李曉奇，栗 林，賈淑萍，王鳳武

（內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031）

免疫系統(tǒng)的主要作用是保護(hù)宿主免受細(xì)菌、病毒、真菌或寄生蟲等外部病原體的侵害。 免疫細(xì)胞能將病原體與自身抗原和無(wú)害的外部抗原區(qū)分開來(lái)，從而誘導(dǎo)對(duì)病原體的保護(hù)性免疫以及對(duì)自身抗原和無(wú)害的非自身抗原的耐受性［1］。 免疫耐受失調(diào)可能導(dǎo)致免疫介導(dǎo)性疾病，如自身免疫疾病、癌癥和各種速發(fā)型過(guò)敏性疾病［2］。過(guò)敏性疾病的特點(diǎn)是臨床表型和癥狀多種多樣，包括呼吸道疾病，如過(guò)敏性鼻炎和哮喘［3］。常見(jiàn)的全身性過(guò)敏反應(yīng)包括對(duì)食物和昆蟲毒液過(guò)敏［4］以及皮膚濕疹/特應(yīng)性皮炎［5］。 雖然一些過(guò)敏性疾病的臨床表現(xiàn)是輕微的，可以通過(guò)對(duì)癥藥物控制，但相當(dāng)多的患者有危及生命的發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)［6］。例如，過(guò)敏性哮喘可能會(huì)變成慢性呼吸道疾病并嚴(yán)重影響患者終生的呼吸功能。 盡管過(guò)敏表現(xiàn)和癥狀存在差異， 但過(guò)敏性疾病的分子和細(xì)胞機(jī)制是相似的，其特征是2 型輔助性T 細(xì)胞（T-helper lymphocyte type 2，Th2） 反應(yīng)和漿細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)敏原特異性免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）［7］。 過(guò)敏已成為一個(gè)主要的健康問(wèn)題。 近幾年，IgE 介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病發(fā)病率在發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家都在增加。

1 過(guò)敏原特異性免疫療法（allergen-specific immunotherapy，ASIT）的機(jī)制

ASIT 建立免疫耐受意味著免疫反應(yīng)的改變，例如通過(guò)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞 （regulatory T cells，Tregs）和調(diào)節(jié)性B 細(xì) 胞（regulatory B cells，Bregs）加強(qiáng)免疫記憶。在人和小鼠中觀察到Tregs 的誘導(dǎo)及其在疾病消退中的重要作用。 Tregs 通過(guò)多種協(xié)同機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用， 如分泌IL-10、IL-35和TGF-b［8］，以及通過(guò)一些細(xì)胞表面受體，如細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4 （cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-4）、淋巴細(xì)胞活化基因3 （lymphocyte-activation gene-3，LAG-3）、程序性細(xì)胞死亡蛋白1（programmed death-1，PD-1）及T 細(xì)胞免疫球蛋白和ITIM 域 （T cell immunoglobulin and ITIM domain，TIGIT）［9］發(fā)揮作用。在某些情況下，Tregs 單獨(dú)作用可能不足以減少過(guò)敏性炎癥。 Tregs 已被證明與Bregs 協(xié)同作用以促進(jìn)免疫耐受。 Bregs 構(gòu)成一種特定的B 細(xì)胞亞型，可產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子IL-10 和/或IL-35［10］。 已發(fā)現(xiàn)Bregs 在接受ASIT 治療的患者體內(nèi)合成過(guò)敏原特異性IgG4［11］。 阻止特異性IgE 與過(guò)敏原結(jié)合的阻斷抗體對(duì)于調(diào)節(jié)無(wú)臨床癥狀的過(guò)敏性疾病也至關(guān)重要。 注射單劑量的2 種單克隆IgG4 抗體，通過(guò)被動(dòng)免疫療法阻斷貓的主要過(guò)敏原Feld1，成功緩解了患病貓的急性過(guò)敏癥狀［12］。 小鼠中不存在IgG4，但I(xiàn)gG1、IgG2a 和IgG3 與小鼠ASIT 模型中的保護(hù)作用有關(guān)。 在ASIT 情況下，IgA 也被證明通過(guò)中和黏膜表面的過(guò)敏原發(fā)揮保護(hù)作用。 先天免疫系統(tǒng)主要參與ASIT 的早期。 樹突狀細(xì)胞（dentritic cells，DCs） 尤其是漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）已被證明是ASIT 期間耐受誘導(dǎo)的主要細(xì)胞介質(zhì)， 可導(dǎo)致Tregs的產(chǎn)生。 DCs 利用多種因子促進(jìn)Tregs 的分化，包括可溶性因子，如IL-10、TGF-b 或吲哚胺2，3-雙加氧酶 （indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO）［1］，以及細(xì)胞配體，如誘導(dǎo)型共刺激配體（inducible costimulator-ligand，ICOS-L） 或程序性死亡配體1（programmed death-ligand 1，PD-L1）和PD-L2［13］。

