孟勇，邱稀木，邊文冀，王淑芳，朱曉華

［1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.江蘇省水產(chǎn)質(zhì)量檢測中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(南京)，江蘇 南京 210017；3.江蘇海洋大學(xué)海洋科學(xué)與水產(chǎn)學(xué)院，江蘇 連云港 222005］

隨著近幾年市場對斑點(diǎn)叉尾鮰需求量的大幅增加，養(yǎng)殖規(guī)模也隨之?dāng)U大。在養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖戶為了提高鮰魚養(yǎng)殖成活率、改善養(yǎng)殖水環(huán)境會使用到多種投入品。

大量使用投入品是否安全，有沒有添加違規(guī)藥物，是影響水產(chǎn)品安全的一個重要問題，尤其是現(xiàn)今監(jiān)管不規(guī)范的“非藥品”領(lǐng)域，近年來在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上非藥品的使用已大大超過藥品的使用量?，F(xiàn)如今對漁業(yè)養(yǎng)殖病害預(yù)防大于治療的觀念已深入人心，養(yǎng)殖戶對非藥品的使用愈加頻繁(阿麗亞·買提尼牙孜，2015)。非藥品產(chǎn)品的安全性對于水產(chǎn)品的安全和質(zhì)量保證具有重要意義。

目前單一類型藥物的鑒定方法因效率太低，顯然不適用大量樣品的同時篩查工作，高分辨率質(zhì)譜技術(shù)可以更好地解決這個問題。四極桿飛行時間混合質(zhì)譜儀具有超高分辨率、使用方便、維護(hù)成本低的特點(diǎn)(韓彬，2019)，數(shù)百種化合物的同時分析和檢測大大提高了工作效率。本實(shí)驗(yàn)建立漁藥樣品的前處理和上機(jī)方法，將樣品中采集的數(shù)據(jù)與高分辨數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，給出分析結(jié)果。根據(jù)建立好的儀器分析方法，在鮰魚各養(yǎng)殖基地采集養(yǎng)殖戶常用到的多種投入品，利用高分辨質(zhì)譜對其進(jìn)行禁限用藥物的篩查，以了解鮰魚用投入品的安全性。

一、材料和方法

1.樣品的采集

選取江蘇各地(鹽城東臺市、南通海安市、宿遷宿城區(qū)等)鮰魚養(yǎng)殖基地采集養(yǎng)殖中常用的各類投入品(飼料、藥品和非藥品)，共計(jì)52個樣品。

2.主要儀器與試劑

(1)儀器與材料：X500R四極桿飛行時間雜交質(zhì)譜儀(美國SCIEX公司)，SQP電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)，Allegra TM離心機(jī)(美國Beckman公司)，漩渦振蕩器(北京佳源興業(yè)公司)，0.22微米有機(jī)濾膜(美國PALL濾膜)。

(2)試劑：15種標(biāo)準(zhǔn)品(農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究監(jiān)測所)，乙腈、甲醇(色譜純，德國Merck公司)，甲酸(色譜純，美國ROE公司)，超純水(美國Millipore公司純水儀制備)。

3.漁藥樣品前處理方法

準(zhǔn)確稱取各漁藥500毫克(液體藥品以移液槍量取20微升)，以乙腈(含1%甲酸)25毫升充分溶解，再以8 000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清液待用。

4.高分辨質(zhì)譜儀分析條件

色譜分析條件：Kinetex Biphenyl色譜柱(100毫米×2.1毫米，2.6微米)，流速0.3毫升/分，柱溫40℃，進(jìn)樣量10微升，流動相A為0.1%甲酸水溶液，流動相B為0.1%甲酸乙腈溶液；洗脫梯度0～1分鐘，3.0%B；1～2分鐘，15.0%B；2～9分鐘，25.0%B；9～16分鐘，45.0%B；16～20分鐘，3.0%B。

