郝洪丹

（河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲 056038）

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和國(guó)民生活水平的提高，人們對(duì)食品的品質(zhì)要求日益增加，更多人關(guān)注食品安全問(wèn)題，而動(dòng)物性食品中獸藥殘留問(wèn)題受到的關(guān)注度最高。雞蛋作為價(jià)廉質(zhì)優(yōu)的動(dòng)物蛋白質(zhì)來(lái)源，是人們飲食中的普遍食材。根據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)局和聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織數(shù)據(jù)庫(kù)資料對(duì)2016～2020年我國(guó)居民人均蛋類消費(fèi)量和雞蛋年產(chǎn)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，顯示我國(guó)的雞蛋年產(chǎn)量和人均消費(fèi)量都在逐年增加，我國(guó)成為世界雞蛋的主要消費(fèi)國(guó)和生產(chǎn)國(guó)。具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 2016～2020年我國(guó)雞蛋年產(chǎn)量和年消費(fèi)量

1 雞蛋中獸藥殘留現(xiàn)狀

市場(chǎng)監(jiān)管部門對(duì)2020年食用農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)監(jiān)管部門抽檢不合格情況進(jìn)行匯總分析，畜禽類食用農(nóng)產(chǎn)品中獸藥殘留超標(biāo)批次排名前四的依次是雞蛋（249）、雞肉（162）、豬肉（108）、牛肉（82），其中雞蛋中氟苯尼考和恩諾沙星殘留超標(biāo)批次最多。

表2是對(duì)2016～2021年國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管局在全國(guó)食品安全監(jiān)督抽檢蛋制品情況的匯總。數(shù)據(jù)顯示2016年全國(guó)抽檢總數(shù)為5 492批次，之后抽檢批次數(shù)量逐年增加，到2021年達(dá)到30 790批次，比2016年增加了近5倍；而雞蛋抽檢不合格率在逐年下降。這與國(guó)家對(duì)食品安全問(wèn)題非常重視和加大監(jiān)管力度有一定的相關(guān)性。

表2 2016～2021年蛋制品全國(guó)監(jiān)督抽查情況

本文對(duì)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2013～2020年畜禽及其產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控結(jié)果通報(bào)中對(duì)雞蛋樣品獸藥殘留抽檢情況進(jìn)行匯總，詳見表3。

表3 2013～2020年雞蛋樣品抽檢獸藥殘留情況匯總

表3數(shù)據(jù)顯示，2013～2020年雞蛋中抽檢出的殘留獸藥種類多樣，超標(biāo)最多的是氟喹諾酮類；其它是氯羥吡啶、四環(huán)素類和金剛烷胺等。但在文獻(xiàn)中報(bào)道的雞蛋中殘留的獸藥還包括磺胺類、氯霉素類、硝基咪唑類、酰胺醇類、聚醚類及大環(huán)內(nèi)酯類等其它種類獸藥[1,3-4]。

歷年必有的抽檢藥物種類是氟喹諾酮類藥物，包括環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星等品種，除2014年、2018年上半年（下半年數(shù)據(jù)未查到）無(wú)批次獸藥殘留超標(biāo)外，氟喹諾酮類藥物均在歷年中檢出，尤其是2017年雞蛋中氧氟沙星超標(biāo)嚴(yán)重。但也可以看出，自2018年后雞蛋中的獸藥殘留情況有所改善，可能與市場(chǎng)監(jiān)管部門加大監(jiān)督抽檢和治理處罰力度有關(guān)。從總趨勢(shì)看，我國(guó)獸藥殘留狀況總體穩(wěn)中趨好。

2 獸藥殘留的危害

獸藥殘留物可能引起各種副作用，如耐藥性細(xì)菌向人類轉(zhuǎn)移、免疫病理效應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、肝腎毒性、骨髓毒性、心血管毒性、再生障礙性貧血、抑制骨髓發(fā)育、聽覺障礙、呼吸加快、心跳加速、肥胖、性早熟、生殖障礙、肌肉震顫、劇烈腹部疼痛，嚴(yán)重的還會(huì)致畸、致突變、致癌等[2，5]，威脅人類生命安全。各類獸藥殘留物中抗微生物藥物殘留超標(biāo)和檢出違禁藥物現(xiàn)象最普遍。耐藥細(xì)菌引起的感染會(huì)導(dǎo)致病程更長(zhǎng)、死亡率更高、替代治療費(fèi)用增加，目前預(yù)測(cè)表明，到2050年抗菌素耐藥性將導(dǎo)致約3億人過(guò)早死亡。含有藥物殘留的動(dòng)物源性食品也被認(rèn)為是一種公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)[6]。

