張開能 張 濤 柯昌興

膀胱癌是我國泌尿系常見惡性腫瘤之一，其發(fā)生率居我國泌尿系腫瘤首位，居全部惡性腫瘤第9位。據估計，2018年全球膀胱癌的新診斷病例為549393例，死亡病例為199922例[1]。淋巴結轉移是膀胱癌的早期轉移方式，是否發(fā)生轉移在很大程度上決定手術方案并影響患者的預后。在膀胱癌淋巴結轉移時，一些體內的蛋白會出現異常表達，并且蛋白異常表達與淋巴結轉移存在一定的相關性，因此可以評估膀胱癌淋巴結轉移情況。

一、肌動蛋白相關蛋白2/3復合體亞基2

肌動蛋白相關蛋白2/3復合體亞基2(actin-related protein 2/3 complex subunit 2，ARP2)是肌動蛋白相關蛋白2/3復合物(ARP2/3)家族中的一員[2]。目前已證實ARP2/3復合物可以激活肌動蛋白絲，監(jiān)測和調節(jié)肌動蛋白聚合以及調節(jié)肌動蛋白對胞外信號的反饋。同時，ARP2和ARP3為肌動蛋白提供成核位點并在樹突狀絲狀偽足的形成中起重要作用[3]。腫瘤細胞相關的生物學行為，如增殖、遷移、侵襲等與肌動蛋白骨架和絲狀偽足的形成緊密相關[4]。Xu等[5]選取了288例行根治性膀胱切除術加盆腔淋巴結清掃術的膀胱癌患者樣本，與40對正常膀胱尿路上皮(從距腫瘤至少5cm處獲得)和正常淋巴結進行比較，膀胱癌細胞中陽性表達為33例(77.5%)，正常細胞中陽性表達為9例(22.5%)，淋巴結陽性的ARP2表達為35例(陽性率為87.5%)，通過統(tǒng)計分析表明，ARP2在膀胱癌細胞中的表達比正常細胞高；同時發(fā)現ARP2的表達升高與腫瘤直徑、數量、分級、分期、淋巴結轉移等相關，ARP2的表達在體積大的腫瘤、多發(fā)腫瘤、高級別、晚期腫瘤和淋巴結陽性的膀胱癌中更為常見。

二、肌動蛋白相關蛋白2/3復合亞基4

Rauhala等[6]報道，肌動蛋白相關蛋白2/3復合亞基4(actin-related protein 2/3 complex subunit 4，ARPC4)在胰腺癌中明顯上調，而小干擾 RNA(siRNA)介導的ARPC4表達減弱則明顯降低了胰腺癌的浸潤潛力，表明APRC4的高表達與胰腺癌的遷移和侵襲之間存在相關性。Kang等[7]研究證明，ARPC4在胃癌細胞系中過表達，并在體外實驗中促進其遷移和侵襲，提示ARPC4的高表達可促進其轉移，同時提示ARPC4代表了該疾病轉移的潛在生物學標志物。同樣，Su等[8]在RNA干擾研究中表明，ARPC4對于結直腸癌細胞有效遷移是必需的。Xu等[9]研究顯示，膀胱癌組織中 ARPC4 的表達高于正常組織。多元Logistic分析表明，作為危險因素的ARPC4水平與淋巴結轉移有關，并且在膀胱癌組織中表達上調，抑制ARPC4 表達可顯著減弱膀胱癌細胞的增殖、遷移和侵襲。ARPC4對于促進膀胱癌淋巴結轉移有相關性，ARPC4的水平可能預測膀胱癌淋巴結轉移的可能性大小，抑制ARPC4的表達可能對于膀胱癌淋巴結轉移有效，可能是下一個治療膀胱癌的研究方向。

三、多形性腺瘤基因蛋白2

多形性腺瘤基因家族包括 PLAG1、PLAGL1和PLAGL2[10]。多形性腺瘤基因蛋白2(polymorphic adenoma gene-like protein 2，PLAGL2)在大部分腫瘤組織中均過表達，如肺癌、胃癌、大腸腺癌和前列腺癌[11,12]。Qu等[13]通過免疫組化的方式分析了膀胱尿路上皮癌、伴淋巴結轉移和癌旁膀胱組織，得出膀胱尿路上皮癌和伴有淋巴結轉移PLAGL2過表達，且伴有淋巴結轉移的PLAGL2最高。PLAGL2的過表達還與轉移、預后以及術后的復發(fā)呈正比。PLAGL2與腫瘤的直徑、分期、分級、多樣性也有關。最后Qu等[13]研究結果表明，PLAGL2可作為盆腔淋巴結轉移的獨立預測因子，PLAGL2也可以用作膀胱癌患者無復發(fā)和整體 5 年生存的預測指標。目前PLAGL2在膀胱癌的相關研究文獻較少，需要大量的研究結果驗證。若證實可獨立預測膀胱癌術前淋巴結轉移情況，那么對于術前前瞻性評估淋巴結轉移情況、預后及術后復發(fā)情況都有很大的幫助。

