程中平

（山西省陽(yáng)泉市畜牧技術(shù)服務(wù)中心，山西陽(yáng)泉 045000）

利什曼病是人犬共患傳染病，2009 年利什曼病被列入《人畜共患傳染病名錄》。2015 年以來(lái)，陽(yáng)泉市犬利什曼病呈暴發(fā)性流行趨勢(shì)，與此同時(shí)人感染利什曼病病例快速增長(zhǎng)，發(fā)病率遠(yuǎn)高于全省、全國(guó)水平。為迅速控制犬利什曼病的流行，陽(yáng)泉市從2020 年開始開展了犬利什曼病的綜合防控。從研究犬利什曼病的傳染源、傳播途徑、易感動(dòng)物這3 個(gè)基本環(huán)節(jié)入手，研究適合本地區(qū)疫情防控的有效措施。主要采取運(yùn)用不同檢測(cè)方法，探索綜合防控措施，最終達(dá)到控制犬利什曼病的目的。

1 犬利什曼病的傳播途徑、分布及形態(tài)

1.1 傳播途徑

犬利什曼病是由利什曼原蟲引起的一種人畜共患病，主要依靠媒介昆蟲白蛉進(jìn)行傳播。當(dāng)白蛉在叮咬人或動(dòng)物的皮膚進(jìn)行吸血時(shí)，可將體內(nèi)病原蟲體傳播給宿主。犬利什曼原蟲包括嬰兒利什曼原蟲（也叫恰氏利什曼原蟲）、熱帶利什曼原蟲、和碩大利什曼原蟲等，犬利什曼病按照臨床分型主要包括內(nèi)臟型、皮膚型和黏膜型等。

1.2 主要分布

本病是由寄生于內(nèi)臟的杜氏利什曼原蟲引起的雙源性人畜共患慢性寄生蟲病。本型多見(jiàn)于丘陵山區(qū)，分布于甘肅、青海、寧夏、川北、陜北、冀北、山西、遼寧和北京等地。杜氏利什曼原蟲寄生于病犬的血液、骨髓、肝、脾、淋巴結(jié)的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中。

1.3 形態(tài)

在犬體內(nèi)的蟲體稱為無(wú)鞭毛體（利杜體），呈圓形，直徑2.4～5.2μm，有的呈橢圓形，大小為2.9～5.7μm×1.8～4μm。用瑞氏液染色后，胞質(zhì)呈淺藍(lán)色，胞核呈紅色圓形，常偏于蟲體一端，動(dòng)基體呈紫紅色細(xì)小桿狀，位于蟲體中央或稍偏于另一端。

圖1 顯微鏡鏡檢利什曼原蟲無(wú)鞭毛體

在傳播媒介（白蛉）體內(nèi)的蟲體，稱為前鞭毛體（鞭毛體或細(xì)滴型）。呈細(xì)而長(zhǎng)的紡錘形，長(zhǎng)12～16μm，前端有一根與體長(zhǎng)相當(dāng)?shù)挠坞x鞭毛，在新鮮標(biāo)本中，可見(jiàn)鞭毛不斷擺動(dòng)，蟲體運(yùn)動(dòng)非?；顫?。當(dāng)雌性白蛉吸食病犬（人）或其他患病動(dòng)物血液時(shí)，無(wú)鞭毛體被攝入蛉胃，隨后在白蛉消化道內(nèi)發(fā)育成為前鞭毛體，并逐步向白蛉的口腔集中，當(dāng)白蛉再吸健康犬或其他動(dòng)物血液時(shí)，成熟的前鞭毛體便進(jìn)入健康犬體內(nèi)，而后失去游離鞭毛成為無(wú)鞭毛體，隨血液循環(huán)到達(dá)機(jī)體各部。無(wú)鞭毛體被巨噬細(xì)胞吞噬后，在其中分裂繁殖。