獸藥殘留還會(huì)通過(guò)糞、尿等途徑進(jìn)入環(huán)境，不僅對(duì)生態(tài)環(huán)境中的動(dòng)植物造成污染，還會(huì)破壞環(huán)境中的微生物群從而影響動(dòng)植物生長(zhǎng)。此外，環(huán)境中殘留的獸藥會(huì)進(jìn)入動(dòng)植物體內(nèi)，然后經(jīng)過(guò)食物鏈再次返回人體內(nèi)，給人體健康安全帶來(lái)二次危害[7]。

3 雞蛋中獸藥殘留檢測(cè)方法

3.1 獸藥殘留前處理的研究現(xiàn)狀

雞蛋中獸藥殘留中有禁用物質(zhì)，但普遍含量較低，因此全蛋樣品勻漿后需要經(jīng)過(guò)前處理提取、凈化純化、富集等步驟，是獸藥殘留檢測(cè)準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)獸藥的溶解性開發(fā)了液液萃取、固相萃?。òǚ稚⒐滔唷⒒|(zhì)固相分散、磁性固相萃取、微萃取等技術(shù)）、離子交換、超臨界流體、加速溶劑萃取、攪拌棒吸附萃取、免疫親和層析法、快速前處理凈化柱、全自動(dòng)固相萃取儀等方法進(jìn)行樣品前處理。根據(jù)獸藥殘留的溶解性，檢測(cè)樣品前處理時(shí)常使用乙腈、乙腈-水溶液或乙腈-緩沖鹽溶液進(jìn)行提取，凈化步驟可對(duì)提取液用正己烷去脂化、二氯甲烷萃取液分配凈化、用氮吹法或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法至近干后再次溶解，也可用陽(yáng)離子交換樹脂柱或固相萃取填充柱凈化以及QuEChERS試劑盒凈化提純等多種方式[8-12]。有研究將全蛋用酸化乙腈提取后經(jīng)過(guò)FaPEx-MN50快速柱等操作前處理，其檢出限為0.02～0.58 μg/kg，簡(jiǎn)單快速，可用于快速篩查檢測(cè)[13]。李明、張振宇利用Oasis系列固相萃取柱凈化對(duì)雞蛋進(jìn)行前處理，超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定，可同時(shí)測(cè)定包括磺胺類、酰胺醇類、喹諾酮類17種獸藥殘留的含量，相關(guān)系數(shù)r在0.993～0.999，檢出限0.1～10 μg/kg，準(zhǔn)確性及重復(fù)性均良好，這種前處理方法簡(jiǎn)便可靠，提高了檢測(cè)效率[14]。

分子印跡技術(shù)是一種新型獸藥殘留前處理手段，以待測(cè)藥物為靶分子，將功能單體與靶分子類似的模板聚合，然后除去模板，制備出的聚合物含有功能單體且可匹配靶分子的空白立體孔穴，全蛋樣品勻漿稀釋后，靶分子經(jīng)立體孔穴與功能單體構(gòu)建而形成印跡聚合物，實(shí)現(xiàn)了靶分子的篩選和富集[15]。有研究者利用分子印跡技術(shù)制備磺胺類分子印跡聚合物微球藥物，并采用吸附選擇性試驗(yàn)、藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)、底物選擇性的測(cè)試實(shí)驗(yàn)等方法對(duì)聚合效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，獲得較好結(jié)果[8]。

1.2.1 對(duì)照組 給予常規(guī)孕期保健，詢問(wèn)既往病史，對(duì)血糖水平進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，定期進(jìn)行產(chǎn)前常規(guī)檢查，建立健康檔案，評(píng)估胎兒生長(zhǎng)發(fā)育情況，指導(dǎo)孕婦進(jìn)行胎動(dòng)計(jì)數(shù)的自我檢測(cè)，進(jìn)行運(yùn)動(dòng)、飲食方面的指導(dǎo)。