質(zhì)譜分析條件：掃描模型為IDA模型，包含TOF MS模式、IDA模式和TOF MS/MS模式。TOP MS模式的參數(shù)為H-ESI離子源，掃描范圍(m/z)100～1 000道爾頓，噴霧電壓5 500伏，去簇電壓60伏，碰撞能量為10伏，累計(jì)時間為0.2秒，氣簾氣壓力0.25兆帕，霧化器壓力0.41兆帕，輔助加熱器壓力0.41兆帕，離子源溫度500℃。IDA模式的參數(shù)為實(shí)驗(yàn)室類型常規(guī)小分子檢測，最大觸發(fā)子離子數(shù)范圍為15個，觸發(fā)二級掃描的離子強(qiáng)度閾值為10計(jì)數(shù)/秒，動態(tài)背景扣除開啟。TOF MS/MS模式的參數(shù)為掃描范圍(m/z)50～1 000道爾頓，去簇電壓60伏，碰撞能量為35伏，累計(jì)時間為0.06秒。

5.定性篩查原則

根據(jù)歐盟《關(guān)于分析方法評價和結(jié)果解釋執(zhí)行委員會決議》(2002/657/EC)，對動物產(chǎn)品的有機(jī)殘留物進(jìn)行質(zhì)量鑒定需要4個鑒定點(diǎn)。利用高分辨率質(zhì)譜所獲取的母離子與子離子識別點(diǎn)，即使只有1個母離子和1個子離子，就可以達(dá)到對目標(biāo)物質(zhì)的鑒定條件(涂慧君，2016)。

漁藥與飼料取樣后分別按上述步驟進(jìn)行前處理和上機(jī)，使用IDA模型采集數(shù)據(jù)，并利用已建立的信息庫進(jìn)行檢測。根據(jù)儀器的測量特性，當(dāng)母離子質(zhì)荷比偏差小于3×10-6、同位素質(zhì)荷比誤差小于1×10-5、相對豐度誤差小于25%、綜合比對大于75%時，如果碎片的離子質(zhì)荷比誤差小于2×10-5，至少有1種碎片與數(shù)據(jù)庫中相符，可確定檢出該物質(zhì)。

二、結(jié)果和分析

1.篩查結(jié)果的統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)共篩查了52種鮰魚投入品，按照樣品類型分為3種水產(chǎn)保健品、3種除藻、1種底質(zhì)改良、1種清塘、3種殺蟲、9種殺菌、13種水質(zhì)改良、7種微生物制劑、7種中草藥制劑，其余5種為飼料。篩查出未標(biāo)注在產(chǎn)品成分說明的物質(zhì)見表1。

表1 樣品篩查結(jié)果

2.篩查結(jié)果分析

3種除藻類產(chǎn)品中篩查出非草隆、特丁凈、撲滅津-2-羥基、撲滅通、莠滅凈除草類物質(zhì)。養(yǎng)殖戶為控制有害藻類的暴發(fā)，會選擇使用一些除藻產(chǎn)品。歐盟及美國環(huán)境保護(hù)署等研究表明，多種除草劑對水生生物毒性較大。我國目前未明確除草劑可以在水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域使用，而且加入其中的這些除草類物質(zhì)都未在產(chǎn)品成分處標(biāo)出，存在一定的安全隱患(孫秀梅等，2017)。

9種殺菌類產(chǎn)品中只在1種止血粉殺菌產(chǎn)品中篩查出增效物質(zhì)甲氧芐啶。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病害問題也日益突出，其中細(xì)菌性疾病已在世界范圍內(nèi)對漁業(yè)經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失(魏春麗等，2018)。水產(chǎn)動物細(xì)菌病的種類較多，危害嚴(yán)重的主要是革蘭氏陰性菌引起的疾病，如柱狀屈撓桿菌引起的爛鰓病、假單胞菌引起的敗血癥、嗜水氣單胞菌引起的癤瘡、腐皮病等(王春華，2015)。該止血粉主要針對細(xì)菌性出血病和敗血癥，篩查出的甲氧芐啶又稱增效磺胺，與磺胺藥合用可使細(xì)菌的葉酸合成代謝遭到雙重阻斷，有協(xié)同作用，使磺胺藥抗菌活性增強(qiáng)，抗菌作用大幅度提高，可增效數(shù)倍至數(shù)十倍，并可使抑菌作用轉(zhuǎn)為殺菌作用，減少耐藥菌株產(chǎn)生(李文輝等，2020)?！妒称分蝎F藥最大殘留限量》中規(guī)定甲氧芐啶在魚中的最大限量為50微克/千克。

