崔鈺杰,鄒克興,陳義昌,劉 領(lǐng),王小東,梁 偉

（1.河南科技大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023；2.廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，廣西 南寧 530000）

煙草歷來(lái)是我國(guó)重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)作物，其種植時(shí)間大約可追溯到16世紀(jì)末至17世紀(jì)初，相繼由菲律賓傳入福建，由越南傳入廣東，由朝鮮傳入遼東。煙葉原料的采集主要包括煙葉采收、煙葉烘烤及打葉復(fù)烤等步驟，烘烤后的煙葉雖然在內(nèi)部質(zhì)量上得到一定的提升改善，但因煙葉的青雜氣較重，對(duì)人體產(chǎn)生的刺激作用較大。而煙葉醇化是能改變煙葉復(fù)烤后所產(chǎn)生的青雜氣和吸食味道過(guò)重的技術(shù)之一，微生物和酶技術(shù)是能夠促進(jìn)煙葉醇化進(jìn)而改善煙葉品質(zhì)的技術(shù)手段，其優(yōu)點(diǎn)在于醇化效果較好、易于提取、操作簡(jiǎn)便等，具有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外有關(guān)微生物和酶技術(shù)促進(jìn)煙葉醇化的相關(guān)應(yīng)用研究進(jìn)行綜述，為縮短煙葉醇化時(shí)間和提升煙葉品質(zhì)提供理論和科學(xué)依據(jù)。

1 微生物菌種在煙葉醇化中的機(jī)理研究

1.1 醇化煙葉表面微生物的菌種和菌群

煙葉中富含較多的微生物菌種和菌群，該菌群能促使煙葉中內(nèi)部的化學(xué)反應(yīng)。1953年，西班牙人TAMAYO 等［1］從煙葉樣本中分離到芽孢桿菌（Bacillus bacteria）和球菌（Aaureus bacteria）。1972年，美國(guó)學(xué)者POUNDS 等［2］從很多煙葉樣本中分離出微生物菌株，如嗜熱性酵母菌以及細(xì)菌等。

國(guó)內(nèi)煙草研究者對(duì)煙葉中的微生物菌種和菌群研究起步較晚。1990年，謝和等［3］以烤煙NC82為試驗(yàn)材料，對(duì)葉片表層微生物種類(lèi)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，烤煙表面有細(xì)菌、放線(xiàn)菌及霉菌。1997年，韓錦峰等［4］以未進(jìn)行自然發(fā)酵、人工發(fā)酵、陳化的烤煙為試驗(yàn)材料，探究煙葉表面的微生物數(shù)量并對(duì)發(fā)酵階段微生物的改變進(jìn)行研究。結(jié)果表明，未發(fā)酵烤煙葉面微生物數(shù)量最多，隨著自然陳化及人工發(fā)酵的進(jìn)行，烤煙葉面微生物數(shù)量均逐漸減少，且出現(xiàn)的芽孢桿菌屬以及梭狀芽孢桿菌屬為優(yōu)勢(shì)種群。2000年，邱立友等［5］對(duì)烤煙NC89、K326 和紅花大金元（以下簡(jiǎn)稱(chēng)紅大）3 個(gè)烤煙品種的煙樣葉面微生物的數(shù)量、種類(lèi)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)3個(gè)品種的烤煙葉面均存在有細(xì)菌和霉菌，但沒(méi)有酵母菌，紅大品種烤煙葉面沒(méi)有放線(xiàn)菌。各個(gè)煙樣的葉面微生物中，細(xì)菌的數(shù)量最多且是優(yōu)勢(shì)微生物，而霉菌所占的比例較小，放線(xiàn)菌所占的比例最少。自然發(fā)酵烤煙的葉面微生物數(shù)量及種類(lèi)與烤煙品種、產(chǎn)地、級(jí)別以及陳化時(shí)間之間有一定關(guān)系，品質(zhì)越好，葉面微生物的數(shù)量越大，種類(lèi)越多；同一品種的烤煙，等級(jí)高的煙葉葉面微生物的數(shù)量較大，種類(lèi)也較多。2008年，楊金奎等［6］以云南烤煙品種K326 為試驗(yàn)材料，對(duì)不同醇化時(shí)間煙葉的表面微生物進(jìn)行分離，并通過(guò)分子生物學(xué)方法對(duì)分離到的微生物的種、屬分類(lèi)學(xué)水平和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果表明，K326 表面的細(xì)菌以芽孢桿菌屬及腸桿菌屬2個(gè)菌群為主，芽孢桿菌屬的細(xì)菌是優(yōu)勢(shì)微生物類(lèi)群。此外，煙葉部位等級(jí)與細(xì)菌數(shù)量也呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，即在相同醇化時(shí)間的煙樣中，中部煙葉樣品的細(xì)菌數(shù)量高于下部煙葉，而上部煙葉樣品中的細(xì)菌數(shù)量最少；細(xì)菌的種類(lèi)和煙葉樣品的部位等級(jí)之間沒(méi)有明顯的相關(guān)關(guān)系。該研究結(jié)果表明，利用可培養(yǎng)微生物進(jìn)行分離鑒定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，確定煙葉樣品中微生物種群之間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，根據(jù)優(yōu)勢(shì)微生物的數(shù)量和種群研制微生物添加劑應(yīng)用到煙葉中，能夠快速達(dá)到煙葉醇化的目的，加速醇化進(jìn)程改善煙葉品質(zhì)。

