甘福生 劉小梅 陳智華 盧磊 章燕 趙國榮

(江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 1檢驗(yàn)科，江西 南昌 330012；2心腦血管科；3體檢科)

高脂血癥的典型臨床病理改變是血清中總膽固醇(TC)或三酰甘油(TG)水平顯著升高，實(shí)際臨床中也包括高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平下降，特別是老年人屬于高脂血癥的高發(fā)人群〔1〕。血脂水平改變與多種心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展存在緊密聯(lián)系，是冠脈粥樣硬化、冠心病及缺血性腦卒中等疾病的獨(dú)立危險因素〔2〕。血脂水平發(fā)生異常不僅與平時飲食和運(yùn)動習(xí)慣具有密切聯(lián)系，遺傳因素在高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，某些基因突變或缺陷會導(dǎo)致機(jī)體的脂肪吸收、分解、合成代謝過程發(fā)生差異化改變，從而誘發(fā)嚴(yán)重的高脂血癥〔3〕。腺苷酸環(huán)化酶(ADCY)是人體細(xì)胞膜中廣泛存在的一種酶類，ADCY的9種亞型均在腺苷三磷酸(ATP)生成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)過程中發(fā)揮關(guān)鍵催化作用，ADCY3 就屬于關(guān)鍵成員之一〔4〕?，F(xiàn)已有一些研究證實(shí)ADCY3基因多態(tài)性與肥胖和脂肪肝等疾病存在密切聯(lián)系，但它與機(jī)體脂質(zhì)代謝異常之間的關(guān)系特別是與高脂血癥各血脂異常種類或亞組之間的關(guān)系尚未見詳細(xì)報道。本文研究旨在探討高脂血癥患者血脂異常影響因素及該位點(diǎn)基因多態(tài)性與血脂異常易感性之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院于2018年1月至2020年3月收治的568例老年高脂血癥患者為研究組，并以同期128例健康體檢者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組患者均符合高脂血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕：滿足高TG血癥組(TG≥1.70 mmol/L)或低HDL-C血癥組(HDL-C<1.04 mmol/L)或高TC血癥組(TC≥5.18 mmol/L)或混合型高脂血癥組(TG≥1.70 mmol/L、TC≥5.18 mmol/L)；②對照組各項(xiàng)檢查指標(biāo)均符合要求；③知情同意并簽字。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能異?；蚓窦膊≌?；②中途退出研究者；③3個月內(nèi)使用降血脂相關(guān)藥物者。所有患者在知情同意書上簽字，研究方案已得到醫(yī)院倫理委員會準(zhǔn)許。

1.2一般臨床信息收集 對所有研究對象的一般臨床信息進(jìn)行收集。包括性別、年齡、收縮壓、舒張壓、吸煙和飲酒史。其中吸煙者定義為曾經(jīng)吸煙總數(shù)≥100支；飲酒者定義為受試者每年的飲酒次數(shù)≥12次。

1.3DNA基因提取及ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因分型檢測 分別于患者接受治療前抽取外周靜脈血3 ml并置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中保存，采用DNA提取試劑盒(型號：QIAGEN DNeasy Blood &Tissue)對基因組DNA進(jìn)行提取，然后采用連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(LDR)對基因型進(jìn)行SNP分型檢測。ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)引物序列為上游引物：CCCGATCTCGCCTCTTTCAC，下游引物：TTCTGCTTGACATTCACCTAAAT。然后使用PCR試劑盒對cDNA進(jìn)行PCR。PCR體系為：1.0 μl DNA樣本，1.5 μl GC-I緩沖液，1.5 μl MgCl2；1.0 μl dNTP，1.0 μl/條引物，加超純水補(bǔ)至10 μl。PCR條件為95℃ 1 min，94℃ 20 s，63℃ 45 s，72℃ 1.5 min；連續(xù)循環(huán)32次。最后采用測序儀(軟件GeneMapper4.1)對基因進(jìn)行測序分型，分型為GG、CG及CC型。

1.4血脂等生化指標(biāo)檢測 采集患者清晨空腹外周靜脈血標(biāo)本。采用全自動生化分析儀(廠家：邁瑞醫(yī)療；型號：BS-330E)測定血脂指標(biāo)〔TC、TG、HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)〕及血糖(GLU)水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、Logistic回歸分析、Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 研究組吸煙者比例、收縮壓、舒張壓、體重指數(shù)、TG、TC及LDL-C 水平均顯著高于對照組(P<0.05)，但兩組性別、飲酒者比例、年齡、GLU及HDL-C 水平之間無明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2兩組基因分型比較 ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)分布3種基因型：研究組和對照組中ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因型(GG、CG、CC)期望值和觀測值符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.466，P=0.481；χ2=2.854，P=0.240)；兩組基因型分布差異顯著,且研究組CC型基因頻率和C等位基因頻率明顯高于對照組，GG型基因頻率和G等位基因頻率明顯低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因型分布情況〔n(%)〕

2.3研究組各亞組的基因多態(tài)性分析 研究組各亞組C等位基因明顯高于對照組，除混合型高脂血癥組患者外，其他亞組的GG、CC基因頻率和和G等位基因頻率明顯低于對照組(均P<0.05)。見表3。