2 CpG-寡脫氧核苷酸 （CpG-oligodeoxynucleotide，CpG-ODN）及其種類

為區(qū)分病原體結(jié)構(gòu)和自身抗原， 免疫系統(tǒng)具備能夠識(shí)別危險(xiǎn)的特定系統(tǒng)信號(hào)或病原體相關(guān)分子 模 式 （pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）。 PAMPs 包含多種病原體結(jié)構(gòu)，例如脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、鞭毛蛋白、聚糖結(jié)構(gòu)、遺傳物質(zhì)（DNA 和RNA）等。免疫細(xì)胞可以通過(guò)模式識(shí)別受體 （pattern recognition receptor，PRR）特異性識(shí)別PAMPs。 與脊椎動(dòng)物DNA 不同，細(xì)菌遺傳物質(zhì)富含未甲基化胞嘧啶—鳥嘌呤二核苷酸（CpG）， 這些未甲基化的細(xì)菌CG 基序的PAMPs被Toll 樣受體9（Toll-like receptor 9，TLR9）識(shí)別。含有未甲基化CpG 的短合成寡脫氧核苷酸（oligodeoxynucleotide，ODN） 序列模擬細(xì)菌DNA特征，用于激動(dòng)TLR9，避免細(xì)菌污染物引起的任何其他TLRs 共激活。

到目前為止， 至少已鑒定4 種CpG-ODN，它們對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生不同的影響，因此，了解其免疫調(diào)節(jié)特性至關(guān)重要。 A 類CpG-ODN 具有磷酸二酯/硫代磷酸酯骨架，包含1 個(gè)間接回文序列的單個(gè)CpG 基序，以及位于3′末端的多聚G 串。 B 類CpG-ODN 在硫代磷酸酯骨架內(nèi)包含多個(gè)CG 雙峰，后者能抵抗核酸酶消化，與A 類CpG-ODN 的磷酸二酯骨架相比，壽命延長(zhǎng)了6 倍。 C 類CpGODN 是最近被報(bào)道的一種新CpG-ODN，是上述2種CpG-ODN 類型的組合。 與B 類CpG-ODN 一樣，C 類CpG-ODN 完全建立在硫代磷酸酯核苷酸上， 但它的回文CpG 基序與A 類相似［14］。 P 類CpG-ODN 是最近研發(fā)的，與其他CpG-ODN 類型不同， 它包含2 個(gè)有助于形成更高階結(jié)構(gòu)的回文序列。

3 TLR9 下游信號(hào)及其對(duì)CpG-ODN 濃度的依賴

TLR9 與CpG-ODN 的結(jié)合點(diǎn)位于細(xì)胞胞內(nèi)體， 需要CpG-ODN 的內(nèi)化和胞內(nèi)體的攝取刺激TLR9 并觸發(fā)其信號(hào)級(jí)聯(lián)。TLR9 一旦被CpG-ODN結(jié)合激活， 它的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域， 即Toll/IL-1 受體（Toll/IL-1 receptor，TIR） 結(jié)構(gòu)域就會(huì)受到刺激并進(jìn)一步傳遞信號(hào)。 TIR 結(jié)構(gòu)域與TLR 銜接蛋白髓樣分化因子88 （myeloid differentiation factor 88，MyD88）相互作用是經(jīng)典的結(jié)合模式。隨后，IL-1R相關(guān)激酶1（interleukin 1 receptor-associated kinase 1，IRAK1）、IL-1R 相關(guān)激酶2 （IRAK2）、IL-1R 相關(guān)激酶4（IRAK4）和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6）被磷酸化［1］，并依次募集幾種絲裂原活化蛋 白 激 酶 （mitogen -activated protein kinases，MAPKs）和其他激酶，例如IκB 激酶（IκB kinase，IKK）。 這些激酶促進(jìn)了各種轉(zhuǎn)錄因子向細(xì)胞核的易位，例如激活B 細(xì)胞核因子kappa-輕鏈增強(qiáng)子（nuclear factor-kappa B，NF-κB）、激活蛋白-1（activator protein-1，AP-1） 或干擾素調(diào)節(jié)因子7（interferon regulator factor 7，IRF7）［15］。 這些轉(zhuǎn)錄因子激活促炎基因的轉(zhuǎn)錄，如TNF、IL-1B、IL-1A 基因和1 型IFN 基 因 （IFNA 和IFNB）。 pDCs 響 應(yīng)TLR9 激活產(chǎn)生1 型IFN 已被證明依賴于MyD88-IRF7 信號(hào)耦聯(lián)。 CpG-ODN 誘導(dǎo)的基因表達(dá)特征動(dòng)力學(xué)是復(fù)雜的。 研究表明， 在體內(nèi)注射CpG-ODN 后僅30 min，一組基因就被上調(diào)，在給藥后約3 h 達(dá)到表達(dá)峰值； 在給藥后第5 天觀察到第2 個(gè)延遲峰值， 證明CpG-ODN 可以產(chǎn)生短期、中期和長(zhǎng)期影響。 進(jìn)一步研究表明，包含TIR結(jié)構(gòu)域的接頭誘導(dǎo)IFN-b （TIR domain-containing adaptor-inducing interferon-b，TRIF） 被 證 明 在TLR3 和TLR4 激活時(shí)發(fā)出信號(hào)［16］。