1.2 微生物菌種改善煙葉品質(zhì)的機(jī)制

糖與蛋白質(zhì)是微生物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必不可少的2種物質(zhì)。在微生物繁殖過(guò)程中，通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行降解及對(duì)不同類(lèi)型微量元素的吸收形成不同種類(lèi)的氨基酸和生物酶。糖在微生物繁殖過(guò)程中經(jīng)過(guò)發(fā)酵，分解成各種類(lèi)型有機(jī)物及有機(jī)酸等，產(chǎn)生的有機(jī)物及有機(jī)酸可產(chǎn)生一定的香味。微生物的繁殖及代謝產(chǎn)生的香氣物質(zhì)可使煙葉內(nèi)的香氣成分改變，有效增加煙葉香氣。趙銘欽等［7］以河南省郟縣烤煙品種NC89為試驗(yàn)材料，對(duì)烤煙葉片中的微生物活力、酶活力、過(guò)氧化物酶活力、蛋白酶活力、α-淀粉酶活性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，在陳化過(guò)程中，烤煙煙葉中具有多酚氧化酶、過(guò)氧化物酶、蛋白酶和α-淀粉酶活性。多酚氧化酶、蛋白酶和α-淀粉酶活性在陳化初期逐漸增加，中后期逐漸降低。多酚氧化酶和過(guò)氧化酶以及增加的蛋白酶和α-淀粉酶活性可能與微生物的活性有關(guān)。由此推斷微生物與酶在一起構(gòu)成了烤煙煙葉的生物活性，烤煙煙葉葉面活性可能是推動(dòng)烤煙自然發(fā)酵的催化劑。所以，需要適當(dāng)增加微生物和酶，進(jìn)而縮短醇化時(shí)間提升煙葉品質(zhì)。

2 微生物在煙葉醇化中的應(yīng)用

2.1 降解煙葉中有害成分

1954年，WADA 等［8］利用土壤中分離出來(lái)的假單胞細(xì)菌（Pseudomonas）中的第41小種處理煙堿溶液24 h 后，煙堿含量大幅降低，微生物數(shù)量增大，且由于pH 的降低和菌落數(shù)的增大，煙堿的分解停止。1957年，美國(guó)的FRANKENBURG 等［9］發(fā)現(xiàn)，煙堿的降解主要發(fā)生在晾制的初始階段，可降解煙堿的細(xì)菌有10 個(gè)屬17 種，其主要有假單胞菌、煙草假單胞菌、惡臭假單胞桿菌、纖維單胞菌、爭(zhēng)論產(chǎn)堿菌等菌種。陳興等［10］以云南烤煙煙梗為試驗(yàn)材料，將短小芽孢桿菌V35 菌株（Ba?cillus pumilusVan35）制成的菌劑用于梗絲處理。結(jié)果表明，利用V35 菌劑處理后，梗絲的總糖和還原糖均較對(duì)照有所上升，總氮含量下降，纖維素和果膠含量降低，總揮發(fā)香氣物質(zhì)量上升，總氮含量下降，V35 菌劑還可有效減少其雜氣對(duì)呼吸道的刺激，增加梗絲香氣量。薛磊等［11］以云南昆明、曲靖、保山等產(chǎn)地的醇化煙葉為微生物樣品源，利用逐級(jí)稀釋法、菌株酶活性篩選等方法對(duì)菌株產(chǎn)酶功能進(jìn)行篩選，并對(duì)煙絲發(fā)酵樣品的感官質(zhì)量、香味成分、煙氣有害成分釋放量進(jìn)行分析。結(jié)果表明，從供試云南微生物分離源樣品中分離、篩選到可同時(shí)產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和果膠酶的微生物菌株；將該菌株組合形成復(fù)合微生物配方噴施到煙絲上發(fā)酵，發(fā)酵后的煙絲樣品細(xì)膩度有所改善，香氣質(zhì)和香氣量均有增加，雜氣減輕。馬林［12］以河南靈寶烤煙B3K 為試驗(yàn)材料，用酶和微生物處理煙葉，并采用煙草蛋白水解法測(cè)定煙葉化學(xué)成分。結(jié)果表明，用酶和微生物處理后，煙葉中的蛋白質(zhì)、煙氣中有害氣體、焦油生成量均有明顯下降，利用酶解法和微生物發(fā)酵法能明顯提高煙葉的吸食安全性。楊宗燦等［13］從河南、福建、云南3 省的復(fù)烤煙葉表面篩選出降解蛋白質(zhì)能力較強(qiáng)的菌株，通過(guò)測(cè)定產(chǎn)蛋白酶活性、16S rDNA 測(cè)序、生理生化試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行鑒定后，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化菌株在煙葉中的發(fā)酵條件，考察處理后煙葉的感官質(zhì)量改善效果。結(jié)果表明，HN-3 為優(yōu)選菌株，與短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）的同源性高達(dá)100%，將HN-3 菌液按照3%的煙葉質(zhì)量比例施加于抽梗后的煙葉表面，在37℃條件下發(fā)酵84 h 后，煙葉中蛋白質(zhì)降解率可達(dá)29.66%，短小芽孢桿菌HN-3能有效降解煙葉中的蛋白質(zhì)，且能顯著改善煙葉的整體感官質(zhì)量。