四、亮蛋白

在很多文獻中，亮蛋白(leupaxin，LPXN)與幾種惡性腫瘤有很大的關聯(lián)性，如LPXN在前列腺癌中表達，并有助于調節(jié)癌細胞的黏附和侵襲，LPXN與腫瘤的增殖、遷徙、侵襲和血管生成也有關。Teng等[14]收集了196個石蠟切片用于免疫組化分析，收集了60對速凍膀胱癌和正常尿路上皮標本，并通過EDU標記、流式細胞學分析、Transwell侵襲試驗、質粒，慢病毒感染和轉染、實時定量PCR和腫瘤異種移植等實驗，在73.3%(44/60)的病例中發(fā)現LPXN mRNA表達增加。蛋白質印跡分析表明，LPXN表達在膀胱癌組織中被上調；LPXN表達與膀胱癌患者的晚期腫瘤分期、淋巴結轉移和臨床預后不良有關， LPXN促進了體內和體外膀胱癌細胞的增殖、遷移和侵襲。此外還發(fā)現了LPXN的過表達激活PI3K/AKT信號通路，導致膀胱癌增殖和侵襲增強。雖然對于LXPN在腫瘤中的研究較多，但目前對于LPXN 在膀胱癌的研究較少，對于如何上調LXPN的分子機制還未闡明。LXPN的發(fā)現，可能作為一個生物學標志物來評估腫瘤的轉移及預后，也可能作為一個潛在的治療靶點。

五、緊密連接蛋白

目前緊密連接蛋白(tight junction protein 1，TJP1)在膀胱癌發(fā)病機制中仍不太清楚。有研究報道，與鄰近的正常組織比較，癌組織中的TJP1下調，包括乳腺癌、腸癌、肺癌和肝細胞癌[15,16]。因此，TJP1通常被認為是腫瘤抑制因子，TJP1的高表達與預后呈正相關。Tsai等[17]通過統(tǒng)計分析得出TJP1的高表達與淋巴結轉移不良顯著相關，并且TJP1在膀胱癌伴淋巴結轉移較膀胱癌未伴淋巴結轉移的表達高；在收集人類兩類膀胱癌細胞系T24和RT4細胞系中，統(tǒng)計分析得出TJP1在T24細胞中的mRNA和蛋白表達水平均高于RT4細胞，在侵襲實驗中發(fā)現，T24細胞系比RT4細胞系具有更強的侵襲性，提示TJP1對于膀胱癌的轉移和侵襲是有促進作用的；在敲低后，發(fā)現T24細胞的侵襲性、增殖及集落形成減弱；還首次報道m(xù)iR-455-TJP1軸功能障礙與膀胱癌細胞的轉移和生長有關。但是目前對于TJP1在膀胱癌中的具體機制仍不是十分清楚，關于TJP1在膀胱癌中的研究較少。

六、聚嘧啶束結合蛋白1

Xie等[18]通過體內、體外實驗，得出聚嘧啶束結合蛋白1(polypyrimidine tract binding protein 1，PTBP1)在膀胱癌臨近的正常組織、膀胱癌淋巴結陰性、膀胱癌淋巴結陽性到膀胱癌出現淋巴結轉移，其表達是逐漸上升的；并且PTBP1的表達水平還與淋巴結轉移狀態(tài)、腫瘤分期、組織分級及預測不良預后呈正相關。在敲低PTBP1的表達后，抑制衰老相關分泌表型的促腫瘤作用，PTBP1表達的下調并沒有增加腫瘤形成的風險，而是增加了患者的存活率，降低了腫瘤的形成[19]。雖然關于PTBP1在腫瘤研究報道很多，但目前關于PTBT1在膀胱癌淋巴結中的轉移機制仍然是未知的。

