蔡嬌嬌 楊歡利 陸文昊 沈秀珍 諸溢揚(yáng)

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一種常見的內(nèi)分泌疾病，我國育齡期女性患病率為5.16%[1]。PCOS患者的甾體激素合成異常，糖、脂代謝機(jī)制受損，對患者進(jìn)行促排卵治療后，卵母細(xì)胞的質(zhì)量和發(fā)育潛能可能受到影響。既往研究顯示PCOS患者卵母細(xì)胞成熟度和受精率降低，胚胎著床率也降低[2-3]，也有研究表明PCOS患者的囊胚形成率和累積活產(chǎn)率并沒有受到影響[4]。因此，對于PCOS患者卵母細(xì)胞質(zhì)量與胚胎發(fā)育潛能的關(guān)系，臨床并沒有定論。本文通過回顧性分析PCOS患者的各項(xiàng)數(shù)值，探討輔助生殖技術(shù)中PCOS對患者卵母細(xì)胞和胚胎發(fā)育潛能的影響，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2019年1月至2021年12月在浙江省臺州醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心接受體外受精（in vitro fertilization,IVF）助孕的患者242例作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）女方年齡＜35歲；（2）長方案或拮抗劑方案促排卵治療；（3）受精方式為常規(guī)IVF。排除女方卵巢早衰患者、男方精液嚴(yán)重質(zhì)量異常患者以及處于卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）受精周期者。其中PCOS患者95例（PCOS組），單純輸卵管因素不孕患者147例（對照組）。PCOS診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：（1）稀發(fā)排卵或無排卵；（2）高雄激素的臨床表現(xiàn)和（或）高雄激素血癥；（3）卵巢多囊樣改變：B超檢查一側(cè)卵巢或雙側(cè)卵巢直徑2～9 mm的竇卵泡數(shù)≥12個，和（或）卵巢體積≥10 ml。上述條件符合其中2條，并排除其他高雄激素血癥疾?。ㄈ缦忍煨阅I上腺皮質(zhì)增生、庫欣綜合征等）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者對治療方案知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 兩組患者均采用長方案或拮抗劑方案進(jìn)行促排卵。當(dāng)優(yōu)勢卵泡直徑≥18 mm，同時至少有3個卵泡的直徑≥17 mm時，給予5 000～10 000 U人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）肌肉注射，35～36 h后陰道超聲引導(dǎo)下取卵，卵母細(xì)胞在體外培養(yǎng)4～5 h后行常規(guī)IVF。

男方于女方取卵日留取精液，密度梯度離心法優(yōu)化精液，按1萬精子/卵加入受精微滴，精卵共同孵育，置于37℃，6%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。18～20 h后觀察受精情況。受精后第2天（D2）和D3觀察胚胎卵裂情況，D5、D6觀察囊胚發(fā)育情況。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察并比較（1）兩組患者一般資料，包括女方年齡、不孕年限、BMI、基礎(chǔ)卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）、基礎(chǔ)促黃體生成素（luteinizing hormone,LH）、基礎(chǔ)雌二醇（estradiol,E2）、基礎(chǔ)睪酮（testosterone,T）、促性腺激素（gonadotropin,Gn）總量、Gn總天數(shù)；（2）兩組患者獲卵數(shù)及卵母細(xì)胞質(zhì)量，包括成熟卵母細(xì)胞數(shù)、卵母細(xì)胞成熟率、受精數(shù)、受精率、正常受精數(shù)、正常受精率；（3）兩組患者胚胎發(fā)育情況，包括卵裂數(shù)、卵裂率、D3優(yōu)胚數(shù)、D3優(yōu)胚率、可利用胚胎數(shù)、可利用胚胎率、囊胚形成數(shù)、囊胚形成率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較 兩組患者女方年齡、女方不孕年限、基礎(chǔ)FSH、基礎(chǔ)E2、Gn總量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05）。PCOS組患者 BMI、基礎(chǔ)LH、基礎(chǔ)T、Gn總天數(shù)均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 兩組患者獲卵數(shù)及卵母細(xì)胞質(zhì)量比較 兩組患者受精率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PCOS組患者獲卵數(shù)、成熟卵母細(xì)胞數(shù)、受精數(shù)、正常受精數(shù)均多于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），但成熟卵母細(xì)胞率、正常受精率均低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者獲卵數(shù)及卵母細(xì)胞質(zhì)量比較

2.3 兩組患者胚胎發(fā)育情況比較 兩組患者D3優(yōu)胚數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PCOS組患者由于獲卵多，其卵裂數(shù)、可利用胚胎數(shù)、囊胚形成數(shù)均多于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），但卵裂率、D3優(yōu)胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率均低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者胚胎發(fā)育情況比較

3 討論

PCOS是一種復(fù)雜的異質(zhì)性疾病，其特征是高雄激素、慢性無排卵，明顯的家族聚集性表明PCOS具有遺傳性[6]。來源于PCOS患者的卵泡膜細(xì)胞培養(yǎng)顯示睪酮分泌明顯增加，這種高雄激素環(huán)境改變了卵泡周圍的微環(huán)境，導(dǎo)致卵泡發(fā)生異常[7]。另有研究發(fā)現(xiàn)PCOS患者的卵母細(xì)胞中與減數(shù)分裂和細(xì)胞骨架組織相關(guān)的一些基因TUBB8和TUBA1C表達(dá)異常[8]，TUBB8基因的突變會導(dǎo)致減數(shù)分裂紡錘體組裝受阻，卵母細(xì)胞成熟阻滯，胚胎早期發(fā)育阻滯等[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，PCOS組與對照組相比獲卵數(shù)明顯較多，其成熟卵母細(xì)胞數(shù)、受精卵數(shù)、正常受精數(shù)等都顯著增多，說明由于PCOS患者基礎(chǔ)竇卵泡較多，經(jīng)促排后能募集更多的卵母細(xì)胞。但是本研究也發(fā)現(xiàn)其卵母細(xì)胞成熟率、正常受精率、卵裂率則剛好相反，說明卵母細(xì)胞質(zhì)量明顯受到影響。另外，D3優(yōu)胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率也明顯低于對照組，說明PCOS對胚胎發(fā)育潛能也有影響。有文獻(xiàn)報道，PCOS患者卵泡液中同型半胱氨酸會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性反應(yīng)，而且卵母細(xì)胞暴露于高LH和高雄激素環(huán)境，顆粒細(xì)胞分裂和凋亡功能發(fā)生改變，導(dǎo)致卵母細(xì)胞質(zhì)量也相應(yīng)下降[11-12]。既往研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者雖然胚胎質(zhì)量比其他患者降低，但是臨床妊娠率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[3]，也有持相反觀點(diǎn)認(rèn)為PCOS患者胚胎質(zhì)量優(yōu)于普通排卵正?；颊遊13]。本研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者D3胚胎質(zhì)量比對照組顯著下降，囊胚形成率也比對照組低，與黃劍磊等[3]的研究結(jié)果一致。

綜上所述，PCOS患者雖然獲卵較多，但卵母細(xì)胞成熟度及正常受精率、優(yōu)胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率都明顯下降，說明其卵母細(xì)胞質(zhì)量明顯受到影響。臨床上目前可采用雙扳機(jī)來改善卵母細(xì)胞成熟度，實(shí)驗(yàn)室也有通過IVM技術(shù)獲得更多成熟卵母細(xì)胞，其目的都是為了患者獲得更多優(yōu)質(zhì)胚胎及提高妊娠率，當(dāng)然，目前對改善卵母細(xì)胞質(zhì)量的方法需要更多的深入研究，以期給患者帶來更好的臨床結(jié)局。