尼古丁［1-甲基-2-（3-吡啶基）-吡咯烷］，俗名煙堿，是一種存在于茄科植物（茄屬）中的生物堿，是煙草的重要成分，占煙葉干重的2%～8%［14］。尼古丁會(huì)使人產(chǎn)生依賴(lài)或上癮，大量攝入尼古丁能增加心跳速率，導(dǎo)致血壓升高并降低食欲，嚴(yán)重的還能引起心血管疾病、癌癥、基因突變、畸形等疾病發(fā)生。生物降解法是消除降解煙葉中尼古丁含量最有效的方法。陳辰等［15］以湖南省郴州市煙草種植基地的煙草為試驗(yàn)材料，從樣品中提取尼古丁降解菌ZUC-3，并對(duì)不同條件下的尼古丁降解特性進(jìn)行研究。結(jié)果表明，ZUC-3的適宜發(fā)酵條件為溫度30℃、起始pH 7.0、接種量10%、培養(yǎng)轉(zhuǎn)速180 r/min，該條件下，尼古丁降解率可達(dá)91.53%。李天麗等［16］從醇化煙葉中分離得到可降解煙堿活性的菌群Q6，從菌群Q6 中得到1 株煙堿降解菌D1，經(jīng)菌落形態(tài)、生理生態(tài)等相關(guān)性研究，將其鑒定為根癌土壤桿菌。該菌種可有效降解煙葉中的煙堿，從而達(dá)到煙葉醇化效果。這也為尼古丁的生物降解提供了新的微生物資源和技術(shù)手段。

2.2 提升煙葉品質(zhì)