2 潛伏期及臨床癥狀

潛伏期數(shù)周、數(shù)月乃至1 年以上。病犬早期都沒(méi)有明顯癥狀，晚期則常出現(xiàn)皮膚損害，表現(xiàn)為脫毛、皮脂外溢、結(jié)節(jié)和潰瘍。以頭部尤其是耳、鼻、臉面和眼睛周圍最為顯著。并伴有食欲缺乏，精神萎靡，消瘦，貧血及嗓音嘶啞等癥狀，最后死亡。

圖2 病犬腿部、面部癥狀

3 檢測(cè)方法

3.1 膠體金抗體

膠體金試紙是用一定大小的金顆粒標(biāo)記特異性抗原或抗體等生物大分子，并吸附在金結(jié)合墊上。同時(shí)在硝酸纖維素層析膜上，固定相應(yīng)的抗原或抗體，形成檢測(cè)線及質(zhì)量控制線，這樣當(dāng)樣品及緩沖液經(jīng)過(guò)加樣孔混合并進(jìn)入樣品墊后，通過(guò)毛細(xì)作用而向另一端移動(dòng)。經(jīng)過(guò)金標(biāo)墊后，溶解金標(biāo)記物并發(fā)生免疫性結(jié)合，繼續(xù)層析至檢測(cè)線及質(zhì)控線上，被固定的抗體或抗原所捕獲，形成肉眼可見(jiàn)的紅色條帶。試紙上進(jìn)行層析，一般5～10min，等試紙上的免疫反應(yīng)發(fā)生之后，就可以看到膠體金聚集的位置上有沒(méi)有紅色條帶出現(xiàn)，肉眼可見(jiàn)的，這樣就知道檢測(cè)結(jié)果了。

圖3 膠體金抗體檢測(cè)示意圖

如血清樣本等在流動(dòng)介質(zhì)的稀釋下，臨床樣本里假如有特異性的病毒抗體，這時(shí)候就會(huì)被結(jié)合墊上的金標(biāo)抗原所識(shí)別形成抗原抗體復(fù)合物。這時(shí)候繼續(xù)往吸水墊方向流動(dòng)，在檢測(cè)線上（T 線），有另一種針對(duì)抗體的抗原，這個(gè)抗原識(shí)別的抗體表位和金標(biāo)抗原是不一樣的，所以同一個(gè)抗體能夠同時(shí)被這兩種抗原所識(shí)別。此時(shí)金標(biāo)抗原就會(huì)在檢測(cè)線處被截留一部分，這樣就在檢測(cè)線上顯色了。

當(dāng)然，金標(biāo)抗原的量肯定是富余的，所以不會(huì)只在檢測(cè)線處被截留，還會(huì)繼續(xù)往吸水墊方向流動(dòng)，這時(shí)候就有一條質(zhì)控線（C 線）。線上面有的是專門針對(duì)金標(biāo)抗原的抗體（也就是抗-抗體，本質(zhì)是一種抗體，但是它識(shí)別的抗原對(duì)象也是一種抗體）。因?yàn)橘|(zhì)控線識(shí)別金標(biāo)抗體的能力非常強(qiáng)，所以這條線就一定會(huì)顯色，這也是質(zhì)控的道理，如果這條線沒(méi)有顯色，那么這次檢測(cè)結(jié)果是無(wú)效的。

3.2 酶聯(lián)免疫抗體

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）方法的基本原理是通過(guò)化學(xué)方法使酶與抗原或抗體共價(jià)結(jié)合，形成同時(shí)保留免疫特性與酶活性的酶標(biāo)記物。同時(shí)在固相載體上吸附相應(yīng)抗原或抗體。加入樣本后，樣本中的待檢抗體或抗原會(huì)與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物；再加入酶標(biāo)記物與固相載體上的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合；加入底物顯色液后，酶會(huì)催化底物顯色，進(jìn)而定性或定量判斷樣本是否陽(yáng)性。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。

圖4 酶聯(lián)免疫抗體檢測(cè)示意圖

圖5 分子學(xué)熒光定量PCR 示意圖

3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)是指在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。通過(guò)儀器的熱循環(huán)系統(tǒng)的升降溫變化，使得核酸片段得以復(fù)制，儀器光學(xué)系統(tǒng)采集伴隨核酸擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光信號(hào)，并對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行分析轉(zhuǎn)化、數(shù)學(xué)運(yùn)算后，得到擴(kuò)增曲線。

