王善龍

（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，河南 洛陽(yáng) 471000）

根據(jù)新型冠狀病毒肺炎疫情防控工作需要，為全力支援上海市大規(guī)模新型冠狀病毒核酸篩查檢測(cè)工作，2022年4月6日，河南省洛陽(yáng)市衛(wèi)生健康委員會(huì)響應(yīng)河南省衛(wèi)生健康委員會(huì)統(tǒng)一部署，緊急抽調(diào)洛陽(yáng)市各大醫(yī)院30名分子檢驗(yàn)業(yè)務(wù)骨干組建成核酸檢測(cè)醫(yī)療隊(duì)馳援上海。文章就洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)在上海市青浦區(qū)氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室大規(guī)模核酸檢測(cè)工作的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)，為將來(lái)可能出現(xiàn)的新型冠狀病毒核酸或其他突發(fā)公共衛(wèi)生事件的大規(guī)模實(shí)驗(yàn)室篩查工作提供參考。

1 氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室建設(shè)

（1）氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室由多個(gè)封閉式的白色氣膜艙組合而成，不同艙體有各自的功能分區(qū)，分別是試劑準(zhǔn)備區(qū)（Ⅰ區(qū)）、標(biāo)本制備區(qū)（Ⅱ區(qū)）、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增分析區(qū)（Ⅲ區(qū)）。3個(gè)功能區(qū)域在物理空間上完全相互獨(dú)立，只能通過(guò)專門(mén)設(shè)置的傳遞窗傳遞標(biāo)本。以艙體劃分功能區(qū)，一方面可以避免不同工序的干擾，另一方面也確保了檢測(cè)人員和檢測(cè)環(huán)境的安全。氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室屬于裝配式建筑，選址靈活，運(yùn)輸便捷。本次上海市青浦區(qū)河南醫(yī)療隊(duì)方艙實(shí)驗(yàn)室即是建設(shè)在原室內(nèi)羽毛球場(chǎng)內(nèi)（圖1）。另外，氣膜方艙還能重復(fù)利用，具備優(yōu)良的環(huán)保屬性。當(dāng)完成檢測(cè)任務(wù)后，可快速恢復(fù)場(chǎng)地原貌。

（2）由于醫(yī)療隊(duì)到達(dá)上海時(shí)，氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建成，生物安全柜、核酸提取儀等許多儀器設(shè)備已配置完成，無(wú)法對(duì)氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室的工作流程進(jìn)行改動(dòng)，只能在已有實(shí)驗(yàn)室布局基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化。

圖1 河南醫(yī)療隊(duì)氣膜方艙P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室示意圖

（3）在氣膜實(shí)驗(yàn)室安裝過(guò)程中，生產(chǎn)商一定要提前與實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人進(jìn)行溝通，確保艙體布局合理。各區(qū)常壓，一定要選擇通風(fēng)良好的場(chǎng)地。根據(jù)單一流向的要求開(kāi)門(mén)、封門(mén)、安裝傳遞窗。各區(qū)根據(jù)區(qū)域面積配備移動(dòng)紫外線消毒燈3～5臺(tái)，門(mén)上都要有明確的標(biāo)識(shí)，每個(gè)分區(qū)內(nèi)的儀器、設(shè)備、實(shí)驗(yàn)用品等要有明顯的編號(hào)及顏色標(biāo)識(shí)。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要有相應(yīng)的制冷設(shè)備，尤其是儀器較多的Ⅲ區(qū)，要根據(jù)儀器數(shù)量安裝相應(yīng)的空調(diào)或冷氣扇，以保持艙內(nèi)溫度適宜，同時(shí)要注意空調(diào)的排水問(wèn)題，避免造成場(chǎng)地的積水，影響實(shí)驗(yàn)室安全。

2 生物安全防護(hù)

