彭艷伶,陳世云,伍天碧,周可磊,李昊
(1.四川省西昌市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,四川 西昌 615050;2.四川省涼山州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,四川 西昌 615050;3.西昌學(xué)院,四川 西昌 615050)
圓環(huán)病毒是一類(lèi)無(wú)囊膜單鏈環(huán)狀DNA病毒,屬于圓環(huán)病毒科,包括圓圈病毒屬、圓環(huán)病毒屬。鴨圓環(huán)病毒(DuCV)目前被列為圓環(huán)病毒屬的暫定種,DuCV 無(wú)囊膜,呈二十面體對(duì)稱(chēng),直徑為14~17 nm,基因組大小為2 kb。
感染DuCV 的病鴨在臨床上表現(xiàn)為發(fā)育遲緩、體重減輕及羽毛雜亂等。從病理學(xué)分析,感染DuCV鴨的免疫組織受損,導(dǎo)致淋巴細(xì)胞萎縮、凋亡甚至壞死等,從而讓鴨免疫力降低,對(duì)其他疾病易感,容易發(fā)生繼發(fā)感染和多重感染,DuCV與鴨大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌(RA)、鴨病毒性肝炎Ⅰ型病毒(DHV)等混感率較高。
病鴨為櫻桃谷肉鴨,其羽毛凌亂,羽軸出血,生長(zhǎng)遲緩,站立不穩(wěn),行走時(shí)雙腳向外叉開(kāi),呈八字腳。個(gè)別鴨癱瘓,腳皮干燥、無(wú)光澤,蹼有出血斑,流淚,眼周?chē)袦I圈,臉部一側(cè)有囊腫,排綠色、褐色稀便。
剖檢20 羽病鴨,見(jiàn)心包積液,心臟有針點(diǎn)狀出血,個(gè)別的心尖彌漫性出血;胸腺萎縮,有出血點(diǎn);喉頭變形;肝臟腫大,邊緣鈍圓,有的肝變性、壞死,與氣囊粘連,表面有淡黃色纖維素性滲出物;脾臟腫大或萎縮;胰腺有出血點(diǎn);氣囊內(nèi)有白色或黃色纖維素性滲出物;臉部囊腫內(nèi)容物為黃色干酪樣物質(zhì)。
無(wú)菌采集病鴨胸腺、肝臟、脾臟、心臟、肺臟等組織。采集的樣本分為兩份,一份進(jìn)行細(xì)菌分離,冷藏保存,一份進(jìn)行鴨病原分子檢測(cè),冷凍保存。
3.1 病料總核酸提取 取0.5 g胸腺、肝臟、脾臟、心臟、肺臟等組織置于2 mL EP 管中,加入滅菌PBS,于勻漿器進(jìn)行研磨,反復(fù)凍融3 次,離心取上清,用總核酸提取試劑盒進(jìn)行核酸提取。
使用實(shí)驗(yàn)室建立的RT-qPCR 方法對(duì)坦布蘇病毒(DTMUV)、C型鴨肝炎病毒(DHCV)、A型鴨肝炎病毒(DHAV)、血清4 型禽腺病毒(FAdV-4)、禽肉瘤病毒(ASV)、新型鵝細(xì)小病毒(NGPV)、鴨圓環(huán)病毒(DuCV),番鴨細(xì)小病毒(MPDV)8 種病原進(jìn)行檢測(cè),所有檢測(cè)反應(yīng)體系為:2×One Step SYBR Green Mix 10 μL、One Step SYBR Green Enzyme Mix 1 μL、上下游引物各1μL、模板2μL,ddH2O補(bǔ)足至20 μL,反應(yīng)程序?yàn)椋耗孓D(zhuǎn)錄50 ℃3 min,預(yù)變性95 ℃30 s,循環(huán)反應(yīng)95 ℃15 s,55 ℃20 s(循環(huán)數(shù)為40),溶解段:95 ℃15 s,60 ℃1 min,95 ℃15 s(循環(huán)數(shù)為1)。
引物序列見(jiàn)表1,RT-qPCR結(jié)果見(jiàn)圖1。
表1 常見(jiàn)病原檢測(cè)引物信息
圖1 RT-qPCR結(jié)果
3.2 細(xì)菌分離鑒定 無(wú)菌取鴨肝臟等病料分別接種于麥康凱瓊脂平板和血瓊脂平板,于37 ℃恒溫培養(yǎng)24~48 h,結(jié)果未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)。
在20份樣本中,有4份樣本為DuCV陽(yáng)性,其他病原DTMUV、DHCV、DHAV、FAdV-4、ASV、NGPV和MPDV均為陰性。
根據(jù)鴨場(chǎng)情況制定有效防控方法,降低鴨的死亡率,控制繼發(fā)感染。
4.1 加強(qiáng)消毒和飼養(yǎng)管理 對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境、鴨群、器具、飲水、飼料等進(jìn)行嚴(yán)格消毒,使用0.3%的過(guò)氧乙酸帶鴨消毒,飲水用2%~5%的含氯量25%以上漂白粉消毒,消毒液現(xiàn)配現(xiàn)用。加強(qiáng)進(jìn)出場(chǎng)人員的隔離和管理。
加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,改善養(yǎng)殖環(huán)境,增加飼料營(yíng)養(yǎng),提高病鴨抵抗力。
病鴨、疑似感染鴨隔離飼養(yǎng),病死鴨進(jìn)行無(wú)害化處理。
4.2 治療
緊急利用抗病毒類(lèi)中草藥板藍(lán)根10 g、黃芪10 g、金銀花10 g、連翹10 g、黨參5 g、蒼術(shù)5 g、當(dāng)歸5 g、白術(shù)3 g、陳皮3 g進(jìn)行治療。
鴨圓環(huán)病毒可造成免疫抑制,導(dǎo)致其感染其他病原而死亡。
臨床上防控鴨圓環(huán)病毒傳播和流行應(yīng)加強(qiáng)早期診斷,發(fā)現(xiàn)疑似病例要及時(shí)隔離及治療。避免該病造成損失,應(yīng)做好平時(shí)防控和消毒。