4 陽(yáng)泉市犬利什曼病主要傳染情況及臨床癥狀

4.1 主要傳染情況

傳染源主要是病犬，傳播媒介是中華白蛉，犬和人群普遍易感。每年5—9 月為白蛉活動(dòng)季節(jié)，犬與犬之間會(huì)通過(guò)白蛉叮咬相互傳播病原體，如果叮咬病犬的白蛉再叮咬到人，就會(huì)將這種疾病傳播給人[1]。

4.2 臨床癥狀

犬利什曼病一般表現(xiàn)為犬只體溫升高，厭食，體重減輕，脫毛、結(jié)痂，精神沉郁，嘔吐咳嗽，貧血，肝、脾、淋巴結(jié)腫大，皮膚和黏膜病變等臨床癥狀。

5 主要流行情況

陽(yáng)泉市5 個(gè)縣（區(qū)）均有犬病例報(bào)告，主要分布在農(nóng)村以及城鄉(xiāng)接合部，重點(diǎn)在郊區(qū)幾個(gè)農(nóng)村鄉(xiāng)鎮(zhèn)。人病例以身體素質(zhì)或體質(zhì)較差的人群，以2 歲以內(nèi)嬰幼兒和60 歲以上老年人為主。通過(guò)利什曼病專項(xiàng)行動(dòng)，目前，病例增長(zhǎng)趨勢(shì)雖然已經(jīng)減緩，但利什曼病防治工作是一項(xiàng)長(zhǎng)期的艱巨工作任務(wù)，此病潛伏期長(zhǎng)，自然界中病原有長(zhǎng)期存在的可能性，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)依然存在，仍然不能掉以輕心，各項(xiàng)防控工作仍需加強(qiáng)。

6 采取綜合防控措施

6.1 加強(qiáng)宣傳

廣泛開展犬利什曼病防治宣傳，提高居民自我保護(hù)意識(shí)能力。充分利用廣播、電視、板報(bào)、印制宣傳單及新媒體廣泛宣傳，提升人民群眾的防病意識(shí)。一是群眾知曉率提高，就診意識(shí)和診療意識(shí)增強(qiáng)。2020年，自開展防控行動(dòng)以來(lái)，本地人診斷比例從2017年的10%增加到2020 年的70%。二是犬只管控得到廣泛認(rèn)同，2020 年檢測(cè)率達(dá)90%。三是2020 年白蛉消殺取得成效，監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，6 月上旬白蛉密度即達(dá)到高峰，后逐漸下降，而往年直到6 月底其密度持續(xù)上升。四是群眾防控意識(shí)提高，包括就醫(yī)、犬只檢測(cè)處置、滅蛉防蛉等知識(shí)均得到提高。但此病防控因其潛伏期長(zhǎng)、犬只中隱性感染較多致病源長(zhǎng)期存在，自然界中白蛉廣泛存在，遏制疫情仍然任重道遠(yuǎn)，需要全社會(huì)共同參與，打好防治攻堅(jiān)戰(zhàn)。

表1 三種方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比表

6.2 防蛉滅蛉

人感染利犬什曼病的傳播關(guān)鍵點(diǎn)是犬和白蛉。一是每年5—9 月白蛉活動(dòng)季節(jié)用有機(jī)磷殺劑噴灑白蛉滋生場(chǎng)所殺滅白蛉。二是廣泛開展利什曼病防治宣傳，提高居民自我保護(hù)意識(shí)能力。三是房屋安裝紗門、紗窗，出入隨手關(guān)門；家里平時(shí)可用蚊香、驅(qū)避劑來(lái)驅(qū)蛉；白蛉活躍季節(jié)睡覺(jué)時(shí)使用蚊帳[2]，盡量不要在室外露宿；傍晚或夜間外出時(shí)最好穿上長(zhǎng)袖長(zhǎng)褲，裸露部分涂上驅(qū)避劑；居住區(qū)50m 內(nèi)盡量不要建畜圈、犬舍，如果建有畜圈或犬舍，需要經(jīng)常清理衛(wèi)生，實(shí)行拴養(yǎng)措施，并在白蛉活動(dòng)季對(duì)其周邊加強(qiáng)消殺，建議每半月進(jìn)行一次衛(wèi)生殺蟲劑的滯留噴灑。

