崔馨月，具紅光，樸 錦

（延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林 延吉 133002）

蒼術(shù)屬植物隸屬于菊科蒼術(shù)屬，現(xiàn)今我國(guó)共有4個(gè)種以及1個(gè)變種[1]，關(guān)蒼術(shù)是吉林省道地藥材，有祛風(fēng)散寒、明目、健脾等功效；常用于治療感冒、腹脹、水腫、風(fēng)濕、夜盲、眼目昏澀等[2]。丁立威[3]分析2001-2012年關(guān)蒼術(shù)的產(chǎn)量、需求和市場(chǎng)狀況發(fā)現(xiàn)，隨著關(guān)蒼術(shù)的需求以及價(jià)格的不斷攀升，其產(chǎn)量卻呈逐年遞減的趨勢(shì)。蒼術(shù)越來(lái)越多的藥用價(jià)值被發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)區(qū)群眾不分時(shí)節(jié)、不管成長(zhǎng)年限的連年濫采亂挖，導(dǎo)致野生資源逐年枯竭。

目前關(guān)蒼術(shù)的研究大部分集中在藥理作用[4]、揮發(fā)性成分[5-6]及炮制方法[7]方面，對(duì)栽培方面的研究不多，特別是土壤改良或微肥處理方面的研究甚少。胡煜雯等[8]研究表明，不論氮磷鉀施肥量的多少，蒼術(shù)的產(chǎn)量均高于不施肥處理，因此可以說(shuō)明茅蒼術(shù)屬于喜肥植物。不同的氮磷鉀肥處理是提高栽培藥用植物產(chǎn)量和品質(zhì)的重要措施，黃芩[9]、桔梗[10]等多種藥用植物通過(guò)合理施肥既能促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、提高產(chǎn)量，又能提高藥材品質(zhì)。趙虹然等[11]研究發(fā)現(xiàn)，不同的氮磷鉀施肥配比能夠提高關(guān)蒼術(shù)Atractylodes japonica揮發(fā)油的含量。根據(jù)前人研究可知，關(guān)蒼術(shù)生長(zhǎng)年限和生長(zhǎng)環(huán)境都可以對(duì)蒼術(shù)酮等揮發(fā)性成分的含量產(chǎn)生影響。因此，本文從不同微肥處理對(duì)關(guān)蒼術(shù)主要揮發(fā)性成分含量的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出最優(yōu)方案，為增加蒼術(shù)根莖的有效成分含量尋求有效途徑，對(duì)關(guān)蒼術(shù)的人工栽培及有效利用具有十分重要的意義。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)地土壤環(huán)境

延邊大學(xué)中藥材種植基地土壤屬于暗棕壤，pH值為6.87，有機(jī)質(zhì)含量為11.4 g·kg-1，全氮含量為11.8 g·kg-1，速效氮含量為103.0 mg·kg-1；全磷含量為649.0 mg·kg-1，速效磷含量為6.6 mg·kg-1；全鉀含量為14.9 g·kg-1，速效鉀含量為170.9 mg·kg-1。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為種植在延邊大學(xué)中藥材種植基地的2年生關(guān)蒼術(shù)根莖。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 施肥處理

采用L8（27）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)因素為鉬肥（Mo）、鋅肥（Zn）和硼肥（B），重復(fù)3次，每個(gè)試驗(yàn)組種5行，每行15株。具體見(jiàn)表1。

表1 L8（27）微肥正交試驗(yàn)

選取2年生關(guān)蒼術(shù)生長(zhǎng)基本一致的8個(gè)畦，6月份開(kāi)始每30 d噴施微肥1次，按照表1進(jìn)行噴施，噴至植株葉片表面不滴水，共噴3次。同年10月份，按照試驗(yàn)處理分別挖出根莖，清洗干凈后將根莖放在45℃恒溫干燥至恒質(zhì)量，將其磨成粉末，過(guò)篩，放入4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 關(guān)蒼術(shù)有效成分測(cè)定

