植物藥活性成分-谷甾醇研究概況[J]. 莆田學(xué)院學(xué)報(bào)，2007, 14(2): 38-40, 46.

[14] THEO A, MASEBE T, SUZUKI Y, et al., a traditional South African medicinal plant, contains an anti HIV-1 constituent, betulinic acid[J]. The Tohoku Journal of Experimental Medicine, 2009, 217(2): 93-99.

[15] CELIO L M, QUEIROZ M G R, FONSECA S G C, et al. Oleanolic acid, a natural triterpenoid improves blood glucose tolerance in normal mice and ameliorates visceral obesity in mice fed a high-fat diet[J]. Chemico-Biological Interactions, 2010, 185(1): 59-65.

Chemical constituents from leaves ofMaxim.

JIAO Xin-yang1，LI Jun1,2＊，SUN Li-qiu1,2，SHIZhi-chun1,2，WANG Jin-lan1,2，ZHAO Ming1,2，ZHANG Shu-jun1,2

(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Heilongjiang Qiqihar 161006, China;2.Heilongjiang Industrial Hemp Processing Technology Innovation Center, HeilongjiangQiqihar 161006, China)

Ten compounds were isolated and purified from methanol extract of leaves ofMaxim. by silica gel column chromatography, semi preparative high performance liquid chromatography and thin layer chromatography, their structures were identified by literature spectral data and physical and chemical properties: epilupinol(1), lupinol(2), betulinic acid(3),-rosin alcohol(4),-sitosterol(5), oleanolic acid(6), arbutin(7), benzoicacid(8),-ryegrass(9),-ryegrass(10). Compounds 5, 7, 9, 10 was isolated from this plant for the first time.

leaves ofMaxim；ryegrass；triterpene

2020-11-24

黑龍江省屬高等學(xué)校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（135309301，135109207）

焦鑫陽（1995-），男，黑龍江綏化人，在讀碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，937908934@qq.com。

李軍，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，837534403@qq.com。

R284.1

A

1007-984X(2022)03-0060-03