新型冠狀病毒核酸檢測(cè)是一項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)較高的操作，生物安全防護(hù)極為重要。氣膜實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)必須符合二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室和臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的基本要求，還應(yīng)符合《醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)工作手冊(cè)（試行第二版）》和《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）》的相關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室建設(shè)完成后，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前要由省級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)院感專家對(duì)全隊(duì)成員進(jìn)行生物安全防護(hù)再培訓(xùn)，尤其是防護(hù)服的穿脫、醫(yī)療廢物的處理等現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)，并進(jìn)行考核，所有隊(duì)員考核合格方可入艙操作[1]。

每個(gè)班組、每個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)均要設(shè)置1名生物安全員，每次進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室均要有生物安全員對(duì)所在班組及區(qū)域隊(duì)員的操作、防護(hù)服的穿脫等過(guò)程進(jìn)行監(jiān)督。嚴(yán)禁隊(duì)員單獨(dú)穿脫防護(hù)服。每天對(duì)所有隊(duì)員進(jìn)行至少1次的核酸檢測(cè)和至少2次體溫測(cè)量，并建立健康檔案。

3 實(shí)驗(yàn)流程的實(shí)施經(jīng)驗(yàn)

3.1 標(biāo)本交接的經(jīng)驗(yàn)

標(biāo)本應(yīng)由專人送檢，送檢需要送檢單、轉(zhuǎn)運(yùn)箱碼等信息。實(shí)驗(yàn)室工作人員需對(duì)所送檢樣本來(lái)源、數(shù)量等信息進(jìn)行登記、核對(duì)，并將所有送檢單留存好，按日期進(jìn)行裝訂，以備核查。標(biāo)本接收人員要登錄軟件對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)箱碼進(jìn)行掃碼接收，接收后要及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)入實(shí)驗(yàn)室，在標(biāo)本制備區(qū)生物安全柜內(nèi)打開(kāi)轉(zhuǎn)運(yùn)箱，并對(duì)標(biāo)本編號(hào)進(jìn)行核對(duì)，確認(rèn)無(wú)誤后進(jìn)入檢測(cè)流程。

（1）由于目前大規(guī)模核酸檢測(cè)標(biāo)本均為10混1或20混1，所以標(biāo)本體積較大。洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)所在的青浦區(qū)氣膜實(shí)驗(yàn)室單日最大可接受標(biāo)本量為10萬(wàn)管，日均檢測(cè)量超過(guò)6萬(wàn)管。短時(shí)間內(nèi)要接收大量標(biāo)本，所以在標(biāo)本接收處的工作人員不僅要操作熟練，而且要有體力，最好安排年輕的檢測(cè)人員值守。

（2）在全員篩查標(biāo)本量非常大的情況下，一旦發(fā)現(xiàn)其中某管異常需要復(fù)查時(shí)，要迅速、準(zhǔn)確地從幾萬(wàn)個(gè)標(biāo)本中找出這個(gè)標(biāo)本，快速?gòu)?fù)查并上報(bào)，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行唯一編號(hào)。同時(shí)，為保證標(biāo)本具有準(zhǔn)確的可溯源性，我們?yōu)槊總€(gè)生物安全柜設(shè)置了專屬字母編號(hào)，A、B、C、D、E、F為Ⅱ區(qū)1的生物安全柜，G、H、I、M、N、O為Ⅱ區(qū)2的生物安全柜。在某個(gè)生物安全柜進(jìn)行加樣的操作人員流程表（圖2）的編號(hào)前加上該生物安全柜的字母編號(hào)，同時(shí)將生物安全柜與提取儀進(jìn)行對(duì)應(yīng)，某臺(tái)提取儀僅對(duì)某臺(tái)安全柜的標(biāo)本進(jìn)行提取。這樣，即使發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性標(biāo)本，也能在第一時(shí)間找到安全柜和對(duì)應(yīng)的提取儀，及時(shí)進(jìn)行消殺處理，最大程度地保證實(shí)驗(yàn)室生物安全。

3.2 檢測(cè)過(guò)程和經(jīng)驗(yàn)