采用Chromaster系列高效液相色譜儀，對(duì)照品標(biāo)樣購(gòu)自索寶來(lái)公司。將關(guān)蒼術(shù)的根莖粉末過(guò)篩，精確稱(chēng)取1 g放入試管中，加入7 mL 60～90℃的石油醚，在60℃、頻率為150 W的超聲波中萃取30 min。取出試管，待溶液分層至澄清，放置室溫，提取上清液，離心2 min。用5 mL一次性注射器吸取上清液，經(jīng)過(guò)有機(jī)膜濾后放入分析瓶中進(jìn)行分析。

關(guān)蒼術(shù)有效成分含量均采用HPLC高效液相色譜法測(cè)定。蒼術(shù)素標(biāo)樣質(zhì)量濃度0.62 mg·mL-1，流動(dòng)相采用乙腈-水進(jìn)行梯度脫洗，脫洗的乙腈-水比例及時(shí)間分別為：72∶28，0～9 min；60∶40，9～10 min；72∶28，10～20 min。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品15 μL、30μL、45μL、150μL、300μL、450μL，分別用甲醇定容至1.5 mL，混合均勻后，放入分析瓶中。進(jìn)樣量為20μL，柱溫為25℃，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm。

蒼術(shù)酮標(biāo)樣質(zhì)量濃度為0.3 mg·mL-1，流動(dòng)相采用甲醇-水（95∶5），精密吸取0.3 mg·mL-1的對(duì)照液120μL、300μL、480μL、660μL、840μL、1 020μL，分別加無(wú)水甲醇至1.5 mL，過(guò)濾膜后放入分析瓶中，進(jìn)樣量為10μL，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ標(biāo)樣質(zhì)量濃度為0.44 mg·mL-1，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30℃，流動(dòng)相采用乙腈-水（72∶28），梯度脫洗：0～9 min，乙腈-水比例為60∶40；9～10 min，乙腈-水比例為72∶28；10～20 min，乙腈-水比例為72∶28；精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品15μL、30μL、45μL、150μL、300μL、450μL，分別用甲醇定容至1.5 mL，混合均勻后，放入分析瓶中，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 關(guān)蒼術(shù)各個(gè)有效成分標(biāo)樣色譜圖

圖1為蒼術(shù)素標(biāo)樣色譜圖，1為蒼術(shù)素的出峰時(shí)間，其他色譜峰是雜質(zhì)，通過(guò)設(shè)置了6個(gè)質(zhì)量濃度梯度的蒼術(shù)素標(biāo)樣，確定蒼術(shù)素的出峰時(shí)間為14～16 min；圖2為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ標(biāo)樣色譜圖，2為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的出峰時(shí)間在8 min左右；圖3為蒼術(shù)酮標(biāo)樣色譜圖，蒼術(shù)酮的出峰時(shí)間為9 min左右。

圖1 蒼術(shù)素標(biāo)樣色譜圖

圖2 為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ標(biāo)樣色譜圖

圖3 蒼術(shù)酮標(biāo)樣色譜圖

2.2 線(xiàn)性關(guān)系

精密稱(chēng)取蒼術(shù)素、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、蒼術(shù)酮標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇配成系列對(duì)照品溶液。以對(duì)照品質(zhì)量濃度（X，mg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，所得蒼術(shù)素、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、蒼術(shù)酮的回歸方程分別為：

2.3 微肥處理對(duì)關(guān)蒼術(shù)有效成分含量的影響

根據(jù)所取得試驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)不同微肥處理下關(guān)蒼術(shù)有效成分進(jìn)行差異顯著性比較，具體見(jiàn)表2、表3。

