齊冬琴

（烏魯木齊海關(guān)技術(shù)中心，新疆烏魯木齊 830063）

赭曲霉毒素（Ochratoxins，OT）主要是由曲霉屬以及青霉屬等多種不同類型的有毒真菌集合在一起產(chǎn)生的具有次級(jí)空間代謝性質(zhì)的全新產(chǎn)物，這種產(chǎn)物主要由7種組成結(jié)構(gòu)比較相近的化合物構(gòu)成。其中，赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）所具有的毒性最高，分布廣泛，屬于潛在致癌物質(zhì)。因此，無(wú)論農(nóng)產(chǎn)品加工與否，均會(huì)受到OTA的 污染。

1 赭曲霉毒素A的毒性及危害

OTA本身具有分布十分廣泛的特征，人體攝入該物質(zhì)的方式主要有兩種：人體直接攝入被OTA污染的食物；人體攝入的作物本身已經(jīng)蓄積一定量的OTA。其中，因?yàn)榘衅鞴賹儆诮^大部分動(dòng)物的腎臟或肝臟，在人體攝入此類物質(zhì)后，會(huì)對(duì)腎臟器官形成較為嚴(yán)重的負(fù)面影響，當(dāng)人體直接攝入的劑量過(guò)大時(shí)，可能會(huì)造成人體發(fā)生肝臟病變問(wèn)題，甚至還會(huì)提高自身巴爾干地方性腎病的發(fā)病概率，造成極為嚴(yán)重的后果。已有學(xué)者通過(guò)試驗(yàn)證明，OTA本身便具備促進(jìn)人體星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖線粒體的作用，借此誘發(fā)人體出現(xiàn)慢性腎臟病癥。

2 常規(guī)檢測(cè)方法分析

2.1 國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法概述

為保障人們的身體健康與生命安全，我國(guó)相關(guān)部門針對(duì)赭曲霉毒素A制定了諸多不同級(jí)別的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)相關(guān)限量作出明確規(guī)定?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）第4項(xiàng)內(nèi)容中明確規(guī)定OTA在谷物或者谷物作物碾磨加工食用產(chǎn)品、豆類食用產(chǎn)品中的限量標(biāo)準(zhǔn)，最高不得超過(guò)5.0 μg·kg-1；同時(shí)，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中赭曲霉毒素A的測(cè)定》 （GB 5009.96—2016）[1]又針對(duì)市場(chǎng)中的各類食品和食用型農(nóng)產(chǎn)品中含有的OTA比例作出明確規(guī)定，并分別設(shè)定5種檢測(cè)方法，具體檢出限信息與定量限信息如表1所示。

表1 GB 5009.96—2016中赭曲霉毒素A的檢測(cè)方法

2.2 色譜法

色譜法是一種比較常見(jiàn)的檢測(cè)方法，薄層色譜法（Thin Layer Chromatography，TLC）是最早被應(yīng)用在真菌毒素類型食品檢測(cè)工作中的檢測(cè)方法，一般情況下會(huì)將其與其他常規(guī)技術(shù)聯(lián)合使用。在具體檢測(cè)環(huán)節(jié)中，能夠通過(guò)利用其基本特征，確?；瘜W(xué)顯色測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)還可以保證板上光譜圖檢測(cè)試驗(yàn)與色譜科學(xué)性，以此為基礎(chǔ)，保留試驗(yàn)規(guī)律，再對(duì)樣品執(zhí)行分離檢測(cè)方式，配合定性檢測(cè)方式和定量分析檢測(cè)方式即可得出準(zhǔn)確結(jié)果。

在我國(guó)食品安全檢測(cè)領(lǐng)域中，有學(xué)者用基于免疫親和凈化特點(diǎn)的薄層色譜法，對(duì)樣品生咖啡中含有的OTA比例進(jìn)行檢測(cè)，最終檢測(cè)限結(jié)果為0.5 μg·kg-1，這種檢測(cè)方式具有靈敏度高、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)試劑價(jià)格低廉以及食品樣品易處理等優(yōu)勢(shì)，應(yīng)用范圍十分廣泛。但是，這種檢測(cè)方法本身所需應(yīng)用的試劑種類過(guò)多，且檢測(cè)周期相對(duì)較長(zhǎng)，再加上結(jié)果重現(xiàn)性不足，不能達(dá)成自動(dòng)化檢測(cè)目標(biāo)，因此目前使用頻率較低。說(shuō)明TLC檢測(cè)法在檢測(cè)真菌毒素方面的技術(shù)發(fā)展開(kāi)始進(jìn)入瓶頸階段，目前還未取得重大突破。

2.3 儀器分析檢測(cè)法概述

2.3.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一種應(yīng)用十分廣泛的檢測(cè)方法，該方法在檢測(cè)赭曲霉毒素A含量時(shí)，能夠借助多種不同形式的檢測(cè)手段，有針對(duì)性地選擇出不同級(jí)別要求標(biāo)準(zhǔn)的萃取效果，并對(duì)凈化程度信息、柱前、柱后環(huán)節(jié)檢測(cè)出的化學(xué)衍生系統(tǒng)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，從而提升對(duì)各種真菌毒素的分離效果。檢測(cè)OTA時(shí)，一般會(huì)應(yīng)用到熒光檢測(cè)器設(shè)備對(duì)其毒素含量進(jìn)行檢測(cè)。HPLC檢測(cè)法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)待檢測(cè)物的快速檢測(cè)，尤其是在玉米和小麥檢測(cè)工作中，該方法對(duì)玉米中含有的赤霉烯酮及赭曲霉毒素A的檢測(cè)效果極佳，同時(shí)還具有較高的回收率，檢測(cè)結(jié)果的精密度較高。梁桂娟等[3]以上述內(nèi)容為基礎(chǔ)，采用HPLC-FLD檢測(cè)法對(duì)市售大米作物進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)目標(biāo)為樣品中OTA含量，結(jié)果表明該方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)樣品的快速檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性 較高。

