楊蕙如，王松，趙海云，劉文坤，陳德俊

(山東省食品藥品檢驗研究院，國家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評價重點實驗室，山東省仿制藥一致性評價工程技術(shù)研究中心，山東 濟南 250101)

注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀(Amoxicillin Sodium and Clavulanate Potassium for Injection)為阿莫西林與克拉維酸鉀[阿莫西林(C16H19N3O5S)與克拉維酸鉀(C8H9NO5)標(biāo)示量之比為5∶1]均勻混合制成的無菌粉末[1-2]。由于阿莫西林和克拉維酸鉀化學(xué)性質(zhì)均不穩(wěn)定，易受水蒸氣、氧氣、溫度和光照等條件的影響[1]。因此，我們需要對注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀進行包材密封完整性檢測。

包裝系統(tǒng)組件(container-closure system，CCS)通常包括與產(chǎn)品直接接觸的內(nèi)包材料以及相關(guān)外包裝材料[3]。注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀采用西林瓶包裝，對于西林瓶藥品包裝，CCS主要包括玻璃瓶、丁基橡膠塞和復(fù)合鋁蓋，密封完整性良好的西林瓶能較好的保護藥品，降低環(huán)境因素(如水蒸氣、氧氣或微生物污染)對藥品的不良影響。

2019年國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評價技術(shù)要求(征求意見稿)》，其中指出，可以采用壓力或真空衰減等物理完整測試方法檢測西林瓶包材密封性[4]。國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心2020年6月發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南(征求意見稿)》中對注射劑密封性檢查方法的選擇和驗證進行闡述，旨在規(guī)范包裝系統(tǒng)密封性研究[5]。包材密封性的測試方法主要有：高壓泄漏檢測法、激光頂空分析法、真空衰減法和染色浴法等[6]。真空衰減法可以在不破壞包材且不污染樣品的前提下，通過壓差值定量的檢測產(chǎn)品包材的泄露，可用于在線或離線檢測[7]。本文測試樣品來自于2021年國家藥品計劃抽驗部分企業(yè)生產(chǎn)的注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀，樣品數(shù)量有限且化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，因此選用真空衰減法。目前真空衰減法常用的方法是將合適的陰性對照品或陽性對照品與被測樣品的的壓差值進行比較，來判定樣品是否存在泄漏。但是無法判定產(chǎn)品之間是否存在差異，本文選用質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對照品，測試了注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀的包材密封完整性，通過不同批次產(chǎn)品測得的壓差值來判定產(chǎn)品之間是否存在差異，并且通過溶液顏色檢查驗證了此方法的可行性。

1 儀器與試劑

PTI VeriPac 455型真空衰減測試儀；CLC222型恒溫恒濕箱；Mettler MS205DU電子天平；標(biāo)準(zhǔn)比色液(《中國藥典》2020年版，上海東方藥品科技實業(yè)有限公司)；2021年度國家藥品評價性抽驗的部分批次注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀。

2 方法與結(jié)果

2.1 包材密封完整性檢測

2.1.1 真空衰減法原理 根據(jù)ASTM F2338-09標(biāo)準(zhǔn)[8]，采用真空衰減法對西林瓶包裝密封完整性進行測試時，首先給定測試參數(shù)，將待測樣品放入測試腔體，對測試腔體抽真空，容器內(nèi)外壓差使得容器內(nèi)氣體通過漏孔進入測試腔體。然后利用儀器內(nèi)的絕壓傳感器和差壓傳感器監(jiān)測絕壓和差壓的變化，最終通過壓差值判定樣品泄漏程度。

2.1.2 測定條件 測試參數(shù)：測試壓力35 mbar；抽真空時間12.0 s；測試時間10.0 s；平衡時間10.0 s。

測試腔體：測試樣品前選擇并安裝適合于被測樣品大小的測試腔體。調(diào)整測試腔體，當(dāng)測試腔體處于閉合狀態(tài)時腔體氣密性良好。本試驗選用美國PTI公司提供的有機玻璃材質(zhì)的測試腔體。這種材質(zhì)的測試腔體保溫性能好，不易受環(huán)境溫度波動的影響，且測試操作簡單方便。

2.1.3 測試樣品及對照品的選擇 本實驗室前期對2021年國家藥品計劃抽驗部分企業(yè)生產(chǎn)的注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀進行了溶液的顏色、阿莫西林有關(guān)物質(zhì)與克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)等項目的檢驗研究，結(jié)果顯示廠家A(2批)和廠家C產(chǎn)品整體質(zhì)量較差，溶液的顏色檢查項結(jié)果明顯深于其他企業(yè)，阿莫西林有關(guān)物質(zhì)檢查項結(jié)果顯示雜質(zhì)含量明顯高于其他廠家，克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)也高于其他廠家，且包材密封完整性會影響產(chǎn)品質(zhì)量。因此，我們采用真空衰減法對廠家A(A1與A2，共2批)和廠家C產(chǎn)品進行了對比研究。另外選擇與這兩家產(chǎn)品包裝材質(zhì)相近、尺寸相同而且整體質(zhì)量較好的廠家B和廠家D產(chǎn)品作為對照品，每批樣品各20瓶。部分檢測項目結(jié)果比較詳見圖1。