表3 高脂血癥組各亞組的血脂基因多態(tài)性分析〔n(%)〕

2.4各遺傳模型下基因多態(tài)性與血脂水平異常相關(guān)性的多元Logistic分析 對血脂水平可能產(chǎn)生影響的影響因素(高血壓、吸煙、體重指數(shù))等進(jìn)行校正后，等位基因模型、加性模型、顯隱性模型及純合子模型下的DCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因多態(tài)性均與血脂異常之間存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表4。

表4 各遺傳模型下基因多態(tài)性與血脂水平異常相關(guān)性的多元Logistic分析

2.5血脂水平影響因素的多元線性回歸分析 以血脂水平(異常=1，正常=0)為因變量，以ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因型為自變量進(jìn)行多元線性回歸分析。結(jié)果顯示基因型GG和CC均與各血脂指標(biāo)水平存在顯著線性相關(guān)性(P<0.05，P<0.001)。其中基因型GG是高脂血癥患者的血脂異常保護(hù)因素，基因型CC屬于血脂異常的獨(dú)立危險因素。見表5。

表5 血脂水平影響因素的多元線性回歸分析

3 討 論

高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展過程與血脂代謝異常具有緊密聯(lián)系，是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程。研究證實(shí)，高脂血癥的重要發(fā)病機(jī)制之一是與脂代謝有關(guān)的基因變異，進(jìn)而導(dǎo)致脂蛋白降解酶活性下降，從而使機(jī)體內(nèi)的脂蛋白的代謝速度減慢或清除量降低，最終表現(xiàn)為各種類型的血脂指標(biāo)水平異?！?〕。

ADCY3基因在染色體上的位置位于2p23.3上，共由26個外顯子構(gòu)成，ADCY酶3為該基因編碼生成的重要產(chǎn)物。ADCY3作為一種膜結(jié)合酶，其在機(jī)體組織中廣泛存在，在參與機(jī)體內(nèi)多種重要生理和病理代謝過程發(fā)揮關(guān)鍵作用〔7〕。多項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)分析 (GWAS)研究結(jié)果證實(shí)ADCY3基因的多個位點(diǎn)均與肥胖或超重及高體質(zhì)指數(shù)之間存在密切相關(guān)性〔8，9〕。潘玲雁等〔10〕最近研究結(jié)果揭示肥胖所致的重要并發(fā)癥-脂肪肝也與ADCY3基因多態(tài)性之間具有密切聯(lián)系，認(rèn)為ADCY3基因可能是通過影響TNF-α等炎性因子的濃度進(jìn)而參與脂肪肝的發(fā)生發(fā)展。近來陳鋆等〔11〕結(jié)果顯示，rs10187348、rs6751537、rs11689546、rs4077678、rs7608976、rs13-44840位點(diǎn)的突變基因型均與TC發(fā)生顯著升高存在聯(lián)系及rs1344840、rs1127568、rs6751537位點(diǎn)的突變基因型與TG升高有關(guān)，rs1344840、rs7608976、rs4077678及rs11689546位點(diǎn)突變基因型與LDL-C的升高有關(guān)，提示ADCY3基因多態(tài)性與血脂水平異常之間存在關(guān)聯(lián)。且Saeed等〔12〕研究證實(shí)ADCY3基因的rs10187348位點(diǎn)CC基因型、rs4665273位點(diǎn)TT基因型、rs2278485位點(diǎn)的GG基因型等均屬于超重/肥胖的獨(dú)立危險因素。這為本文進(jìn)一步研究ADCY3基因與高脂血癥血脂異常水平之間的關(guān)系提供新的研究方向。

本研究結(jié)果提示ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因多態(tài)性與高脂血癥之間存在一定聯(lián)系。由于血脂代謝過程的調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜，血脂異常通常為多種血脂指標(biāo)異常情況的統(tǒng)稱，且不同血脂指標(biāo)如TG、TC的代謝途徑也存在差異〔13，14〕。

本研究多元線性回歸分析結(jié)果與Saeed等〔12〕研究顯示攜帶rs10187348位點(diǎn)CC基因型人群患發(fā)超重/肥胖風(fēng)險更高具有一致性。Meng等〔15〕通過動物實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步證實(shí)ADCY3基因參與大鼠下丘腦調(diào)控過程并發(fā)揮關(guān)鍵作用，而當(dāng)下丘腦的信號傳導(dǎo)通路出現(xiàn)功能障礙時，就會影響機(jī)體的能量和脂肪代謝過程，導(dǎo)致體內(nèi)脂肪蓄積量增加，進(jìn)而產(chǎn)生脂肪肝、高脂血癥等脂肪代謝性疾病。因此推測ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)基因多態(tài)性對高脂血癥患者血脂水平的影響可能也與該基因參與機(jī)體脂質(zhì)代謝過程有關(guān)，但具體作用機(jī)制仍研究。

綜上，老年高脂血患者ADCY3基因rs10187348位點(diǎn)多態(tài)性與血脂異常之間存在顯著相關(guān)性，其中基因型CC屬于高脂血癥血脂異常的獨(dú)立危險因素?？梢栽谂R床中對發(fā)生該基因突變的人群采取進(jìn)行進(jìn)一步預(yù)防措施，以降低高脂血癥患發(fā)風(fēng)險。