研究表明采用煙葉表面接種微生物的方法可提升煙葉醇化，改善煙葉品質(zhì)，提升煙葉香氣［17］。黃靜文等［18］從烤煙葉面上分離選擇獲得一株短小芽孢桿菌Van35，將其制成菌劑噴施于煙絲，在45°C，60%溫濕度條件下發(fā)酵21 d。結(jié)果表明，發(fā)酵后的煙絲中總糖、還原糖和鉀含量升高，纖維素、蛋白質(zhì)、總氮和煙堿含量均有所下降。陳興等［19］用酪蛋白培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對(duì)醇化煙葉上分離出的細(xì)菌進(jìn)行篩選得到降解蛋白質(zhì)能力較強(qiáng)的菌株P(guān)E1，對(duì)其蛋白酶活性的測(cè)定表明，PE1 菌株的蛋白酶活性最高，將PE1 的粗酶液用于煙絲處理，煙絲蛋白質(zhì)的分解率隨著處理濃度的提高而增加，煙絲的感官品質(zhì)也有所改善。衛(wèi)青等［20］以紅花大金元煙葉品種為試驗(yàn)材料，從中篩選出一株產(chǎn)蛋白酶及多糖酶的真菌RSCT26，經(jīng)分離純化的RSCT26 進(jìn)行培養(yǎng)，其菌落外觀呈圓形，黑褐色，培養(yǎng)7 d直徑約為5.5 cm。通過(guò)對(duì)醇化紅大煙葉表面分離的產(chǎn)蛋白酶及多糖酶的菌株RSCT26 進(jìn)行鑒定，該菌株為鏈格孢屬（Al?ternaria alternata）。煙葉經(jīng)RSCT26 菌劑處理后，煙膏中可溶性總糖和還原糖含量顯著增加，蛋白質(zhì)和總氮含量降低，再造煙葉產(chǎn)品經(jīng)感官評(píng)吸香氣量較足，煙葉青雜氣和品質(zhì)方面都有明顯的改善。庹有朋等［21］以四川涼山云85（C3F）、2015年四川攀枝花云85（C4F）、2015年云南曲靖云85（C3F）、2015年云南楚雄云85（C2F）、2017年四川攀枝花云85（C3F）5 種煙葉等級(jí)為試驗(yàn)材料，分析煙葉中微生物的菌群數(shù)量和優(yōu)勢(shì)微生物種群，共篩選出22 株優(yōu)勢(shì)菌株并添加到煙葉發(fā)酵中，控制對(duì)煙葉發(fā)酵的醇化條件，對(duì)發(fā)酵醇化的煙葉進(jìn)行感官評(píng)吸與分析檢測(cè)。結(jié)果表明，煙葉中微生物主要以腸桿菌屬、芽孢桿菌屬為主，經(jīng)過(guò)7 個(gè)月發(fā)酵發(fā)現(xiàn)，添加Enterobac?ter hormaechei strain C4、Enterobacter hormaechei subsp.steigerwaltii strain34998、Peanibacillus polymyxa strain HY96-2、Bacillus licheniformis strain MER TA88、Bacillus licheniformis strain POTC5 種菌株的煙葉，其香氣值、香氣量有明顯的提升，刺激性、青雜氣味得到有效控制，達(dá)到了發(fā)酵2～3年成熟發(fā)酵煙葉的效果。經(jīng)理化檢測(cè)，煙葉中的還原糖、總糖的含量都高于自然發(fā)酵的煙葉，植物堿與總氮都呈下降的趨勢(shì)，氮堿比、糖堿比、施木克值均優(yōu)于自然發(fā)酵，煙葉經(jīng)發(fā)酵后向高品質(zhì)發(fā)展。對(duì)發(fā)酵后煙葉進(jìn)行高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)，添加的微生物成為優(yōu)勢(shì)主導(dǎo)發(fā)酵微生物，占微生物總量的30%以上，對(duì)煙葉醇化發(fā)酵過(guò)程中的物質(zhì)變化起到關(guān)鍵作用。阮祥穩(wěn)等［22］利用復(fù)合酶（纖維素酶、蛋白酶），在48℃、65%的相對(duì)濕度條件下對(duì)B3F、C3F、X3F 煙葉進(jìn)行醇化。結(jié)果表明，發(fā)酵后煙葉的總氮含量與煙堿含量變化不大，總糖含量比對(duì)照樣品分別提高16.8%、16.2%、11.7%，平均提高14.9%。其中上部煙葉B3F增幅最大，下部煙葉X3F增幅最小，處理后煙葉的總糖含量趨于較佳值。經(jīng)酶處理后煙葉的綜合評(píng)吸效果有較大提高，煙葉品質(zhì)有明顯改善，其中香氣質(zhì)變好，香氣量增加，雜氣和刺激性減小。

