姚元謙，呂建林，柳琳琳，王光耀，楊 坤

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023）

肝癌是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤，主要為肝細(xì)胞性肝癌（hepatocellular carcinona，HCC），其病情發(fā)展迅速，死亡率高，5年生存率低于15%。我國(guó)屬于肝癌高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)，主要與慢性乙型肝炎病毒感染及黃曲霉毒素暴露有關(guān)。2020年我國(guó)肝癌新發(fā)病例41萬(wàn)，死亡病例39萬(wàn)，占全球肝癌死亡病例的51%，是我國(guó)惡性腫瘤死亡的第二大誘因[1-2]。目前治療肝癌的手段包括局部的手術(shù)、放療、消融、介入治療，以及全身性的化療、細(xì)胞免疫、靶向藥物治療等[3]。手術(shù)治療是早期肝癌的有效治療手段，但大部分患者確診時(shí)已是中晚期，故藥物干預(yù)是治療肝癌的重要手段。西醫(yī)藥物治療不良反應(yīng)較多，長(zhǎng)期服用西藥還可能產(chǎn)生耐藥性，患者預(yù)后不佳[4-5]。

中醫(yī)藥醫(yī)治腫瘤療效確切，具有抑制腫瘤生長(zhǎng)、提高患者生存質(zhì)量、減輕臨床癥狀等療效。中西醫(yī)聯(lián)合治療能夠減少西藥毒副作用、降低術(shù)后復(fù)發(fā)率、延緩病情進(jìn)展，中醫(yī)藥防治腫瘤有著不可忽視的重要作用[6-7]。中醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)對(duì)疾病的整體把握，現(xiàn)代醫(yī)家通過(guò)辨證論治對(duì)肝癌進(jìn)行治療，效果明顯，并總結(jié)出了許多專(zhuān)利復(fù)方。中醫(yī)藥專(zhuān)利復(fù)方均經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用，取得了肯定的臨床療效，具有較高的可重復(fù)性。本次研究整合數(shù)據(jù)挖掘、GEO基因芯片分析、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)，進(jìn)一步系統(tǒng)分析國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的用藥規(guī)律，及其核心藥物的潛在活性成分、作用靶點(diǎn)和調(diào)控途徑，并進(jìn)行分子模擬驗(yàn)證。

1 資料與方法

1.1 中藥處方來(lái)源 登錄國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)公共服務(wù)網(wǎng)-專(zhuān)利檢索及分析系統(tǒng)（https://www.cnipa.gov.cn/），以“肝癌and中藥”為檢索詞，收集所有與肝癌相關(guān)的中藥復(fù)方。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）明確具有治療肝癌作用的中藥復(fù)方，且組方完整；（2）治療方法為口服，劑型不限；（3）藥味不限。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）治療對(duì)象為動(dòng)物的中藥復(fù)方；（2）使用方法為外用的中藥復(fù)方；（3）藥物組成相同的中藥復(fù)方只納入一次。

1.2 數(shù)據(jù)規(guī)范處理 根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)納入的中藥進(jìn)行名稱(chēng)規(guī)范化處理，如“薏仁”規(guī)范為“薏苡仁”，“制軍”規(guī)范為“大黃”。將所得的中藥數(shù)據(jù)錄入Excel建立“肝癌處方用藥”數(shù)據(jù)庫(kù)。為確保信息錄入準(zhǔn)確無(wú)誤，由兩名數(shù)據(jù)員交叉核對(duì)錄入。

1.3 數(shù)據(jù)分析 將“肝癌處方用藥”數(shù)據(jù)導(dǎo)入中醫(yī)傳承計(jì)算平臺(tái)V3.0軟件，選擇“數(shù)據(jù)分析模塊”下的“統(tǒng)計(jì)分析模塊”及“方劑分析模塊”，依次進(jìn)行中藥的四氣、五味、歸經(jīng)、功效、頻數(shù)、用藥模式分析，并篩選出國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的核心藥對(duì)。