圖2 核酸檢測(cè)流程表

（1）每組隊(duì)員需提前達(dá)到實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作，根據(jù)當(dāng)日的工作量領(lǐng)取試劑和耗材，并與上一組進(jìn)行標(biāo)本及儀器的交接（由于是24 h工作制，人員輪崗，儀器不停）。一方面可以提高Ⅱ區(qū)的工作效率，為標(biāo)本的檢測(cè)爭(zhēng)取更多的時(shí)間；另一方面可提高儀器的工作效率，保證耗時(shí)較長(zhǎng)的擴(kuò)增儀持續(xù) 工作。

（2）所有人員按三級(jí)防護(hù)要求穿戴好防護(hù)裝備，根據(jù)分工迅速到達(dá)指定崗位。負(fù)責(zé)Ⅲ區(qū)的2～3名人員迅速與上一組人員進(jìn)行交接班，并做好相應(yīng)的登記，及時(shí)判讀上一組交班的結(jié)果。1～2名人員攜帶擴(kuò)增試劑迅速進(jìn)入Ⅰ區(qū)，完成本班次的試劑配制。1～2名人員到標(biāo)本接收處值守，隨時(shí)準(zhǔn)備接收標(biāo)本。其余人員攜帶本班次所需的提取試劑及耗材進(jìn)入Ⅱ區(qū)工作。Ⅰ區(qū)人員完成本班次所需試劑的配制后，進(jìn)入Ⅲ區(qū)參與擴(kuò)增儀的操作和結(jié)果的判讀。形成Ⅱ區(qū)與Ⅲ區(qū)人數(shù)比為4∶1的工作模式。

（3）Ⅱ區(qū)的加樣及提取操作過(guò)程嚴(yán)格按提取試劑及儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每次加樣后用75%乙醇對(duì)生物安全柜操作區(qū)進(jìn)行擦拭，每次提取結(jié)束后用75%乙醇對(duì)提取儀內(nèi)部進(jìn)行擦拭，并用紫外燈照射10 min。Ⅲ區(qū)每板次結(jié)果判讀結(jié)束后，要通過(guò)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的對(duì)講機(jī)或智能手機(jī)及時(shí)將異常結(jié)果信息反饋至Ⅱ區(qū)，Ⅱ區(qū)操作人員接到異常結(jié)果信息后第一時(shí)間對(duì)該標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢，并按醫(yī)療廢物處理要求及時(shí)清理陰性樣本。對(duì)當(dāng)班未能及時(shí)復(fù)查的異常結(jié)果標(biāo)本，要注明異常原因，做好交接班記錄，交由下一班次人員進(jìn)行復(fù)檢。Ⅱ區(qū)操作工作結(jié)束后，用75%乙醇擦拭生物安全柜、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和提取儀的內(nèi)外表面，地面噴灑75%乙醇1 min后，用拖布拖干，開(kāi)啟移動(dòng)紫外消毒燈。

（4）Ⅲ區(qū)操作人員要嚴(yán)格遵循擴(kuò)增儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并注意根據(jù)擴(kuò)增試劑的不同，在PCR儀上選擇相應(yīng)的擴(kuò)增程序，根據(jù)Ⅱ區(qū)傳遞過(guò)來(lái)的流程表對(duì)相應(yīng)的標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行判讀。擴(kuò)增結(jié)束后，關(guān)閉PCR儀電源，用75%乙醇擦拭PCR儀內(nèi)外，上報(bào)陰性結(jié)果或通過(guò)對(duì)講機(jī)將需要復(fù)查的標(biāo)本信息通知Ⅱ區(qū)操作人員。

（5）檢測(cè)操作過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)標(biāo)本溢灑的情況，在出現(xiàn)標(biāo)本溢灑時(shí)，首先要在溢灑區(qū)域鋪上紙巾（完全覆蓋溢灑區(qū)），然后用75%乙醇噴灑在紙巾上，作用30 min以上，再將紙巾小心移除。清理過(guò)程中，應(yīng)避免手部接觸污染物，清理污染物的紙巾按感染性廢物處理，最后用紫外消毒燈對(duì)溢灑區(qū)進(jìn)行照射消毒。