隨著我國(guó)科學(xué)技術(shù)的迅速提升，技術(shù)手段和設(shè)備有了質(zhì)的改變，一些煙草科研工作者嘗試?yán)眯碌奈⑸锛夹g(shù)融合來(lái)促進(jìn)煙葉醇化的品質(zhì)。李源棟等［23］在煙草根際土壤中提取得到溶桿菌（C8-1），該菌能夠產(chǎn)生苯甲醛、欖香烯、欖香醇、α-桉葉醇。將噴施菌劑的煙絲放入恒溫恒箱內(nèi)發(fā)酵48 h，與對(duì)照組相比，其總糖、還原糖含量增加較大，總氮、纖維素、蛋白質(zhì)、煙堿含量有所下降，糖氮比、糖堿比、氮堿比有所改善。該處理加速了煙葉發(fā)酵，提高了煙葉等級(jí)質(zhì)量。張展等［24］通過(guò)微膠囊化技術(shù)，將微生物制劑和酶制劑進(jìn)行包裹，形成利于微生物存活的微環(huán)境，從而利于微生物制劑及生物酶在煙葉表面較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)發(fā)揮作用，加速煙葉中大分子物質(zhì)的降解，縮短煙葉醇化周期。劉劍鋒等［25］以釀酒葡萄為原料，利用其自帶的微生物及果肉中的糖分，在24～28℃下自然發(fā)酵制得天然酵母。該天然酵母在1～5℃環(huán)境中冷藏保持活性，經(jīng)復(fù)蘇熟成后，按5.0%～8.0%的用量施加于潤(rùn)葉后的煙片，葉片在相對(duì)濕度70%～80%、溫度25～28℃與28～32℃環(huán)境下分兩個(gè)階段分別陳化36～40 h，即可達(dá)到煙葉醇化要求。該方法易操作、發(fā)酵快，陳化周期短。郝捷等［26］將煙草物料上料后切片使物料松散回潮；然后對(duì)煙草物料進(jìn)行生物質(zhì)噴灑（生物質(zhì)料為蒸汽和酶制劑等體積混合的混合物），將噴灑后的煙草料物在密閉空間發(fā)酵20～150 h，溫度為30～100℃，濕度為40%～100%，對(duì)完成發(fā)酵后的物料進(jìn)行干燥、包裝。該方法能夠快速進(jìn)行發(fā)酵，提高了發(fā)酵效率、簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝。馬俊紅等［27］在煙葉中提取一株高地芽孢桿菌J54，將該菌株制成菌劑按照煙絲重量的3%～5%進(jìn)行噴施，發(fā)酵4～7 d。結(jié)果表明，高地芽孢桿菌J54可在煙葉調(diào)制或制絲過(guò)程中有效降解煙草中特有的亞硝胺（TSNAs），其降解率達(dá)5.2%～46.6%，從而改善煙葉品質(zhì)。孫蘭茜等［28］利用一種含蠟狀芽孢桿菌的生物制劑膠囊和調(diào)制后原煙煙葉進(jìn)行混合，再將煙葉進(jìn)行醇化處理，在自然醇化溫度下，生物制劑膠囊囊皮從固體凝膠狀變化為溶膠裝，內(nèi)部的苯乙酸甲酯流出與煙葉表面接觸，將煙葉表面的蠟質(zhì)溶解，再通過(guò)囊皮內(nèi)負(fù)載的角質(zhì)進(jìn)行分解，最終通過(guò)膠囊內(nèi)的微生物對(duì)煙葉進(jìn)行發(fā)酵處理，從而縮短醇化時(shí)間，提高煙葉品質(zhì)。蘇加坤等［29］將可增加煙絲香氣和加速煙絲陳化的菌株BA-01 制成生物制劑，該生物制劑短小芽孢桿菌BA-01的活菌數(shù)達(dá)109～1011CFU/g，使用時(shí)稱(chēng)取0.001～0.015 g 生物制劑溶于1～10 mL 無(wú)菌水中，將其均勻噴灑于10～40 g晾曬煙絲，經(jīng)噴施處理的煙葉，其香氣更加充足，減少了刺激性，雜氣減弱，同時(shí)縮短了陳化周期。