1.4 獲取半枝蓮-白花蛇舌草的活性成分及靶點(diǎn) 對(duì)“1.3”項(xiàng)下分析得出的核心藥對(duì)進(jìn)一步行生物信息學(xué)分析，檢索TCMSP（https://tcmsp-e.com/）、SymMap（www.symmap.org）數(shù)據(jù)庫(kù)獲取半枝蓮-白花蛇舌草的活性成分，以口服生物利用度（Oral bioavailability，OB）≥30%、類(lèi)藥性（drug-likeness，DL）≥0.18為篩選條件進(jìn)行收集。

通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載各活性成分的mol2格式數(shù)據(jù)文件，依次上傳至PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/）預(yù)測(cè)各活性成分的潛在作用靶點(diǎn)，并以Norm Fit≥0.5為條件篩選出高概率靶點(diǎn)，然后將各靶點(diǎn)ID上傳至UniProt平臺(tái)（https://www.uniprot.org/）統(tǒng)一轉(zhuǎn)換為GeneSymbol。

1.5 挖掘GEO芯片獲取肝癌靶點(diǎn) 以“l(fā)iver cancer”為關(guān)鍵詞檢索GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/），篩選相關(guān)的基因芯片，獲取GSE84402芯片數(shù)據(jù)集，下載該芯片的表達(dá)數(shù)據(jù)及GPL570基因芯片注釋文件。該芯片數(shù)據(jù)包含肝癌組織樣本14例、癌旁組織樣本14例。

利用R軟件對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分組，應(yīng)用“l(fā)ima”“pheatmap”程序包，以|logFC|≥1、P＜0.05為篩選條件，獲取與肝癌相關(guān)的顯著性差異基因，分別選取上調(diào)基因與下調(diào)基因中的前20個(gè)基因繪制熱圖。

1.6 篩選共同靶點(diǎn)并構(gòu)建PPI核心網(wǎng)絡(luò) 將“1.4”“1.5”項(xiàng)下的藥物、疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入R軟件，應(yīng)用“venn”程序包繪制藥物-疾病靶點(diǎn)Venn圖，并映射篩選出藥物-疾病交集靶點(diǎn)。將交集靶點(diǎn)提交至STRING平臺(tái)（https://string-db.org/）獲取PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，下載該網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)的TSV格式文件并導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2進(jìn)行拓?fù)浞治觯ㄟ^(guò)連接度（Degree值）的中位數(shù)篩選出半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的核心靶點(diǎn)。

1.7 生物信息富集分析 將“1.6”項(xiàng)下的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入R軟件，應(yīng)用“clusterProfiler”“DOSE”“org.Hs.eg.db”等程序包，進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genome，KEGG）富集分析和基因本體論（gene ontology，GO）富集分析。

1.8 構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò) 為了更清晰地展示半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的作用機(jī)制，運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件繪制活性成分-基因靶點(diǎn)-作用通路網(wǎng)絡(luò)圖，并通過(guò)Degree值預(yù)測(cè)半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的主要活性成分。

1.9 分子對(duì)接驗(yàn)證 選取“1.8”項(xiàng)中主要活性成分的前5個(gè)作為小分子配體，選取與這5個(gè)活性成分連接度最高且是“1.6”項(xiàng)下的核心靶點(diǎn)作為蛋白受體。從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載主要活性成分的MOL2文件，從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.rcsb.org）下載蛋白受體的pdb文件，使用PyMOL軟件刪除蛋白受體的水分子及配體，運(yùn)用AutoDockTools1.5.6軟件確定蛋白受體的活性口袋，最后通過(guò)AutoDock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

2 結(jié)果

2.1 藥物頻數(shù)及藥對(duì)分析 通過(guò)檢索統(tǒng)計(jì)，共獲得315首中藥專(zhuān)利復(fù)方，549種藥物，累計(jì)出現(xiàn)4 646次。統(tǒng)計(jì)顯示，頻數(shù)≥40的藥物有21味。（見(jiàn)表1）設(shè)置支持度≥10%（約等于30次）、置信度≥90%進(jìn)行核心組合篩選。結(jié)果顯示，治療肝癌的常用藥對(duì)有半枝蓮-白花蛇舌草、黃芪-白術(shù)、白術(shù)-茯苓等。（見(jiàn)表2）