（6）洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)標(biāo)本制備隊(duì)員能在10 min內(nèi)完成1板90個(gè)標(biāo)本的加樣工作，充足的熟練加樣人員是保證按時(shí)完成任務(wù)的關(guān)鍵，熟練的提取儀操作員也是保證檢測(cè)質(zhì)量的重要崗位。

3.3 復(fù)檢原則及上報(bào)經(jīng)驗(yàn)

（1）結(jié)果出來(lái)后，Ⅲ區(qū)人員首先觀察反應(yīng)曲線，對(duì)出現(xiàn)的異常曲線，尤其是對(duì)于Ct值較低但曲線平斜或非特異性翹尾等情況（圖3、圖4），要及時(shí)進(jìn)行復(fù)檢。若出現(xiàn)O基因和N基因雙靶位點(diǎn)陽(yáng)性，應(yīng)第一時(shí)間上報(bào)，同時(shí)立即用2種擴(kuò)增試劑進(jìn)行復(fù)檢；若出現(xiàn)O基因或N基因其中1個(gè)靶位點(diǎn)陽(yáng)性，立即用另一種試劑進(jìn)行復(fù)檢。檢測(cè)隊(duì)在大篩實(shí)際操作時(shí)發(fā)現(xiàn)，Ⅲ區(qū)人員必須及時(shí)、準(zhǔn)確地判讀和上報(bào)，才能保質(zhì)保量地完成檢測(cè)任務(wù)，因此保證Ⅲ區(qū)人員的數(shù)量及熟練程度是工作順利開(kāi)展的關(guān)鍵。

圖3 反應(yīng)曲線平斜

注：此種曲線多為反應(yīng)液配制后保存不當(dāng)或陽(yáng)性質(zhì)控污染，如出現(xiàn)較多需考慮為實(shí)驗(yàn)室污染。

（2）大篩檢測(cè)時(shí)往往是多臺(tái)儀器同時(shí)出結(jié)果，需要成批量復(fù)查和上報(bào)結(jié)果，Ⅲ區(qū)就需要將結(jié)果進(jìn)行匯總后再傳遞到Ⅱ區(qū)。我們通過(guò)數(shù)次修改完善，發(fā)現(xiàn)用表格方式不僅能夠快速將結(jié)果信息匯總，更能夠使Ⅱ區(qū)在極短時(shí)間內(nèi)對(duì)標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，進(jìn)行下一步工作（圖5）。

圖5 擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)成批量匯總結(jié)果登記表

4 人員

（1）人員分工。洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)共30人，每名隊(duì)員均持有河南省PCR資格證，并能夠熟練掌握核酸提取、擴(kuò)增和生物安全防護(hù)技能，具體人員崗位分工及職責(zé)見(jiàn)表1。

（2）注意隊(duì)員的健康狀況。每天至少1次核酸檢測(cè)，2次體溫測(cè)量。加強(qiáng)隊(duì)員心理疏導(dǎo)，通過(guò)黨組織民主生活會(huì)及小組交流等多種方式，舒緩壓力，保持積極樂(lè)觀的心態(tài)，避免出現(xiàn)焦慮等情緒，并時(shí)刻保持自我防護(hù)意識(shí)。

（3）嚴(yán)格管理。援滬期間嚴(yán)禁私自外出，要保持方艙實(shí)驗(yàn)室、駐地酒店兩點(diǎn)一線的狀態(tài)，盡量避免與本地人員接觸，減少感染 風(fēng)險(xiǎn)。

表1 氣膜方艙實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)隊(duì)各職能崗位及職責(zé)

5 總結(jié)

在援滬期間，為應(yīng)對(duì)大批量核酸檢測(cè)的需要，提高效率，縮短報(bào)告時(shí)間，完成疫情防控指揮部分派的檢測(cè)任務(wù)，洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)每次檢測(cè)完成后均認(rèn)真梳理和優(yōu)化檢測(cè)流程以及交接班程序，強(qiáng)化了每位隊(duì)員操作的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，保證了高質(zhì)高效地完成核酸檢測(cè)任務(wù)。

