陳志祿

（青海省烏蘭縣畜牧獸醫(yī)站，青海 烏蘭 817199）

0 引言

牛布氏桿菌病是一種重要的細(xì)菌性疾病，不僅能使母牛發(fā)生流產(chǎn)和不孕，使公牛發(fā)生睪丸炎和不育，還對公共衛(wèi)生造成威脅[1-2]。近年，我國的牛布氏桿菌病的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，牛布氏桿菌病的流行情況成為當(dāng)前養(yǎng)牛業(yè)的研究熱點[3]。研究發(fā)現(xiàn)奶牛場的布氏桿菌病的感染情況不一，其主要原因是由于疫病防控意識淡泊，檢疫和防疫工作不到位?；⒓t平板凝集試驗和試管凝集試驗雖然靈敏度不高，操作復(fù)雜；但虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的檢測價格較于PCR和ELISA的價格低，且符合GB/T18646—2018的要求。應(yīng)做好牛布魯氏桿菌病的預(yù)防措施，本文探討青海省烏蘭縣牛布氏桿菌病的感染情況，為進(jìn)一步防控牛布氏桿菌病奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

虎紅平板凝聚試驗抗原、牛布氏桿菌病陽性血清、牛布氏桿菌病陰性血清和牛布氏桿菌病試管凝集試驗抗原均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。代測血清采自青海省烏蘭縣5家不同規(guī)模奶牛場，樣品數(shù)量共1 200份。

1.2 試驗方法

1.2.1 虎紅平板試管凝聚試驗

（1）操作方法。取30μL的受檢血清置于干凈的玻璃板上，向受檢血清中加入30μL的牛布氏桿菌病虎紅平板凝聚試驗抗原，使用一次性接種環(huán)將受檢血清和抗原均勻混合。此外，在虎紅平板試驗時，還應(yīng)同時設(shè)置陰性對照和陽性對照，試驗過程與受檢血清的檢測過程相同。

（2）判定標(biāo)準(zhǔn)。陽性對照在5～10 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的沙粒樣凝集現(xiàn)象；陰性對照未出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，且混合液呈均勻粉紅色；受檢血清在5～10 min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性；反之判為陰性，且混合液呈均勻粉紅色。

1.2.2 牛布氏桿菌病試管凝集試驗

（1）操作步驟。將4支試管編號后，向第1支試管中加入920μL的稀釋液，再向其他試管中加入0.5 mL稀釋液；再取受檢血清80μL加入到第1支試管中混勻，用移液器移取第1支試管中0.5 mL的混合液加入到第2支試管中混勻后，用移液器移取移取第2支試管中0.5 mL的混合液加入到第3支支試管中，以此類推稀釋至第4支試管，并使用移液器移取第4支試管中的0.5 mL混合液棄掉。通過倍比稀釋，獲得第1～4支試管的血清稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100。此外，陰性血清和陽性血清用稀釋液將其稀釋到原有的滴度；稀釋抗原的方法與受檢血清的稀釋方法相同。將稀釋的抗原分別加入到稀釋好的待檢測的受檢血清中，每支試管0.5 mL，搖勻，獲得第1～4支試管的血清稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100。最后置37 ℃培養(yǎng)24 h，取出判定并記錄結(jié)果。

（2）比濁管制備。比濁管配制參照表1。

表1 比濁管

（3）反應(yīng)程度判斷。參照比濁管對各試管的上層液體的清亮度進(jìn)行判讀：完全凝集，上層液體完全清亮，記為4個“+”；菌體相對完全凝集，上層液體相對完全清亮，記為3個“+”；菌體部分凝集，上層液體輕微渾濁，記為2個“+”；菌體有凝集現(xiàn)象，上層液體渾濁，記為1個“+”；未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，液體均勻混濁，記為“-”。

（4）試驗成立條件。陽性血清出現(xiàn)完全凝集（++++），而陰性血清無凝集（-），抗原對照無自凝（-）。

（5）結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。在稀釋血清為1∶100時，2個以上“+”的凝集，該受檢血清可確定為陽性。