表1 國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的常用藥物統(tǒng)計(jì)

表2 國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的常用組合分析

2.2 藥物性味歸經(jīng)及功效分析 四氣主要為寒性（1 475次）、溫性（1 203次）、平性（778次）；五味主要為苦味（2 168次）、甘味（1 670次）、辛味（1 355次）；主要?dú)w經(jīng)為肝經(jīng)（2 204次）、脾經(jīng)（1 591次）、肺經(jīng)（1 422次）、胃經(jīng)（1 157次）、心經(jīng)（1 052次）；藥物功效以補(bǔ)虛、清熱、活血化瘀為主。（見(jiàn)圖1）

圖1 國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的藥物功效分析

2.3 篩選半枝蓮-白花蛇舌草及肝癌靶點(diǎn) 篩選獲得33個(gè)藥物活性成分，通過(guò)PharmMapper數(shù)據(jù)庫(kù)得到396個(gè)藥物靶點(diǎn)。對(duì)GSE84402芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行差異分析，共獲得差異基因1 423個(gè)，其中在肝癌中表達(dá)上調(diào)的基因480個(gè)（如CCNB1、CDKN3、RACGAP1等），在肝癌中表達(dá)下調(diào)的基因943個(gè)（如FCN2、ABCA8、OIT3等）。分別選取上調(diào)基因與下調(diào)基因的前20個(gè)繪制熱圖，圖中綠色為低表達(dá)，黑色為中表達(dá)，紅色為高表達(dá)。（見(jiàn)圖2）

圖2 肝癌組織與正常組織差異基因熱圖

2.4 獲取交集靶點(diǎn)并構(gòu)建PPI核心網(wǎng)絡(luò) 將藥物-疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入R軟件，繪制Venn圖（見(jiàn)圖3），并映射篩選出交集靶點(diǎn)80個(gè)。構(gòu)建交集靶點(diǎn)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)行拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)，該網(wǎng)絡(luò)的核心靶點(diǎn)有ESR1（28）、AR（20）、TYMS（20）、CDK1（19）、CYP1A1（16）、MMP9（16）、CCNB1（16）、IGF1（15）等，提示這些靶點(diǎn)在半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌中發(fā)揮著關(guān)鍵作用（見(jiàn)圖4）。圖中節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深表示連接度越高。

圖3 藥物-疾病靶點(diǎn)Venn 圖

圖4 交集靶點(diǎn)PPI 拓?fù)浞治鰣D

2.5 生物信息富集分析 應(yīng)用R軟件對(duì)80個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析，得到生物過(guò)程（BP）條目716條，主要包括藥物反應(yīng)、酒精代謝過(guò)程、激素代謝過(guò)程、類(lèi)固醇代謝過(guò)程等；得到細(xì)胞組分（CC）條目39條，主要在分泌顆粒腔、胞質(zhì)囊泡腔、細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性蛋白激酶全酶復(fù)合物等處發(fā)揮作用；得到分子功能（MF）條目68條，主要包括組蛋白激酶活性、類(lèi)固醇結(jié)合、氧化還原酶活性等；得到信號(hào)通路31條，主要富集在化學(xué)致癌作用通路、細(xì)胞色素P450對(duì)外源性藥物的代謝作用通路、p53信號(hào)通路、花生四烯酸代謝等通路等信號(hào)通路。對(duì)主要條目進(jìn)行繪圖，見(jiàn)圖5～6。

圖5 半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌靶點(diǎn)GO 富集分析圖

圖6 半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌靶點(diǎn)KEGG 富集分析圖

2.6 構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò) 為了更加明確半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的活性成分、基因靶點(diǎn)與作用通路之間的關(guān)系，故構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖。（見(jiàn)圖7）其中紅色倒三角形節(jié)點(diǎn)為通路，藍(lán)色圓形節(jié)點(diǎn)為靶點(diǎn)，黃色正方形節(jié)點(diǎn)為活性成分，節(jié)點(diǎn)越大說(shuō)明連接度值越大。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)圖可直觀看出，半枝蓮-白花蛇舌草對(duì)肝癌具有多途徑、多成分的作用機(jī)制。根據(jù)Degree值，預(yù)測(cè)其治療肝癌的主要活性成分見(jiàn)表3。