最近的研究證明， 除了經(jīng)典的MyD88 通路，TLR9 還可以通過(guò)TRIF 發(fā)出信號(hào)， 當(dāng)高濃度的CpG-ODN 作用于pDCs 時(shí)，TLR9 會(huì)通過(guò)TRIF 發(fā)出信號(hào)， 而使用較低濃度的CpG-ODN 時(shí)，TLR9會(huì)接合經(jīng)典的MyD88 接頭。 TLR9 下游信號(hào)傳導(dǎo)的差異暗示了差異基因表達(dá)特征。 一方面，MyD88轉(zhuǎn)導(dǎo)通路同時(shí)觸發(fā)了經(jīng)典NF-κB 和非經(jīng)典NFκB 通路， 導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子的表達(dá)， 如TNF-a、IL-1b、IL-12、IL-6 和IL-23。另一方面，TRIF 下游信號(hào)僅激活非經(jīng)典NF-κB 通路和IRF3，導(dǎo)致抗炎介質(zhì)如TGF-b 和IDO 的表達(dá)。 這項(xiàng)研究提出了一個(gè)新的觀點(diǎn)， 即TLR9 可以根據(jù)配體濃度被不同程度激活。 TLRs 在人外周血單個(gè)核細(xì)胞上的分布是可變的。 雖然TLR9 在一些人類免疫細(xì)胞如中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中不表達(dá)，但它在pDCs 和B細(xì)胞中高表達(dá)， 在NK 細(xì)胞和T 細(xì)胞中的表達(dá)水平較低。 在小鼠中，TLR9 表現(xiàn)出與人類相似的表達(dá)和激活模式，僅有細(xì)微的差別。 例如，由于缺乏TLR9 表達(dá)， 來(lái)自人外周血的單核細(xì)胞不會(huì)被CpG-ODN 激活。 然而， 小鼠單核細(xì)胞表達(dá)TLR9并通過(guò)參與NF-κB 通路和隨后產(chǎn)生細(xì)胞因子（如TNF-a）響應(yīng)CpG-ODN 刺激。 在與過(guò)敏性氣道疾病相關(guān)的器官中， 人和小鼠肺泡巨噬細(xì)胞表達(dá)TLR9。 然而， 只有人而不是小鼠的肺DCs 顯示TLR9 表達(dá)。

目前的研究發(fā)現(xiàn)，CpG-ODN 可能會(huì)誘導(dǎo)一些在小鼠和人類之間略有不同的免疫反應(yīng)［17］。此外，激動(dòng)TLR9 的最佳CpG-ODN 序列因物種而異。然而，TLR9 激活產(chǎn)生的影響在物種之間基本保持不變，因?yàn)樯嫌?、下游轉(zhuǎn)導(dǎo)元件是非常保守的。 盡管如此， 在動(dòng)物模型中應(yīng)用基于CpG-ODN 的治療時(shí)應(yīng)考慮種間差異。