2 結(jié)果與分析

2019年青海省烏蘭縣5家不同規(guī)模奶牛場1 200份牛血清進(jìn)行虎紅平板凝集試驗檢測，檢測出陽性血清43份，陽性率為3.58%。再對43份陽性血清進(jìn)行試管凝集試驗檢測，檢測出陽性血清40份，陽性率為3.33%，見表2。

表2 5家不同規(guī)模奶牛場的布氏桿菌病血清學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

3.1 加強外防輸入，內(nèi)防檢測工作

養(yǎng)殖戶應(yīng)堅持“自繁自養(yǎng)”，不從場外引種，如必要時需進(jìn)行引種，養(yǎng)殖戶應(yīng)禁止在疫區(qū)引種，引種的牛必須在出場前和進(jìn)場后進(jìn)行牛布氏桿菌病血清學(xué)檢測，并落實隔離工作，防止牛布氏桿菌病進(jìn)入養(yǎng)殖場。此外，養(yǎng)殖戶應(yīng)定期對養(yǎng)殖場內(nèi)的牛進(jìn)行牛布氏桿菌病的血清學(xué)進(jìn)行檢測和監(jiān)測，并建立牛的健康檔案。

3.2 凈化感染牛布氏桿菌病的牛

當(dāng)養(yǎng)殖場出現(xiàn)感染牛布氏桿菌病的牛后，養(yǎng)殖戶應(yīng)及時將健康牛與其分開隔離圈養(yǎng)，并在1～2個月內(nèi)定期對健康牛進(jìn)行血清學(xué)檢測，并將檢測出的陽性患病牛進(jìn)行隔離和剃除，直至牛中沒有患病牛出現(xiàn)。

3.3 制定免疫計劃，加強疫苗接種

養(yǎng)殖戶應(yīng)根據(jù)養(yǎng)殖場的自身情況和所在地區(qū)政府的免疫要求積極制定牛的免疫計劃，并積極實施疫苗接種工作，以此有效提升牛對牛布氏桿菌病的抵抗能力。

3.4 加強養(yǎng)殖人員生物安全工作

養(yǎng)殖場的養(yǎng)殖人員應(yīng)做好自我防護(hù)工作，如工作中佩戴一次性醫(yī)用外科口罩、一次性橡膠手套和護(hù)目鏡等防護(hù)用品用具。養(yǎng)殖場還應(yīng)定期組織養(yǎng)殖人員學(xué)習(xí)生物安全，以此提升養(yǎng)殖人員對牛布魯氏桿菌病的了解，加強對牛布魯氏桿菌病的重視。

3.5 病牛處置

對于感染牛布氏桿菌病的牛，養(yǎng)殖戶應(yīng)嚴(yán)格按照《中華人民共和國動物防疫法》及有關(guān)規(guī)定，對患病牛進(jìn)行撲殺，并進(jìn)行無害化處理，防止銷售。

3.6 加強日常清潔消毒工作

養(yǎng)殖戶不僅要定期對牛舍進(jìn)行清掃和消毒，還應(yīng)對牛舍內(nèi)的用品用具進(jìn)行清洗和消毒。其中消毒可選用75%酒精、來蘇兒溶液、15%石灰乳、2%氫氧化鈉溶液和84消毒液等消毒劑。

4 結(jié)束語

牛布氏桿菌病的發(fā)生會給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)帶來很大的打擊，在對青海省5家規(guī)?；? 200份血清采取虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗結(jié)合的鑒定方法，發(fā)現(xiàn)布氏桿菌依然存在，檢出率在3%以上。為良好解決布氏桿菌污染，養(yǎng)殖場需制定感染牛布氏桿菌病或疑似感染牛布氏桿菌病牛的隔離制度，并嚴(yán)格執(zhí)行，養(yǎng)殖場還應(yīng)根據(jù)制定國家的動物疫病處理辦法等相關(guān)要求對感染牛布氏桿菌病牛及其流產(chǎn)產(chǎn)生的死胎等進(jìn)行無害化處理，包括焚燒、深埋等，保動物健康，提高養(yǎng)殖效益。