3 酶技術(shù)在煙葉醇化中的應(yīng)用

1965年，美國(guó)菲利浦·莫里斯公司的SPANN 等［30］將煙含量約一半的煙末制成固形物稠漿，添加纖維素酶35，在室溫條件下進(jìn)行發(fā)酵后制成煙草薄片，然后利用低量酶、甘油及乙酸對(duì)該煙草薄片進(jìn)行處理。結(jié)果表明，處理后的煙草薄片刺激程度較低，甜味重。賀兆偉等［31］采用透明圈法和發(fā)酵液果膠酶檢測(cè)法從醇化煙片中篩選出1 株酶活較大的菌株TS63-9，初步鑒定為疣孢青霉（Peni?cillium verruculosum），該菌株產(chǎn)生的果膠酶在高溫條件下具有較高的反應(yīng)活性。楊慶等［32］以初烤煙葉為原料，研究復(fù)合酶對(duì)煙葉的醇化效果。結(jié)果表明，復(fù)合酶醇化后的煙葉，其物理構(gòu)造出現(xiàn)改變，感官品質(zhì)有一定的改善。王慧等［33］利用一種復(fù)合酶制劑來(lái)增加煙片醇厚度及香甜氣。將單酶活力在1 000～40 000 U/L 的復(fù)合酶制劑在煙片發(fā)酵過(guò)程中噴灑到煙片表面，其添加量為煙片總質(zhì)量的0.1%～3.0%，在煙片發(fā)酵或卷煙配方過(guò)程中于20～40℃下保持1～24 h。結(jié)果表明，復(fù)合酶制劑可對(duì)煙草中的蛋白質(zhì)、纖維素、木質(zhì)素及煙堿等物質(zhì)進(jìn)行降解，并生成氨基酸、單糖/寡糖、醇類(lèi)等物質(zhì)有助于提升其飽滿(mǎn)度、香氣的豐富度和層次感。紀(jì)旭東等［34］將一種黑曲霉（Aspergillusniger）所生產(chǎn)的葡萄糖淀粉酶應(yīng)用到煙葉發(fā)酵中，其接種量為106CFU/mL。通風(fēng)量為1∶1.0V/V·min，溫度為30℃，時(shí)間為3 d。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，黑曲霉能使煙葉中總糖含量升高，淀粉含量明顯降低，經(jīng)過(guò)處理的煙葉其煙氣柔順、細(xì)膩度和舒適度均有提升。米其利等［35］將一種減少煙葉特有亞硝胺的復(fù)合酶制劑均勻噴施至晾曬棚內(nèi)的煙葉的兩面，每桿煙葉噴施100～120 mL 復(fù)合酶制劑混懸液，然后將噴施處理后的煙葉置于晾曬棚內(nèi)，自然晾曬調(diào)制10～13 d。經(jīng)過(guò)復(fù)合酶制劑的處理，曬黃煙調(diào)制煙葉中亞硝胺（TSNAs）含量降低26.40%～36.81%。葉亞軍等［36］將具有產(chǎn)高酶活力中性蛋白酶的米曲霉（Asper?gillus oryzae）LCCC30141 按接種量為105～107CFU/g 添加到煙葉中，在溫度20～40℃，濕度40%～70%條件下處理5～10 d。結(jié)果表明，添加該米曲霉能加速煙葉中蛋白質(zhì)的分解，煙葉中的還原糖、硫、木質(zhì)素有明顯的減少，能明顯縮短煙葉的發(fā)酵周期，明顯改善煙葉品質(zhì)。

4 小結(jié)

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展和工業(yè)制煙技術(shù)的飛速發(fā)展，醇化技術(shù)的重要性越來(lái)越受到煙草公司的廣泛關(guān)注。但是根據(jù)前人研究的結(jié)果來(lái)看，大多數(shù)醇化技術(shù)都表現(xiàn)為菌種單一、微生物菌群之間的關(guān)聯(lián)性較低。優(yōu)勢(shì)微生物的菌種較少、微生物制劑功能性不突出等。部分原因是由于外源生物制劑加快醇化進(jìn)程的設(shè)備條件落后和煙草行業(yè)相關(guān)人才緊缺等因素的限制，使該技術(shù)或?qū)＠煌Ａ粼趯?shí)驗(yàn)室研究階段而未在實(shí)際生產(chǎn)上有大規(guī)模的應(yīng)用，造成科研成果的浪費(fèi)。因此，需通過(guò)各種途徑對(duì)醇化技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，加快醇化新技術(shù)工業(yè)化進(jìn)程的開(kāi)展和落實(shí)。

當(dāng)前，全球經(jīng)濟(jì)一體化依舊在加速進(jìn)程中，國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)也在日益加劇。煙草產(chǎn)業(yè)在今后的發(fā)展過(guò)程中機(jī)會(huì)與挑戰(zhàn)并存；既要加快煙葉醇化研究速度和深度，也要和國(guó)外先進(jìn)煙葉醇化技術(shù)相互融合，對(duì)于提升我國(guó)煙葉質(zhì)量以及增加國(guó)內(nèi)煙草的競(jìng)爭(zhēng)力有著不可忽視的意義。這就要求煙草科技工作者在今后研究中應(yīng)充分發(fā)揮微生物和酶學(xué)技術(shù)的相互融合并將新的技術(shù)手段貫穿于煙葉醇化領(lǐng)域，以達(dá)到規(guī)?；a(chǎn)并提高煙葉醇化效率，使再造煙葉品質(zhì)質(zhì)量進(jìn)一步提升。創(chuàng)新煙葉醇化技術(shù)，將是未來(lái)煙草行業(yè)發(fā)展的主要趨勢(shì)，煙葉醇化技術(shù)勢(shì)在必行。