圖1 溶液的顏色、阿莫西林有關(guān)物質(zhì)與克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)檢測項目結(jié)果比較

2.2 包材密封完整性對注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀質(zhì)量的影響 該復(fù)方制劑中含克拉維酸鉀，其化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定，對溫度和濕度較敏感，且克拉維酸鉀具有較強的引濕性[9-10]，一旦遇水即發(fā)生降解，配制成溶液后顏色逐漸加深至深褐色。溶液的顏色可以直觀地反映藥品的質(zhì)量情況，通過加速試驗，考察廠家A、廠家B、廠家C和廠家D樣品溶液的顏色變化情況。

方法：將廠家A、廠家B、廠家C和廠家D的樣品，在恒溫恒濕箱中(濕度：92.5%，溫度25 ℃)放置10 d，然后采用《中國藥典》2020年版(四部)通則0901第一法進行溶液顏色檢查[11]。

溶液的配制：每批分別取樣品5瓶，按標(biāo)示量分別加水制成每1 mL含阿莫西林(按C16H19N3O5S計)50 mg的溶液。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用單變量顯著性分析和Mann-Whitney U檢驗分析進行兩兩比較，廠家A的2批樣品與廠家B進行比較，廠家C的樣品與廠家D進行比較。

2.4 結(jié)果

2.4.1 包材密封完整性檢測結(jié)果 由表1廠家A與廠家B的樣品檢測結(jié)果統(tǒng)計表可見，廠家A的壓差均值分別大于廠家B，且離散程度也較大。通過單變量顯著性分析表明，廠家A與廠家B的樣品結(jié)果存在顯著性差異(P<0.05)，通過Mann-Whitney U檢驗分析表明，廠家A與廠家B的樣品結(jié)果存在統(tǒng)計學(xué)差異(P< 0.05)(詳見表2廠家A與廠家B樣品相關(guān)性分析)。

表1 廠家A與廠家B樣品檢測結(jié)果統(tǒng)計表

表2 廠家A與廠家B樣品相關(guān)性分析

我們以相同的方法對廠家C和D生產(chǎn)的樣品進行了分析。由表3中的結(jié)果可見，廠家C的壓差均值均大于廠家D，而且離散程度也較大。通過單變量顯著性分析表明，廠家C與廠家D樣品結(jié)果存在顯著性差異(P< 0.05)，通過Mann-Whitney U檢驗分析表明，廠家C與廠家D樣品結(jié)果存在統(tǒng)計學(xué)差異(P< 0.05)(詳見表4廠家C與廠家D樣品相關(guān)性分析)。

表3 廠家C與廠家D樣品檢測結(jié)果統(tǒng)計表

表4 廠家C與廠家D樣品相關(guān)性分析

2.4.2 包材密封完整性對樣品質(zhì)量的考察結(jié)果 我們對比了廠家A、B、C和D的樣品在高濕條件下的顏色變化情況，如圖2所示，廠家A的2批樣品和廠家C的樣品，在高濕(92.5%，溫度為25 ℃)條件下放置10 d，溶液的顏色呈加深趨勢，廠家B和廠家D的樣品溶液的顏色沒有發(fā)生變化，進一步證明廠家A的2批樣品和廠家C的樣品的包材密封完整性欠佳。濕度是影響樣品質(zhì)量的重要因素，其影響程度與包材密封性密切相關(guān)，因此本試驗結(jié)果也反映了包材的密封完整性對藥品質(zhì)量的重要性。

圖2 高濕條件下的溶液顏色結(jié)果

3 討論

包材密封完整性檢測結(jié)果與前期試驗的結(jié)果進行比較可以看出，整體質(zhì)量較差的產(chǎn)品的壓差均值和離散程度均比整體質(zhì)量較好的對照品大，且檢測結(jié)果與質(zhì)量較好的對照品存在統(tǒng)計學(xué)差異，因此本文采用的方法可以簡單、直接的判斷產(chǎn)品間的包材密封完整性差異。

我們前期對影響因素的考察發(fā)現(xiàn)，濕度對正常產(chǎn)品的質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響，但對廠家A和廠家C產(chǎn)品進行高濕試驗，溶液顏色顯著加深，說明2家企業(yè)產(chǎn)品的包材密封完整性存在問題，進一步說明選用質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對照品，采用真空衰減法進行產(chǎn)品包材密封完整性的檢測方法可行，結(jié)果可靠。

良好的包材密封完整性是保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要前提，保證產(chǎn)品在有效期內(nèi)避免一些不良因素的影響而導(dǎo)致質(zhì)量下降，企業(yè)應(yīng)對包材的密封完整性足夠重視，挑選良好包材，對生產(chǎn)設(shè)備做好調(diào)試和維護，另外需要加強運輸環(huán)節(jié)以及經(jīng)營單位和醫(yī)療機構(gòu)貯存條件的管理。否則產(chǎn)品在效期內(nèi)的質(zhì)量不能得到保障，嚴(yán)重時會影響產(chǎn)品的無菌，存在極大的安全隱患。因此，本文采用的可以定量且操作簡單的評估產(chǎn)品包材密封完整性差異的檢測方法具有應(yīng)用意義，為企業(yè)及檢測機構(gòu)提供了新的思路。