采用HPLC檢測(cè)法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，要保證凈化柱檢測(cè)方法的實(shí)際應(yīng)用效果，確保檢測(cè)過(guò)程的合理性，需借助抗原抗體免疫能力與反應(yīng)原理方可順利完成檢測(cè)任務(wù)，同時(shí)還需要對(duì)單克隆抗體進(jìn)行選擇性吸附處理，繼而提取出目標(biāo)液體中含有的真菌毒素，然后對(duì)其進(jìn)行分離凈化處理，這種檢測(cè)和處理方式屬于常用手段，均屬于前處理環(huán)節(jié)的重要內(nèi)容。與此同時(shí)，林濤等[2]建立了可以自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)的新型免疫親和在線凈化處理的檢測(cè)方式，該方法能夠?qū)z測(cè)物中的HPLC含量做出同步分析，并保證其最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在這樣的情況下，樣品實(shí)際凈化效果與最終檢測(cè)結(jié)果均可得到有效保證，且實(shí)際檢測(cè)效率更高[3]。王健等[4]以真菌毒素類型為核心研究對(duì)象，選擇了更為合適的填料類型，并采取自制復(fù)合方式的免疫親和柱，發(fā)現(xiàn)優(yōu)化后的方法能夠規(guī)避抗體大量出現(xiàn)的問(wèn)題，杜絕檢測(cè)過(guò)程中的浪費(fèi)問(wèn)題，同時(shí)還可以摒棄無(wú)關(guān)物質(zhì)影響因素，確保最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，有效消除檢測(cè)環(huán)節(jié)中的意外干擾，使檢測(cè)結(jié)果具有代表性和針對(duì)性，最終檢出限為0.02 μg·kg-1。但是，使用該方法對(duì)待檢測(cè)樣品進(jìn)行前處理的過(guò)程中，需要消耗的時(shí)間較長(zhǎng)、成本較高，因此這種檢測(cè)方法并不適用于對(duì)大批量樣品的檢測(cè)。

2.3.2 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

液相-質(zhì)譜聯(lián)用法（Liquid Chromatograph Mass Spectrometer，LC-MS/MS）是能夠?qū)⒁合嗌V檢測(cè)方式與質(zhì)譜檢測(cè)方式加以聯(lián)合使用的新型檢測(cè)手段，該檢測(cè)方法可以進(jìn)一步完成對(duì)檢測(cè)物的定性，保證最終定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此廣泛應(yīng)用于食品中OTA的檢測(cè)[4]。程杰等[5]通過(guò)對(duì)待檢測(cè)物進(jìn)行適度稀釋處理，控制檢測(cè)物的干擾成分濃度，以規(guī)避后續(xù)基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的負(fù)面影響。鄒沫君等[6]建立了一種以氨基固相為基礎(chǔ)的萃取方式，即HPLCMS/MS法，并將其應(yīng)用在檢測(cè)糧食中OTA含量中，這種檢測(cè)方式具有操控簡(jiǎn)便、樣品回收率高以及檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)勢(shì)。在上述內(nèi)容基礎(chǔ)上，李克等[7]對(duì)QuEChERS進(jìn)行合理優(yōu)化，并為此建立了一種能夠?qū)?種不同類型的赭曲霉毒素（OTA、OTB和OTC）進(jìn)行分別檢測(cè)的HPLC-MS/MS法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該檢測(cè)方式具有操作靈敏度較高、檢測(cè)速度快等 優(yōu)點(diǎn)。

2.4 比色法適配體傳感器

以比色法為基礎(chǔ)創(chuàng)建的傳感器是一種利用光學(xué)傳感器進(jìn)行檢測(cè)的方式，同時(shí)也是當(dāng)下最常見(jiàn)的一種檢測(cè)手段，已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。學(xué)者吳昊等[8]使用適配體傳感器對(duì)被測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，專門建立了新的檢測(cè)手段，他們將酶包埋脂質(zhì)體設(shè)定為檢測(cè)基礎(chǔ)，制成相應(yīng)的比色適體傳感器。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該設(shè)備能夠在玉米等類型的農(nóng)作物的檢測(cè)中發(fā)揮出良好效果，且在檢測(cè)農(nóng)作物中OTA時(shí)，不需要使用過(guò)多的復(fù)雜儀器設(shè)備。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，對(duì)于食品安全檢測(cè)工作而言，可以利用適配體作為一種特異性識(shí)別分子標(biāo)志，進(jìn)而研發(fā)出一種生物傳感器，此時(shí)OTA檢測(cè)結(jié)果的特異性、穩(wěn)定性和便捷性均得到充分保障，在面對(duì)OTA現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)任務(wù)提出的快速檢測(cè)要求時(shí)，具有非常出色的檢測(cè)能力。但是，這種比色檢測(cè)法的靈敏度依舊有所不足，不能滿足市場(chǎng)發(fā)展的實(shí)際檢測(cè)要求。即使現(xiàn)有部分食物檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用效果較好，但依舊存在各種不同形式的問(wèn)題和不足，因此需要相關(guān)人員不斷完善、更新相關(guān)檢測(cè)技術(shù)，研發(fā)出更多OTA檢測(cè)手段，以保障人們的身體健康。