圖7 半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

表3 半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的主要活性成分

2.7 活性成分與靶點(diǎn)蛋白的分子對(duì)接 選取“2.6”項(xiàng)下的主要活性成分與“2.4”項(xiàng)下的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，運(yùn)用AutoDock Vina軟件進(jìn)行對(duì)接并預(yù)測(cè)結(jié)合能力，結(jié)合能越低則構(gòu)象越穩(wěn)定，當(dāng)結(jié)合能＜0 kcal/mol時(shí)表明配體與受體間有結(jié)合活性，當(dāng)結(jié)合能＜-5.0 kcal/mol時(shí)表明結(jié)合良好[8]。結(jié)果顯示，木犀草素-ESR1（-8.2 kcal/mol）、β-谷甾醇-TYMS（-7.5 kcal/mol）、豆甾醇-IGF1（-7.1 kcal/mol）、漢黃芩素-CYP1A1（-10.5 kcal/mol）、槲皮素-CDK1（-9.0 kcal/mol）與靶點(diǎn)蛋白分子間具有較強(qiáng)的結(jié)合活性。（見(jiàn)圖8）

圖8 各主要活性成分與核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接圖

3 討論

肝癌可歸屬于中醫(yī)學(xué)“積聚”“臌脹”“黃疸”等病證范疇，當(dāng)代醫(yī)家認(rèn)為本病總屬本虛標(biāo)實(shí)，其病理因素與瘀毒、氣滯、血瘀、痰凝等相關(guān)[9]。本研究通過(guò)挖掘國(guó)家專(zhuān)利數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)代醫(yī)家治療肝癌以補(bǔ)虛藥（如黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸）、清熱藥（如白花蛇舌草、半枝蓮、茵陳）、活血化瘀藥（如莪術(shù)、丹參、三七）等為主?！夺t(yī)宗必讀》指出：“積之成也，正氣不足，而后邪氣踞之”，故治療肝癌時(shí)應(yīng)重視補(bǔ)益人體正氣，并配之以治標(biāo)，祛癌毒邪氣、散氣血積滯、消痰濕聚結(jié)。當(dāng)代醫(yī)家治療肝癌時(shí)以固本培元、標(biāo)本兼治為治療法則。在性味方面，以寒溫平、苦甘辛使用為主，寒性藥可清熱解毒，而溫性藥一方面能制約寒藥攻邪太過(guò)，另一方面能起到溫運(yùn)痰濕、暖肝溫脾的功效，苦味能瀉能燥，能清瀉濕熱、化解瘀毒。甘味能補(bǔ)，補(bǔ)益人體正氣、恢復(fù)臟腑功能。藥物歸經(jīng)以肝經(jīng)、脾經(jīng)、肺經(jīng)、胃經(jīng)等為主。治肝的同時(shí)應(yīng)重視對(duì)脾胃的顧護(hù)。肝、脾在生理活動(dòng)中聯(lián)系密切，若脾胃化源充足、氣機(jī)升降相宜，則肝氣條達(dá)、肝血充盈、疏泄正常，且肝木太過(guò)容易橫犯脾土，正所謂“見(jiàn)肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾”[10]。

國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的核心藥對(duì)為半枝蓮-白花蛇舌草，兩者均有一定的抗腫瘤活性。半枝蓮具有廣泛的抗腫瘤、抗氧化、抗炎等生物活性[11]。研究發(fā)現(xiàn)，半枝蓮提取物能夠逆轉(zhuǎn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而抑制肝癌細(xì)胞的遷襲[12]。白花蛇舌草同樣有廣泛的抗癌作用，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)免疫功能[13]。但兩者抗腫瘤的作用機(jī)制仍未完全明確，故本次研究通過(guò)生物信息學(xué)進(jìn)一步分析半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的潛在機(jī)制。

