朱道仙，王璟琨，郝福星，吳 植，陸 江

（江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇泰州 225300）

肉鵝養(yǎng)殖是我國畜牧生產(chǎn)中的重要組成部分，蛋白質(zhì)飼料對(duì)肉鵝生長具有重要作用。但雛鵝肝臟中缺乏精氨酸酶，無法將蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為尿素，只能通過嘌呤核苷酸途徑形成嘌呤，在黃嘌呤氧化酶的作用下被氧化成尿酸，經(jīng)過尿液排出體外（王志等，2021）。研究發(fā)現(xiàn)，高蛋白質(zhì)水平飼糧極易引起雛鵝高尿酸血癥和痛風(fēng)，這可能與高蛋白飼料可引起動(dòng)物腸道菌群紊亂（Xi 等，2019）和腎臟原發(fā)性損傷有關(guān)（奚雨萌等，2019）。腸道菌群失調(diào)不僅可以影響尿酸合成和經(jīng)腸排泄，還可導(dǎo)致腸源性細(xì)菌和脂多糖（LPS）易位，激活機(jī)體炎癥信號(hào)通路，導(dǎo)致腎臟的靶向性損傷（黃遠(yuǎn)丕等，2020）。

虎杖為蓼科植物虎杖的干燥根莖和干燥根，富含黃酮、多糖及苷類等物質(zhì)，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用（梁春曉等，2022）。符佳等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，虎杖醇提物可顯著改變肥胖大鼠腸道菌群，從而改善肥胖表型。但在虎杖改善高蛋白飼料飲食雛鵝的尿酸代謝及腎功能的作用與調(diào)節(jié)腸道菌群相關(guān)性的研究較少。因此，本研究在高蛋白飼料中添加虎杖，研究其對(duì)雛鵝生長性能、腎功能、血清炎癥因子和盲腸菌群結(jié)構(gòu)的影響，為雛鵝痛風(fēng)防治提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)選取1日齡揚(yáng)州雛鵝70只，隨機(jī)等分為高蛋白組和高蛋白+3%虎杖組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)7只。高蛋白組飼喂粗蛋白質(zhì)為24%的高蛋白飼料，高蛋白+3%虎杖組飼喂含3%虎杖的高蛋白飼料。試驗(yàn)采取雙層籠養(yǎng)，自由采食與飲水，按正常免疫程序免疫，試驗(yàn)為期15 d。試驗(yàn)飼糧參考美國NRC建議的鵝營養(yǎng)需要量配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 雛鵝生長性能測定以重復(fù)為單位，在1日齡和15日齡時(shí)對(duì)雛鵝進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算平均體重和平均日增重。同時(shí)記錄采食量，計(jì)算平均日采食量，最后計(jì)算料重比。

1.3 血清腎功能指標(biāo)測定試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取3只平均體重接近的雛鵝，頸靜脈采血并制備血清，置于4℃冰箱中保存，次日檢測。按試劑盒操作說明測定血清肌酐、尿酸、尿素氮和黃嘌呤氧化酶活性。參考人的高尿酸血癥標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算雛鵝高尿酸血癥率。

1.4 血清炎癥因子水平測定參考1.3制備血清，按照試劑盒說明，用ELISA法測定血清中脂多糖（LPS）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細(xì)胞介素1β（IL-1β）含量。

1.5 盲腸菌群16S rDNA高通量測序?qū)?.3中選取的雛鵝致死后，無菌采取盲腸糞便分別放置于2 mL無菌管中，-80℃保存，并在24 h內(nèi)進(jìn)行高通量測序。稱取無菌糞便樣100 mg，采用Qiagen DNA試劑盒按說明書提取總DNA，再以進(jìn)行16S rDNA的V3-V4可變區(qū)PCR擴(kuò)增，上游引物F為5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’，下 游 引 物R為5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’。PCR產(chǎn)物用PCR產(chǎn)物純化試劑盒進(jìn)行純化。參考朱道仙等（2021）方法，將PCR純化產(chǎn)物用Illumina Miseq PE 300平臺(tái)進(jìn)行高通量測序和結(jié)果分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高尿酸血癥率用卡方檢驗(yàn)，腸道菌群豐度比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 虎杖對(duì)高蛋白飲食雛鵝生長性能的影響由表2可知，15日齡時(shí)，高蛋白+3%虎杖組平均體重（P = 0.0065）、平均日增重（P = 0.0174）顯著高于高蛋白組，料重比（P = 0.0248）顯著低于高蛋白組，兩組平均日采食量無顯著差異。