七、PIWI蛋白

人類基因組中基因的轉錄產物大部分是非編碼RNAs，而非編碼RNAs按照片段的大小分為短鏈和長鏈，短鏈中包含short-interfering RNAs(siRNAs)、microRNAs(miRNAs)和PIWI-interacting RNAs(piRNAs)。piRNA 結合argonaute蛋白的PIWI(P-element-inducedwimpy testis)蛋白亞家族發(fā)揮作用，piRNA與生殖干細胞干性的維持、配子形成、胚胎發(fā)育等生殖事件和多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關[20]。目前，人類 PIWI家族成員包括 PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3和PIWIL4。PIWI家族蛋白主要位于細胞質，在多種腫瘤均呈現異常表達，參與調控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。PIWI家族蛋白在胃癌、精原細胞瘤、胰腺癌、乳腺癌、肝癌、膠質瘤等多種腫瘤均呈現異常表達，且在不同的腫瘤組織中有不同的異常PIWI蛋白亞型的表達。Eckstein等[21]通過對95例肌層浸潤性膀胱癌的標本進行免疫組化染色，對細胞質中的PIWI蛋白進行免疫反應評分，發(fā)現PIWIL1免疫反應評分與淋巴結轉移、PIWIL2染色、CK20染色或GATA3染色呈正相關；同樣PIWIL2蛋白也與淋巴結轉移呈正相關；兩種蛋白的表達與淋巴結轉移、CK20染色、GATA3染色呈正相關；兩種PIWI蛋白的表達水平也存在相關性，此外，與疾病特異性生存率、復發(fā)、ki67/MIB1染色、CK5染色呈負相關。

八、核受體結合蛋白1

核受體結合蛋白1(nuclear receptor binding protein 1，NRBP1)是一種廣泛表達的、高度保守的適配蛋白，由人類染色體2p23編碼535aa蛋白。NRBP1在激酶核心中缺乏關鍵的催化殘基，因此被認為是一種假激酶[22]。在不同腫瘤進程中NRBP1所起的承擔不同的作用。小鼠被敲除NRBP1后，其實驗結果認為NRBP1是腸道抑制基因[23]；在肺腺癌、某些類型的淋巴瘤和乳腺癌中NRBP1被認為是抑制腫瘤進展的，但是在前列腺癌中的研究表明其作用是相反的[24～26]。Wu等[22]通過對膀胱癌組織進行免疫組化研究發(fā)現，NRBP1在膀胱癌組織中的表達上調，且染色強度明顯強于癌旁組織，表明NRBP1高表達與膀胱癌預后不良有關，同時NRBP1高表達與腫瘤分期及淋巴結轉移相關，但是與性別、年齡、直徑和腫瘤分級無關。其體外實驗表明，NRBP1基因的下調使膀胱癌細胞系的增殖被抑制，從而使細胞凋亡被促進；在體內實驗中，下調的NRBP1使得膀胱癌細胞生長受到抑制。同時Wu等[22]研究表明，NRBP1受到抑制后，與固有凋亡通路相關的標志物表達增強。但目前關于NRBP1在膀胱癌中的具體機制還不清楚，NRBP1是否是膀胱癌的潛在生物學標志物還需要更多的證據去證明。

九、單羧酸轉運蛋白1

在正常生理pH值條件下，乳酸不能自由通過細胞膜，其轉運主要依靠單羧酸轉運蛋白(monocarboxylate transporter isoform，MCT)。許多惡性腫瘤的特點是在正常供氧情況下，有氧糖酵解仍是主要方式。乳酸堆積過多會導致細胞內pH值下降，而導致細胞凋亡,為使細胞內乳酸堆積減少，研究發(fā)現，腫瘤細胞內MCT的表達會顯著增強，從而應對乳酸堆積而導致的細胞內酸化[27]。李珊等[28]報道了MCT1和MCT4 在腸癌細胞癌變過程中出現高表達，暗示MCT可能作為腫瘤治療的潛在靶點。在腎透明細胞癌中，MCT1高表達與較差的無進展生存相關。Zhang等[29]選取124例膀胱癌患者標本進行免疫組化染色，有53例(42.7%)患者MCT1表達升高；MCT1的高表達與淋巴結轉移(P=0.022)和遠處轉移相關(P=0.005)，MCT1高表達總生存率比低表達短(中位總生存率為36.2個月 vs 51.6個月，P<0.001)；通過體外和體內實驗，發(fā)現MCT1的下調抑制了膀胱癌細胞的增殖、遷移和侵襲；MCT1致癌作用是通過影響上皮間質轉化和有氧糖酵解來表現。

十、展 望

膀胱癌即膀胱尿路移行上皮癌，占膀胱惡性腫瘤的首位。目前在運用蛋白異常去評估膀胱癌淋巴結轉移情況研究較少，且研究的病例數較少，但是不能否認的是，作為一種微創(chuàng)、前瞻性的方法去評估淋巴結轉移情況，可以發(fā)現影像學未能發(fā)現的，但是由于檢測樣本均是術后切除的標本，因此具有滯后性，且組織學取材相對較困難，因此在術前的指導意義有限，但對術后治療方式的選擇具有一定的參考價值。