4 CpG-ODN 對(duì)免疫細(xì)胞的影響

CpG-ODN 影響許多類型的免疫細(xì)胞，尤其是抗原呈遞細(xì)胞（antigen-presenting cells，APCs），如DCs 和巨噬細(xì)胞。 DCs 前體表達(dá)各種TLRs， 包括TLR9， 從而使它們能夠被CpG-ODN 激活。 由于pDCs 表達(dá)高水平的TLR9， 已經(jīng)成為研究CpGODN 的模式細(xì)胞。CpG-ODN 促進(jìn)pDCs 向淋巴結(jié)的遷移并刺激其產(chǎn)生細(xì)胞因子， 例如IL-6、TNFa、IFN-1 和粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF）。 此外，CpG-ODN 誘導(dǎo)pDCs 表達(dá)幾種共刺激表面分子，如CD40、CD54、CD80、CD86［18］。未甲基化的CG 基序也被證明可以促進(jìn)pDCs 的抗炎表型。 經(jīng)CpG-ODN 處理的pDCs 可以誘導(dǎo)CD8+Tregs 表達(dá)免疫抑制分子， 如LAG3 和CTLA4。 類似， 用CpG-ODN 刺激的pDCs 可以啟動(dòng)未成熟T 細(xì)胞分化為CD4+CD25+Treg，產(chǎn)生IL-10和TGF-b。 朗格漢斯細(xì)胞表達(dá)TLR9 并在小鼠皮內(nèi)注射CpG-ODN 后遷移。 脾DCs 亞群能夠在體內(nèi)注射CpG-ODN 后產(chǎn)生有效的IDO 信號(hào)， 從而獲得類似Tregs 的免疫抑制能力。 用C 類CpGODN 刺激的pDCs 可以直接使人B 細(xì)胞以不依賴T 細(xì)胞的方式分化為漿細(xì)胞并產(chǎn)生抗體。B 細(xì)胞也受CpG-ODN 的影響。 CpG-ODN 是一種強(qiáng)有力的B 細(xì)胞有絲分裂原，誘導(dǎo)它們產(chǎn)生IL-6 和IgM，并在Ig 產(chǎn)生過(guò)程中促進(jìn)它們的激活和分化。 同樣，用CpG-ODN 刺激B 細(xì)胞會(huì)改變后者的Ig 譜并產(chǎn)生不同抗體， 這種效果依賴TRL9 和MyD88 信號(hào)傳導(dǎo)。 NK 細(xì)胞可以通過(guò)直接或間接信號(hào)在CpGODN 刺激下發(fā)生反應(yīng)。 研究表明，NK 細(xì)胞不能直接響應(yīng)CpG-ODN，而是通過(guò)被CpG-ODN 激活的pDCs 產(chǎn)生的可溶性因子間接觸發(fā)。 其他研究同樣支持以下觀點(diǎn)，即CpG-ODN 可以直接誘導(dǎo)NK 細(xì)胞產(chǎn)生IFN-g 并提高其活性。 由于T 細(xì)胞表達(dá)的TLR9 水平非常低，推斷CpG-ODN 不會(huì)直接刺激T 細(xì)胞。 與NK 細(xì)胞類似，T 細(xì)胞是通過(guò)被CpGODN 激活的pDCs 傳輸?shù)男盘?hào)參與反應(yīng)。 盡管CpG-ODN 對(duì)T 細(xì)胞沒(méi)有直接影響，但有一些研究指出，CpG-ODN 可以在沒(méi)有任何中間體的情況下刺激T 細(xì)胞，但以獨(dú)立于TLR9 和MyD88 的方式。有研究表明，純化的人T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞在CpGODN 的直接刺激下產(chǎn)生IFN-g。 此外， 有研究表明，MyD88 對(duì)于CD4+T 細(xì)胞直接接受CpG-ODN刺激是必不可少的。

總之， 每種CpG-ODN 對(duì)各種免疫細(xì)胞都有廣泛的影響。 在將CpG-ODN 作為ASIT 佐劑的研究中，B 類CpG-ODN 因其在pDCs 中誘導(dǎo)免疫耐受性表型的突出能力而備受關(guān)注。