總結(jié)洛陽(yáng)醫(yī)療隊(duì)本次援滬的經(jīng)驗(yàn)，主要有以下幾點(diǎn)：（1）各項(xiàng)責(zé)任劃分明確，各司其職。各醫(yī)院抽調(diào)的都是業(yè)務(wù)骨干，在各自醫(yī)院都能獨(dú)當(dāng)一面，組成臨時(shí)團(tuán)隊(duì)后要有明確的責(zé)任擔(dān)當(dāng)，大家齊心協(xié)力才能保證各項(xiàng)工作的順利開(kāi)展。（2）操作流程規(guī)范，注重細(xì)節(jié)。完整、準(zhǔn)確的流程記錄表是保證檢測(cè)結(jié)果可溯源的關(guān)鍵，尤其是在大規(guī)模篩查中，如何準(zhǔn)確、快速地找到異常標(biāo)本至關(guān)重要。（3）專業(yè)技術(shù)過(guò)硬，尤其是Ⅲ區(qū)結(jié)果判讀人員，一定要在短時(shí)間內(nèi)迅速判斷出結(jié)果，日常工作中，因陽(yáng)性標(biāo)本較少，往往只是看Ct值，但在大規(guī)模篩查中需要根據(jù)諸多因素，綜合分析判斷，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤。（4）上海當(dāng)?shù)卣块T(mén)的溝通協(xié)調(diào)與配合，在生活、交通、物資保障等方面的大力支持也是援滬工作順利開(kāi)展的重要保證。在所有成員的共同努力下，檢測(cè)隊(duì)才能圓滿完成援滬核酸檢測(cè)的艱巨任務(wù)。

總之，快速、準(zhǔn)確的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)已成為新型冠狀病毒肺炎疫情防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，這對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員提出了更高的要求。只有做好生物安全防護(hù)、嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程實(shí)施，做好全流程質(zhì)量控制，提高核酸檢出率，才能更好地完成疫情防控或?qū)?lái)發(fā)生的突發(fā)公共衛(wèi)生事件大規(guī)模篩查工作。

執(zhí)筆王善龍（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科）

河南省洛陽(yáng)市核酸檢測(cè)醫(yī)療隊(duì)名單（排名不分先后）

王善龍（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院），孟景昱（洛陽(yáng)市東方人民醫(yī)院），劉俊曉（洛陽(yáng)市中心醫(yī)院），鄭光祿（洛陽(yáng)市中醫(yī)院），粘志光（洛陽(yáng)市中心醫(yī)院），李佳根（嵩縣人民醫(yī)院），袁林超（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院），王熠鵬（洛陽(yáng)市偃師人民醫(yī)院），王艷秋（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院），王德權(quán)（嵩縣人民醫(yī)院），劉曉飛（洛陽(yáng)市婦幼保健院），陶英杰（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院），馬小陽(yáng)（洛陽(yáng)市第三人民醫(yī)院），付曉峰（洛陽(yáng)市第一人民醫(yī)院），趙伊萌（洛陽(yáng)市婦幼保健院），陳嘉楠（洛陽(yáng)市東方醫(yī)院），王俊皓（宜陽(yáng)縣人民醫(yī)院），聶瑞國(guó)（宜陽(yáng)縣人民醫(yī)院），劉麗（新安縣人民醫(yī)院），薛靜（新安縣人民醫(yī)院），李琨（洛陽(yáng)市第五人民醫(yī)院），韋寶君（洛陽(yáng)市第五人民醫(yī)院），王磊（洛陽(yáng)市第一人民醫(yī)院），王博（洛陽(yáng)市偃師人民醫(yī)院），孫小召（汝陽(yáng)縣人民醫(yī)院），任夢(mèng)浩（汝陽(yáng)縣人民醫(yī)院），李磊（洛陽(yáng)市第三人民醫(yī)院），張藝博（伊川縣人民醫(yī)院），高鴻翔（伊川縣人民醫(yī)院），張?jiān)S靜（洛陽(yáng)市中醫(yī)院）