3.2 目前國(guó)家抽檢使用的雞蛋中獸藥殘留檢測(cè)方法

農(nóng)業(yè)部頒布實(shí)施的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650）中，規(guī)定了15種藥物在雞蛋中的殘留限量以及26種產(chǎn)蛋期禁用藥物。農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-18-2008和農(nóng)業(yè)部781公告-6-2006 均適用于雞蛋。農(nóng)業(yè)部《2020年度動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)方法及殘留限量》中使用高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS或LC-MS-MS）對(duì)雞蛋的獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。

3.2.1 高效液相色譜法 高效液相色譜屬于色譜法，使用液體作為流動(dòng)相，通過(guò)高壓輸液系統(tǒng)，使擁有不同極性的溶劑或緩沖液等流動(dòng)相及待測(cè)物泵入裝有小顆粒固定相的高效柱內(nèi)，色譜柱內(nèi)完成各成分的分離，通過(guò)檢測(cè)器進(jìn)行定性定量檢測(cè)分析，可快速在線檢測(cè)。目前此法是應(yīng)用范圍最廣也是最重要的檢測(cè)技術(shù)，具有效率高、檢測(cè)速度快、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)?，F(xiàn)有研究利用柱前衍生-液相色譜熒光檢測(cè)，優(yōu)化前處理?xiàng)l件和儀器條件，用于檢測(cè)雞蛋中的哌嗪，效果良好[8]。高效液相色譜廣泛應(yīng)用于β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、酰胺醇類、磺胺類、喹諾酮類的殘留檢測(cè)[16]，汪竟芝等研究者將雞蛋樣品先用甲醇振蕩再經(jīng)過(guò)超聲波提取，通過(guò)優(yōu)化高效液相色譜條件，同時(shí)對(duì)雞蛋中4種激素殘留量（雌二醇、雌三醇、雌酮與睪酮）進(jìn)行測(cè)定，其檢出限為0.06～0.17 mg/kg，其回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差良好，可重復(fù)性好，操作比較簡(jiǎn)單[17]。

3.2.2 液相色譜-質(zhì)譜法 高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用是上世紀(jì)70年代開始發(fā)展的分析技術(shù)，通過(guò)用高效液相色譜分離待測(cè)物質(zhì)經(jīng)過(guò)接口技術(shù)用質(zhì)譜儀器進(jìn)行檢測(cè)，達(dá)到對(duì)待測(cè)物的定性定量分析。液相色譜-質(zhì)譜法具有應(yīng)用范圍廣、分辨率高、靈敏度好的特點(diǎn)。目前高效液相或超高效液相和高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是高通量獸藥殘留檢測(cè)的重點(diǎn)研究方向，包括高效液相或超高效液相與三重四極桿質(zhì)譜、靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜、離子肼質(zhì)譜、飛行時(shí)間質(zhì)譜、四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜、磁質(zhì)譜、傅里葉變換質(zhì)譜等聯(lián)用的研究。有研究用液相-靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)雞蛋中磺胺喹噁啉、二甲氧芐啶的殘留，檢出限為0.1～0.2 μg/kg，回收率良好[18]。劉建宇創(chuàng)建了超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用可達(dá)三級(jí)四級(jí)桿（UPLC-MS/MS）和高效液相質(zhì)譜聯(lián)用三級(jí)四級(jí)桿（HPLC-MS/MS）的方法用于雞蛋清、雞蛋黃、全蛋中的8種抗球蟲藥物的測(cè)定，用針泵吸取氯苯胍、拉沙菌素、鹵夫酮、鹽霉素、甲基鹽霉素、尼日利亞菌素、莫能菌素和馬杜霉素的工作液，利用ESI掃描，一級(jí)質(zhì)譜圖確定目標(biāo)物母離子，二級(jí)質(zhì)譜選取子離子，結(jié)果表明：兩者標(biāo)準(zhǔn)曲線均有良好線性關(guān)系，超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用靈敏度更好[8，19]。

3.3 其它檢測(cè)方法

3.3.1 微生物學(xué)法 一是微生物抑制檢測(cè)技術(shù)，常用于獸藥殘留的初次篩選，具有操作簡(jiǎn)單、成本低、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，目前可有效地對(duì)雞蛋中喹諾酮類和四環(huán)素的殘留進(jìn)行檢測(cè)[20，21]。