5 CpG-ODN 作為ASIT 免疫耐受誘導(dǎo)劑的作用機(jī)制

5.1 CpG-ODN 通過(guò)DCs 誘導(dǎo)過(guò)敏原特異性免疫調(diào)節(jié)

DCs，尤其是pDCs，在CpG-ODN 刺激下產(chǎn)生IL-10、TGF-b 和IDO， 這使得它們成為非常有效的Tregs 誘導(dǎo)劑。先天免疫對(duì)于誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的耐受反應(yīng)至關(guān)重要，因此，調(diào)節(jié)APCs（如pDCs）和早期激活的適應(yīng)性免疫細(xì)胞（如B 細(xì)胞）是改善ASIT 療效的手段。研究表明，CpG-ODN 對(duì)免疫系統(tǒng)具有雙重影響， 低濃度CpG-ODN 誘導(dǎo)炎癥，高濃度CpG-ODN 誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)和耐受，即相同的TLR 配體可以根據(jù)其濃度/劑量對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生兩種影響。 當(dāng)CpG-ODN 被用作疫苗接種的佐劑時(shí)，很低劑量就能引起細(xì)胞毒性或炎癥反應(yīng)。當(dāng)CpG-ODN 在動(dòng)物模型中被證明可以成功誘導(dǎo)免疫耐受和治療過(guò)敏時(shí)，使用的劑量很高。有學(xué)者研究表明，pDCs 是關(guān)鍵的免疫細(xì)胞，原因是pDCs在免疫系統(tǒng)中的經(jīng)典作用是通過(guò)病毒遺傳物質(zhì)激活TLR 危險(xiǎn)信號(hào)而產(chǎn)生1 型IFN 促進(jìn)對(duì)病毒侵襲的防御。 pDCs 已被證明通過(guò)幾種可溶性因子和膜信號(hào)蛋白促進(jìn)免疫耐受。 幾項(xiàng)研究表明， 通過(guò)CpG-ODN 刺激pDCs 會(huì)導(dǎo)致免疫耐受性的誘導(dǎo)，這可能是由成熟的病毒感染觸發(fā)的1 型IFN 反應(yīng)與通過(guò)高劑量CpG-ODN 單獨(dú)激活TLR9 導(dǎo)致的。為了區(qū)分來(lái)自不同刺激源的pDCs 衍生的1 型IFN 效應(yīng)，進(jìn)一步研究結(jié)果顯示，人pDCs 的NLRP1 和NLRP3 表達(dá)量極低，表明它們激活炎癥小體的能力較弱［19］，因此，它們幾乎不能誘發(fā)炎癥反應(yīng)，而是被編輯為誘發(fā)免疫耐受。 CD5+CD81+pDCs亞群在CpG-ODN 刺激下不產(chǎn)生1 型IFN，但會(huì)誘導(dǎo)強(qiáng)烈的Tregs 分化。 經(jīng)典樹突狀細(xì)胞（conventional DCs，cDCs）也已被證明可以通過(guò)人和小鼠的Tregs 誘導(dǎo)促進(jìn)免疫耐受。 2 型經(jīng)典樹突狀細(xì)胞（cDCs2a）顯示出更高的TLR9 表達(dá)水平，并可在CpG-ODN 刺 激 下 誘 導(dǎo)Tregs 分 化。 DCs 已 被 用于通過(guò)免疫耐受誘導(dǎo)將免疫疾病逆轉(zhuǎn)為免疫穩(wěn)態(tài)［20-21］。 與過(guò)敏類似， 炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）缺乏適當(dāng)?shù)拿庖哒{(diào)節(jié)。 研究表明，CpG-ODN 通過(guò)誘導(dǎo)DCs 免疫耐受改善IBD癥狀。研究顯示，ASIT 使用貓過(guò)敏原Feld1 和高劑量的CpG-ODN 可以不同程度減少過(guò)敏性哮喘小鼠模型中的癥狀。