13種水質(zhì)改良產(chǎn)品中有1種產(chǎn)品篩查出阿維菌素。阿維菌素是水產(chǎn)養(yǎng)殖上常用的新型廣譜、高效、低毒抗生素類殺蟲劑，具有觸殺、胃毒作用，滲透力強(qiáng)。阿維菌素主要用于枝角類、橈足類、魚鲺、錨頭鳋、中華鳋、線蟲、指環(huán)蟲、三代蟲、棘頭蟲、水蜈蚣等寄生蟲的驅(qū)除與殺滅，但對絳蟲、吸蟲、原蟲無效，另外也用于蝦蟹混養(yǎng)池塘的殺蟲、驅(qū)蟲(迂君等，2019)。我國對阿維菌素在魚體中的最大殘留限量沒有明確規(guī)定，日本標(biāo)準(zhǔn)為5微克/千克(楊光，2017)。產(chǎn)品的成分說明上沒有標(biāo)出該藥物，該藥物是水產(chǎn)養(yǎng)殖常用藥物，應(yīng)在說明處標(biāo)出。

7種微生物制劑中有1種產(chǎn)品篩查出四環(huán)素和氟苯尼考。微生物制劑是由一些對人類和養(yǎng)殖對象無致病危害并能改良水質(zhì)狀況、抑制水產(chǎn)病害的有益微生物制成(黃萍萍，2021)。微生物制劑主要有硝化細(xì)菌、光合細(xì)菌、枯草桿菌、放線菌、乳酸菌、酵母菌、鏈球菌和EM微生物菌群等，具有改良水質(zhì)、增加溶氧、降低氨氮、抑制致病菌生長、提高動物抗病與免疫力、促進(jìn)養(yǎng)殖對象生長等功能(洪宇健等，2016)。篩查出藥物的產(chǎn)品主要用于治療魚的細(xì)菌性敗血癥，四環(huán)素和氟苯尼考為殺菌類藥物，該產(chǎn)品檢出這兩類物質(zhì)實(shí)屬正常。但該產(chǎn)品的主要成分說明處只有一個復(fù)合微生物，屬實(shí)過于簡單，氟苯尼考是水產(chǎn)中的常用藥物，應(yīng)將其列入主要成分說明。

7種中草藥制劑篩查出含有磺胺嘧啶、左旋咪唑、蛇床子素等物質(zhì)。中草藥制劑篩查結(jié)果，一種功效為清熱解毒、保膽護(hù)肝的板黃散含有磺胺嘧啶，可能產(chǎn)品兼具殺菌功效；另一種功效為殺滅各類孢子蟲、指環(huán)蟲的產(chǎn)品含有左旋咪唑、蛇床子素，左旋咪唑和蛇床子素都屬于殺蟲物質(zhì)，加入其中應(yīng)該是為了增加產(chǎn)品功效。左旋咪唑是一種抗生素，屬于合成噻唑類化合物的衍生物，而蛇床子素是中藥蛇床子的提取成分。這些天然中草藥產(chǎn)品主要成分列的都是柴胡、陳皮、常山等天然藥物。筆者認(rèn)為廠家想宣傳其產(chǎn)品由天然物質(zhì)成分制成，強(qiáng)調(diào)其產(chǎn)品的天然性和安全性，而隱去了添加的一些化學(xué)合成物質(zhì)。

三、總結(jié)

本次實(shí)驗(yàn)篩查結(jié)果顯示，在除藻產(chǎn)品中會含除草藥物，在殺菌產(chǎn)品中篩查出一些殺菌物質(zhì)和增效劑，在殺蟲產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)殺蟲物質(zhì)，這些產(chǎn)品加入的物質(zhì)都比較合理。但存在以下問題：①某些產(chǎn)品成分說明不充分，篩查到一些水產(chǎn)常用藥物，比如氟苯尼考和磺胺嘧啶等藥物并沒有列在成分說明處；②除藻類產(chǎn)品篩查出許多除草類物質(zhì)，不建議在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用；③中草藥產(chǎn)品中的成分還含有一些化學(xué)成分，沒有在產(chǎn)品成分說明上列出來。不應(yīng)為強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品的天然性、安全性而只列出天然中草藥物質(zhì)，也應(yīng)清楚地列出添加的化學(xué)物質(zhì)，以便消費(fèi)者了解產(chǎn)品成分和特性，準(zhǔn)確挑選合適的投入品。