二是受體的放射配體結(jié)合分析檢測(cè)技術(shù)，其通過(guò)受體與放射性標(biāo)記配體的特異性結(jié)合反應(yīng)，可對(duì)受體進(jìn)行定位及定量檢測(cè)的分析方法。目前已完成了商品化，對(duì)獸藥殘留的種類可以快速并準(zhǔn)確地篩選出來(lái)，靈敏度高，穩(wěn)定性好，使用效果良好。目前可用于磺胺類藥物、四環(huán)素類藥物和大環(huán)內(nèi)酯類藥物的殘留檢測(cè)[21]。

3.3.2 薄層色譜檢測(cè)技術(shù) 本技術(shù)是傳統(tǒng)的理化檢測(cè)手段，具備操作方法簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、成本低等優(yōu)勢(shì)，缺點(diǎn)是分辨力較低、靈敏度以及重現(xiàn)性相對(duì)較差，應(yīng)用范圍較小。目前已有研究者創(chuàng)建了高效薄層色譜檢測(cè)方法，其檢測(cè)的適用性和應(yīng)用范圍都得到了很好的提升[8，21]。

3.3.3 免疫分析法 一是酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)，是一種基于酶標(biāo)記物的免疫檢測(cè)技術(shù)，它是一種利用固相載體對(duì)抗原/抗體和抗原進(jìn)行吸附的方法。檢測(cè)氟喹諾酮類藥物殘留其靈敏度可達(dá)0.13 ng/mL，該方法可快速測(cè)定雞蛋中的氟喹諾酮類藥物，但缺點(diǎn)是檢測(cè)結(jié)果為氟喹諾酮類藥物的總量，僅能作為初篩使用[8-10，22]。

二是熒光免疫檢測(cè)法，它是以熒光物質(zhì)和潛熒光物質(zhì)作為主要標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)。目前時(shí)間分辨熒光免疫分析方法、熒光偏振和猝滅等熒光免疫分析技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展，檢出限可為2.4 ng /mL，其靈敏度比ELISA可提升1.5倍，檢測(cè)時(shí)間也減少0.5 h[21，23]。

三是膠體金免疫檢測(cè)法，其所用的主要標(biāo)記物是膠體金顆粒，可對(duì)樣品中的獸藥殘留高效快速準(zhǔn)確地檢出。此方法操作較為簡(jiǎn)便、靈敏度較高，常見的喹諾酮類膠體金檢測(cè)卡可對(duì)雞蛋中獸藥殘留進(jìn)行快速檢測(cè)[21]。有研究者用雞蛋中膠體金試紙條檢測(cè)呋喃唑酮代謝物殘留量，其最低檢測(cè)限可達(dá)0.02 μg/kg，實(shí)現(xiàn)了高靈敏度和快速檢測(cè)[24]。

四是免疫傳感器技術(shù)，是一種新型免疫檢測(cè)方法，將免疫分析方法和生物傳感技術(shù)有機(jī)結(jié)合形成的新型生物傳感器，具有檢測(cè)快速、特異性強(qiáng)、高靈敏度和準(zhǔn)確性等優(yōu)點(diǎn)?？捎糜跈z測(cè)伊維菌素、硝基咪唑類藥物、氯霉素等藥物殘留[21，25]。

3.3.4 氣相色譜法 氣相色譜法具有檢測(cè)快速、分離效率高、較強(qiáng)選擇性、高靈敏度、檢出限低且穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)結(jié)果可達(dá)μg/kg級(jí)別，但樣品的前處理需衍生化來(lái)避免受到藥物較高極性和沸點(diǎn)的影響，應(yīng)用范圍并不廣。有研究建立了雞蛋中氯霉素、滴滴涕、六六六的藥物殘留檢測(cè)方法，檢測(cè)效果良好[2，21]。