表2 虎杖對(duì)高蛋白飲食雛鵝生長性能的影響

2.2 虎杖對(duì)高蛋白飲食雛鵝血液生化指標(biāo)的影響由表3可知，高蛋白+3%虎杖組血清尿酸水平顯著低于高蛋白組（P = 0.0002），比高蛋白組降低23.96%，黃嘌呤氧化酶活性比高蛋白組顯著降低30.88%（P＜0.0001），尿素氮和肌酐水平顯著低于高蛋白組。高蛋白+3%虎杖組高尿酸血癥率雖然低于高蛋白組，但無顯著差異。高蛋白+3%虎杖組LPS、IL-6、TNF-α和IL-1β水平均顯著低于高蛋白組（P＜0.0001）。

表3 虎杖對(duì)高蛋白飲食雛鵝血液生化指標(biāo)的影響

2.3 虎杖對(duì)高蛋白飲食雛鵝盲腸菌群結(jié)構(gòu)的影響由圖1可知，與高蛋白組比較，高蛋白+3%虎杖組盲腸菌群的OTU數(shù)升高（圖1a），反映菌群α多樣性指標(biāo)Chao指數(shù)升高（圖1b），反映菌群β多樣性指標(biāo)Shannon指數(shù)升高（圖1c）。主成分分析（PCA）發(fā)現(xiàn)，高蛋白組樣本相互聚集，高蛋白+3%虎杖組樣本相互聚集，而高蛋白組樣本與高蛋白+3%虎杖組有分離趨勢，PCA1解釋這種差異的貢獻(xiàn)率為46.2%（圖1d）。在門水平，厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、放線菌門和疣微菌門為雛鵝盲腸優(yōu)勢菌門，高蛋白+3%虎杖組擬桿菌門和變形菌門相對(duì)豐度顯著低于高蛋白組（P＜0.05），放線菌門相對(duì)豐度高于高蛋白組（P＜0.05，圖1e）。在屬水平，以P＜0.01為差異水平，篩選出5種差異菌屬，其中高蛋白+3%虎杖組蘇黎世桿菌屬、乳球菌屬和羅斯氏菌屬相對(duì)豐度顯著高于高蛋白組，擬桿菌屬和梭菌屬相對(duì)豐度顯著低于高蛋白組（圖1f）。

圖1 雛鵝盲腸菌群多樣性變化

3 討論

腸道菌群與動(dòng)物健康息息相關(guān)。腸道菌群、宿主與環(huán)境之間處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)中，形成一個(gè)互相依存、相互制約的生態(tài)系統(tǒng)。腸道菌群可以合成機(jī)體所需營養(yǎng)物質(zhì)，參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)的代謝，一旦發(fā)生改變可能會(huì)引起多種疾病。研究表明，腸道菌群與尿酸代謝關(guān)系密切。變形菌門中大部分細(xì)菌和梭菌屬中的嘌呤莢膜梭菌可通過分泌黃嘌呤脫氫酶參與嘌呤氧化代謝來加快尿酸生成（Pan等，2020），而乳球菌屬可促進(jìn)腸內(nèi)尿酸的分解及排泄（Wang等，2020）。1～7日齡是雛鵝腸道菌群定植的關(guān)鍵時(shí)期。該段時(shí)期給予高蛋白飼料可引起動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡失調(diào)，變形菌門相對(duì)豐度增加，促進(jìn)雛鵝高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)生（Xi 等，2020）。在本研究中，在高蛋白飼料中添加虎杖后，腸道菌群的多樣性增加，擬桿菌門、變形菌門、擬桿菌屬和梭菌屬相對(duì)豐度降低，蘇黎世桿菌屬、乳球菌屬和羅斯氏菌屬相對(duì)豐度升高，高尿酸血癥率顯著降低。表明虎杖可能通過改善腸道菌群影響尿酸代謝。

研究表明，腸道菌群紊亂可破壞腸道黏膜屏障，增加腸壁通透性，導(dǎo)致腸內(nèi)細(xì)菌及細(xì)菌脂多糖易位進(jìn)入血液，激發(fā)炎癥反應(yīng)。在本研究中，在高蛋白飼料中添加虎杖后，血清LPS、LI-6、TNF-α和IL-1β等炎癥因子水平顯著降低，腎功能得到改善。表明虎杖可以抑制腸道菌群紊亂誘發(fā)的機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)和腎損傷。

4 結(jié)論

綜上所述，高蛋白飼料中添加虎杖可以提高雛鵝生長性能，降低血清尿酸水平，減輕腎損傷。可能與虎杖調(diào)節(jié)雛鵝盲腸腸道菌群及其誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān)。為虎杖在雛鵝生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。