半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的核心靶點(diǎn)有ESR1、AR、TYMS、CDK1、CYP1A1、MMP9、CCNB1、IGF1、PTGS2 等。ESR1（雌激素受體1）作為一種癌基因，是多種惡性腫瘤潛在的腫瘤抑制基因，在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌及宮頸癌中，ESR1的表達(dá)水平明顯下調(diào)[14-15]。研究表明ESR1也是肝癌的腫瘤抑制基因，低ESR1表達(dá)會(huì)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[16]，相反，ESR1的過(guò)度表達(dá)可以抑制肝癌細(xì)胞發(fā)展，同時(shí)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡[17]。AR（雄激素受體）屬于核受體超家族中的類(lèi)固醇受體，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肝癌中的巨噬細(xì)胞可能通過(guò)改變外泌體中的microRNA（miR-92a-2-5p）來(lái)降低肝癌細(xì)胞AR的表達(dá)，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲[18]。TYMS（胸苷酸合成酶）是臨床中化療藥物的作用靶點(diǎn)，被認(rèn)為是氟尿嘧啶類(lèi)藥物的主要作用部位[19]。研究發(fā)現(xiàn)，TYMS基因在肝癌中表達(dá)上調(diào)，可促進(jìn)肝癌細(xì)胞DNA的合成，使腫瘤生長(zhǎng)、擴(kuò)散[20]。CDK1（周期蛋白依賴(lài)性激酶1）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是細(xì)胞周期調(diào)控中的重要因子。CDK1在包括肝癌在內(nèi)的多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，且與肝癌患者的預(yù)后相關(guān)，高表達(dá)的CDK1肝癌患者其預(yù)后較差[21]。CYP1A1（細(xì)胞色素P450 1A1酶）是細(xì)胞色素P450氧化酶家族成員之一，是體內(nèi)重要的Ⅰ相代謝酶，在多種致癌物的活化和解毒過(guò)程中起著重要的作用[22]。研究發(fā)現(xiàn)，CYP1A1基因突變者更易發(fā)生肝癌，其危險(xiǎn)性是CYP1A1基因未突變者的3.8倍[23]。基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族（MMPs）成員，參與正常生理過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)的分解。MMP9與腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展有關(guān)，當(dāng)MMP9表達(dá)上調(diào)降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，腫瘤細(xì)胞由此進(jìn)入體循環(huán)形成新的腫瘤灶，同時(shí)MMP9能促進(jìn)新血管的生成以維持腫瘤生長(zhǎng)[24]。有研究[25]認(rèn)為，MMP9與肝癌生長(zhǎng)浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過(guò)程關(guān)系密切，可作為腫瘤分子標(biāo)志物。CCNB1（細(xì)胞周期蛋白B1）與腫瘤關(guān)系密切，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲等過(guò)程，在各種惡性腫瘤中呈過(guò)度表達(dá)[26]。實(shí)驗(yàn)表明，通過(guò)降低CCNB1表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖及侵襲[27]。IGF1（胰島素樣生長(zhǎng)因子1）參與肝臟的生理活動(dòng)，影響肝細(xì)胞周期的進(jìn)程、生長(zhǎng)，且IGF1與各種肝臟疾病相關(guān)，在肝炎、肝硬化、脂肪肝及肝癌中表達(dá)下調(diào)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)調(diào)查均有證據(jù)表明IGF1對(duì)肝癌細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用[28]。PTGS2（前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶2）與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。研究[29]認(rèn)為，炎癥反應(yīng)是促進(jìn)肝癌發(fā)展的因素，抑制PTGS2/COX-2可以防止黃曲霉毒素驅(qū)動(dòng)肝癌的發(fā)生及進(jìn)展。