3.3.5 毛細(xì)管電泳法 毛細(xì)管電泳是一種用彈性石英毛細(xì)管作為分離泳道，并用高壓直流電驅(qū)動(dòng)，根據(jù)樣品在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下各組分在泳道中的定向遷移速度和分配差異而分離的新型液相分離技術(shù)，具有分離效率高且速度快的優(yōu)點(diǎn)，但由于樣品進(jìn)樣量少其靈敏度不高。目前已有研究者將電化學(xué)分析方法和毛細(xì)管電泳技術(shù)結(jié)合，優(yōu)化分離條件，可用于雞蛋中土霉素及四環(huán)素的殘留限量檢測(cè)。有研究者用膠束溶劑堆積富集法進(jìn)行區(qū)帶電泳，優(yōu)化條件，創(chuàng)建了高效毛細(xì)管電泳對(duì)雞蛋中磺胺類藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)1.0 ng/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.999[7-9，26]。

3.3.6 熒光分析法 熒光分析具有高靈敏度、強(qiáng)選擇性的優(yōu)點(diǎn)，因此在獸藥殘留檢測(cè)中得到較廣泛的應(yīng)用。有研究者通過(guò)選擇檢測(cè)條件，創(chuàng)建了使用熒光分光光度計(jì)對(duì)雞蛋中恩諾沙星和環(huán)丙沙星殘留進(jìn)行同時(shí)測(cè)定的方法[8]。趙進(jìn)輝等研究者結(jié)合表面增強(qiáng)熒光技術(shù)，使土霉素的熒光特性得到加強(qiáng)，再通過(guò)熒光分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)效果良好[27]。

3.3.7 化學(xué)發(fā)光分析法 化學(xué)發(fā)光又叫冷光，化學(xué)發(fā)光分析法是利用化學(xué)反應(yīng)、生物化學(xué)反應(yīng)、電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生反應(yīng)能，產(chǎn)生電子激發(fā)態(tài)產(chǎn)物，使分子本身或引起其它會(huì)發(fā)光分子發(fā)生輻射躍遷而發(fā)光的一種新型的分析技術(shù)，可分為普通化學(xué)發(fā)光分析、生物化學(xué)發(fā)光分析、電致化學(xué)發(fā)光分析，具有極高的靈敏度、較好的選擇性、相對(duì)簡(jiǎn)單的儀器、線性范圍寬、分析速度快、效率高等優(yōu)點(diǎn)。有研究者通過(guò)流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法對(duì)雞蛋中喹諾酮類藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，確定了檢測(cè)不同藥物的發(fā)光體系，優(yōu)化其它檢測(cè)條件，效果良好[8]。

3.3.8 分光光度法 分光光度法是被測(cè)樣品在特定波長(zhǎng)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定其對(duì)光的選擇性吸收度，產(chǎn)生特有吸收光譜，可用于樣品的定性和定量分析。常見的有比色法、紅外光譜法和紫外-可見分光光度法。本方法靈敏度高、速度快、操作簡(jiǎn)單，但是準(zhǔn)確度比不上色譜法等，較少用于獸藥殘留檢測(cè)。有研究者通過(guò)篩選雞蛋液的沉淀試劑，將分光光度法用于四環(huán)素的殘留測(cè)定，效果良好[8，21，28]。

4 展望

隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)水平必將不斷提升，且會(huì)更加趨向于高通量智能化和操作簡(jiǎn)單、方便攜帶。例如分子印跡仿生柱、新萃取方法（氣象萃取、吸附萃取、液膜萃取、膜萃取、微波輔助萃取等）、親和免疫層析柱、新型碳納米材料、石墨烯材料、超分子材料等用于獸藥殘留檢測(cè)的樣品前處理過(guò)程，將會(huì)提高獸藥殘留的提取和富集，加強(qiáng)檢測(cè)準(zhǔn)確性；利用核酸適配體、親合配體、重組抗體等新型生物識(shí)別物質(zhì)，可有效地提高檢測(cè)效率；結(jié)合熒光偏振、熒光磁性分子印記傳感器、熒光微球、抗體芯片、半導(dǎo)體納米晶體、生物傳感器等新型生物信號(hào)輸出技術(shù)的結(jié)果檢測(cè)，其精確度將得到很大提升[29]。隨著獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的不斷優(yōu)化和更新發(fā)展，以及在食品領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，這會(huì)大大提高食品中獸藥殘留檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確性，對(duì)保障消費(fèi)者健康、提高食品質(zhì)量安全以及對(duì)食品安全工作的開展具有非常重要的意義。