6.3 犬只管控

按照規(guī)定依法養(yǎng)犬、文明養(yǎng)犬，對(duì)犬只加強(qiáng)管理，方可預(yù)防犬利什曼病傳播給人。陽(yáng)泉市人感染病例屬犬源型，犬是本病的自然保蟲宿主。經(jīng)過(guò)調(diào)查，陽(yáng)泉市流浪犬和家養(yǎng)犬的帶蟲率都很高，且根據(jù)國(guó)家專家的介紹，流行區(qū)犬只的檢測(cè)結(jié)果存在大量假陰性，傳播風(fēng)險(xiǎn)極大。因此，管控犬只是一項(xiàng)重點(diǎn)防控措施。對(duì)犬利什曼病流行地采取禁養(yǎng)家犬，原有家犬可轉(zhuǎn)移、出售到無(wú)白蛉地區(qū)[3]。流浪犬因其活動(dòng)范圍大，生活環(huán)境復(fù)雜，更容易被白蛉叮咬；家犬活動(dòng)范圍較為固定，有專人飼養(yǎng)，通過(guò)給家養(yǎng)犬定期檢測(cè)，可減低傳播風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)對(duì)篩檢出感染內(nèi)臟利什曼原蟲的犬應(yīng)及時(shí)管控。開展流浪犬管控和家養(yǎng)犬檢疫是有效降低發(fā)病率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和必要手段。依據(jù)國(guó)家和省級(jí)防控專家的建議，犬只感染病原體后癥狀不明顯，目前沒(méi)有完全治愈的辦法，給人治療的藥物對(duì)犬只沒(méi)有明顯作用，而且容易產(chǎn)生抗藥性，對(duì)后續(xù)人的治療帶來(lái)更大的危害。

6.4 病犬篩查

防控犬利什曼病對(duì)控制人感染此病是十分有效的措施。從2020 年開始，陽(yáng)泉市全市范圍內(nèi)開展了犬利什曼病的篩查，由縣區(qū)政府組織領(lǐng)導(dǎo)，衛(wèi)生健康、農(nóng)業(yè)農(nóng)村、公安部門牽頭，鄉(xiāng)鎮(zhèn)、村、社區(qū)參與，依托鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站、動(dòng)物診療機(jī)構(gòu)對(duì)陽(yáng)泉市犬只進(jìn)行全面篩查。由于膠體金抗體檢測(cè)法方便快捷、時(shí)間短適合于現(xiàn)場(chǎng)大量樣本篩查檢測(cè)，我們采用膠體金抗體檢測(cè)法對(duì)犬只進(jìn)行篩查，陽(yáng)泉市共篩查犬只40643 只，篩查出陽(yáng)性犬只3079 只，對(duì)陽(yáng)性犬只進(jìn)行了集中收容管控。

6.5 法律保障

犬利什曼病屬于我國(guó)動(dòng)物三類傳染病和人畜共患傳染病，對(duì)人體健康存在巨大危害，為保證人民群眾身體健康，開展了相關(guān)立法，由陽(yáng)泉市人大常委會(huì)特制定了《陽(yáng)泉市黑熱病防治規(guī)定》 《陽(yáng)泉市養(yǎng)犬管理辦法（試行）》 法規(guī)，開展了各項(xiàng)防控工作。

陽(yáng)泉市通過(guò)采取病犬檢測(cè)、篩查、隔離等措施阻斷傳染源，采取防蛉、滅蛉措施切斷傳播途徑，加強(qiáng)環(huán)境清洗消毒、強(qiáng)化犬只管理等綜合防控措施，目前犬只陽(yáng)性率顯著下降，犬利什曼病防控工作取得明顯成效。