5.2 CpG-ODN 誘導(dǎo)Tregs 和Bregs

CpG-ODN 能夠減少由氫氧化鋁觸發(fā)的Th2反應(yīng)，這種作用取決于MyD88 和IL-10 的活性［22］。CpG-ODN 能夠誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。早在1997 年，含有未甲基化CG 基序的細(xì)菌DNA 就被證明可以在黏附的小鼠脾細(xì)胞中誘導(dǎo)IL10 的產(chǎn)生。CpGODN 也被證明可以促進(jìn)其他調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子（如TGF-b）的產(chǎn)生。 TGF-b 對(duì)免疫調(diào)節(jié)至關(guān)重要，是誘導(dǎo)Tregs 分化的3 個(gè)關(guān)鍵信號(hào)之一。 此外，TGFb 在炎癥后組織修復(fù)中發(fā)揮作用［23］。 幾個(gè)小組已經(jīng)研究了CpG-ODN 的不同給藥途徑在過(guò)敏性呼吸道疾病中的治療機(jī)理。在第一項(xiàng)研究中，研究人員用CpG-ODN ［中高劑量：0.15 mg/（kg·BW）］在小鼠模型中預(yù)防蟑螂誘發(fā)的過(guò)敏性哮喘， 研究發(fā)現(xiàn)，肺裂解物中IL-10 的水平增加，這歸因于CD4+FoxP3+Tregs 群體的增加。 在第二項(xiàng)研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)通過(guò)鼻腔吸入（nasal inhalation，NI）途徑給予CpG-ODN［高劑量：2.5 mg/（kg·BW）］，可通過(guò)分泌IL-10 顯著緩解過(guò)敏性氣道炎癥。 在這種情況下，Tregs 不是IL-10 的來(lái)源， 但抗炎細(xì)胞因子是由CpG-ODN NI 治療后募集的調(diào)節(jié)性巨噬細(xì)胞分泌的。這兩個(gè)結(jié)果并不排斥，可以通過(guò)調(diào)節(jié)性巨噬細(xì)胞最初產(chǎn)生IL-10 解釋，然后是Tregs 的連續(xù)分化和IL-10 的產(chǎn)生。 此外，在完成基于CpGODN 的ASIT 后， 在CpG-ODN/ASIT 處理的小鼠脾臟中發(fā)現(xiàn)了差異調(diào)節(jié)和從頭表達(dá)的Tregs，包括已知特異性抑制Th2 反應(yīng)的Tregs 亞型［24］。 除了Tregs，Bregs 對(duì)ASIT 的效果也至關(guān)重要。與其他免疫細(xì)胞相比，B 細(xì)胞表達(dá)更高水平的TLR9，因此，它們對(duì)CpG-ODN 更敏感。 研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)敏反應(yīng)的減少取決于產(chǎn)生IL-10 的濾泡B 細(xì)胞 （B220+CD19+CD23+IgM+CD40+MHCⅡ），表明被CpG-ODN刺激的B 細(xì)胞在過(guò)敏情況下具有促進(jìn)免疫耐受的作用。CpG-ODN 誘導(dǎo)的產(chǎn)生IL-10 的B 細(xì)胞具有明顯的腫瘤壞死因子受體2 （tumor necrosis factor receptor type 2，TNFR2）表達(dá)，這可以在基于CpGODN 的小鼠ASIT 模型中得到證實(shí)，B 細(xì)胞在注射部位表達(dá)更高水平的TNFR2。

5.3 CpG-ODN 誘導(dǎo)保護(hù)性免疫球蛋白產(chǎn)生并改善上皮細(xì)胞完整性

ASIT 減輕過(guò)敏癥狀的重要機(jī)制之一是B 細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)性免疫球蛋白，如IgG 和IgA。用CpGODN 刺激B 細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫球蛋白，如IgG2a、IgG2b、IgG3 和IgA。 此外，CpG-ODN 可抑制體內(nèi)IgE 的產(chǎn)生。CpG-ODN 還被證明可以通過(guò)非免疫細(xì)胞的共激活加強(qiáng)對(duì)過(guò)敏性疾病的保護(hù)。例如，CpG-ODN 可改善氣道上皮細(xì)胞的緊密連接（tight junction，TJ），這種細(xì)胞在維持肺的穩(wěn)態(tài)和預(yù)防過(guò)敏原引起的氣道過(guò)敏方面起著至關(guān)重要的作用［25-27］。

5.4 CpG-ODN 誘導(dǎo)Th1 反應(yīng)

CpG-ODN 已被用作ASIT 中的佐劑， 靶向先天免疫系統(tǒng)，提升ASIT 的治療效果。CpG-ODN 已被證明可以誘導(dǎo)Th1 免疫反應(yīng)。在體外使用CpGODN 可以促進(jìn)IFN-g 和IL-12 的產(chǎn)生， 二者是在Th1 環(huán)境中產(chǎn)生的典型細(xì)胞因子。 在體內(nèi)預(yù)防性過(guò)敏治療中，CpG-ODN 能夠誘導(dǎo)不可變的IFN-g依賴性Th1 反應(yīng)，阻止隨后Th2 過(guò)敏反應(yīng)的建立。相比之下，將氫氧化鋁作為佐劑，用于治療小鼠乙型肝炎主要表面抗原（HBsAg）致敏時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)Th2反應(yīng)， 但用CpG-ODN 和HBsAg 處理時(shí)，CpGODN 能夠誘導(dǎo)Th1 反應(yīng)，覆蓋預(yù)先建立的Th2 反應(yīng)，因此，有學(xué)者曾提出誘導(dǎo)Th1 反應(yīng)是治療過(guò)敏性疾病的一種可能的細(xì)胞免疫機(jī)制。