交集靶基因GO功能富集分析顯示，半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌主要涉及藥物反應(yīng)、酒精代謝過(guò)程、類(lèi)花生酸代謝過(guò)程、環(huán)氧酶P450途徑、分泌顆粒腔、胞質(zhì)囊泡腔、蛋白激酶活性。乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶是酒精代謝過(guò)程中的兩個(gè)關(guān)鍵酶，這兩種酶類(lèi)分別由ADH、ALDH基因進(jìn)行編碼。研究認(rèn)為酒精代謝可能與肝癌的進(jìn)展有關(guān)。與正常組織相比，肝癌組織中ADH1和ALDH2基因的表達(dá)水平顯著下降，且這兩種基因低表達(dá)的患者其術(shù)后復(fù)發(fā)率高、生存時(shí)間短[30]，而上調(diào)ALDH2表達(dá)能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖[31]。環(huán)氧酶P450生物途徑能夠?qū)⒒ㄉ南┧岽x為具有生物活性的類(lèi)花生酸，類(lèi)花生酸是包括炎癥在內(nèi)的許多生物過(guò)程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，研究發(fā)現(xiàn)其能抑制肝臟炎癥[32]。KEGG通路富集分析得到31條信號(hào)通路，主要富集在化學(xué)致癌作用通路、細(xì)胞色素P450對(duì)外源性物質(zhì)的代謝通路、p53信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、花生四烯酸代謝等通路，富集在通路上的基因出現(xiàn)較多的有PIK3R1、IGF1、CYP1A1、CYP1A2、ADH1C等。細(xì)胞色素P450傳導(dǎo)通路負(fù)責(zé)藥物、內(nèi)源性物質(zhì)及外源性物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化，此通路對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)起調(diào)控作用，并可影響化療藥物的療效[33]，而CYP1A1、CYP1A2是該通路激活癌前物質(zhì)的主要基因之一[34]。p53信號(hào)通路與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，其重要節(jié)點(diǎn)p53基因通常在癌癥患者中發(fā)生突變或失活，從而導(dǎo)致異常腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[35]。有研究證實(shí)，通過(guò)miR-29b調(diào)控p53信號(hào)通路能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡[36]。FoxO信號(hào)通路與轉(zhuǎn)錄有關(guān)，參與細(xì)胞周期控制、細(xì)胞凋亡、糖代謝等生理過(guò)程。研究表明FoxO因子是腫瘤抑制因子，低水平的FoxO與肝癌患者的不良預(yù)后相關(guān)，且可能增加對(duì)化療藥物的耐藥性[37]。

半枝蓮-白花蛇舌草治療肝癌的主要活性成分可能為木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇、漢黃芩素、槲皮素等。上述化合物均具有抗腫瘤作用，部分可增加抗腫瘤藥物的敏感性。研究[38-42]表明，這些化合物在抗肝細(xì)胞癌方面具有多樣的作用機(jī)制，能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、侵襲，并能促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。

本研究利用分子對(duì)接技術(shù)進(jìn)行虛擬驗(yàn)證，對(duì)主要的活性成分與核心靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)接分析，結(jié)果顯示所有對(duì)接結(jié)合能均＜-5.0 kcal/mol，表明各主要活性成分與核心靶點(diǎn)間具有良好的結(jié)合力。

綜上所述，在治療肝癌的國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方中，使用最多的藥組為半枝蓮-白花蛇舌草，表明其可能在治療肝癌中發(fā)揮著重要作用。半枝蓮-白花蛇舌草中的木犀草素、β-谷甾醇、豆甾醇、漢黃芩素、槲皮素等活性成分，能上調(diào)ESR1、IGF1及下調(diào)PTGS2、MMP9、AR、TYMS、CDK1、CYP1A1、CCNB1 等核心 靶點(diǎn)，調(diào)控化學(xué)致癌作用通路、細(xì)胞色素P450代謝通路、p53信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路等，通過(guò)藥物反應(yīng)、酒精代謝過(guò)程、類(lèi)花生酸代謝過(guò)程、環(huán)氧酶P450活性等生物功能，抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲、擴(kuò)散及對(duì)藥物的耐藥性。本次分析也從側(cè)面反映了國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方治療肝癌的機(jī)制是多途徑、多成分、多功能的，但此研究仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。