由表2可見(jiàn)，對(duì)蒼術(shù)酮影響因素依次是Zn＞Mo＞B，有影響的互作依次是Zn×B＞B×Mo＞Mo×Zn；對(duì)蒼術(shù)素影響的最大因素是B，互作是Mo×B；對(duì)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ有較大影響的因素是Zn，有影響的互作依次是Zn×B=B×Mo＞Mo×Zn；綜合以上結(jié)果可知，對(duì)關(guān)蒼術(shù)蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ來(lái)說(shuō)，Zn肥是關(guān)鍵因素，同時(shí)重點(diǎn)考慮與B肥的互作效應(yīng)；對(duì)蒼術(shù)素來(lái)說(shuō)，B肥是關(guān)鍵因素，同時(shí)重點(diǎn)考慮與Mo肥的互作效應(yīng)。

表2 微肥處理關(guān)蒼術(shù)有效成分含量的極差分析mg·g-1

由表3可見(jiàn)，Mo肥、Zn肥對(duì)蒼術(shù)酮含量有極顯著影響（P＜0.01），B肥對(duì)蒼術(shù)酮含量有顯著影響（P＜0.05）；Mo肥、B肥對(duì)提高蒼術(shù)素含量有極顯著影響（P＜0.01）；Zn肥對(duì)提高關(guān)蒼術(shù)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量有極顯著影響（P＜0.01），B肥及Zn×B、B×Mo交互作用對(duì)提高白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量有顯著影響（P＜0.05）。

表3 微肥處理關(guān)蒼術(shù)有效成分含量的方差分析

針對(duì)以上有顯著或極顯著差異的因素或處理組合進(jìn)一步進(jìn)行多重比較，結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

由表4可見(jiàn)，Mo2與Mo1，B2與B1之間有顯著差異，均以2水平為最佳，而Zn1與Zn2間雖也有顯著差異，但以Zn1水平為最佳。因此，對(duì)蒼術(shù)酮來(lái)說(shuō)，3種微肥間的一級(jí)交互均不顯著，所以Mo肥和B肥的高水平就是最佳組合，而施用Zn肥反而不利于蒼術(shù)酮含量的積累，故最優(yōu)組合為Mo2B2Zn1。

表4 不同水平間蒼術(shù)酮含量的差異顯著性比較

由表5可見(jiàn)，Mo2與Mo1之間有極顯著差異，B2與B1有顯著差異。因此，對(duì)蒼術(shù)素含量來(lái)說(shuō)，Mo肥和B肥的高水平就是最佳組合。另外，3種微肥之間一級(jí)交互作用不顯著，故最優(yōu)組合為Mo2B2Zn1。

表5 不同水平間蒼術(shù)素含量的差異顯著性比較

由表6可知，B2與B1有顯著差異，Zn2與Zn1有極顯著差異，另外Zn×B和Mo×B互作也有顯著差異，因此B肥和Zn肥的高水平不是最佳組合，應(yīng)重點(diǎn)考慮互作效應(yīng)。Zn×B的互作作用中，Zn2B1的白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量極顯著高于其他組合，其含量達(dá)到0.011 mg·g-1，故以Zn2B1為重點(diǎn)，再配適合的Mo肥水平。B×Mo的互作中B2Mo1的白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量最高，與B2Mo2組合無(wú)顯著差異，而與其他組合有顯著差異。

表6 不同處理白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量的差異顯著性比較

因此，可總結(jié)出因B肥和Zn肥間存在互作效應(yīng)，對(duì)關(guān)蒼術(shù)白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的含量的最優(yōu)組合是Zn2B1Mo2和Zn2B1Mo1。

3 討論與結(jié)論

土壤中的微量元素是植物吸收的主要供給源[12]。研究表明：微量元素多為酶、維生素、生長(zhǎng)激素等的組成成分，直接參與植物有機(jī)體的代謝，作用于生長(zhǎng)發(fā)育[13]。有研究證實(shí)：適宜濃度的鋅、鎂、鉬元素能提高銀杏葉片中的總黃酮、萜內(nèi)脂的含量[14]。竇明明[15]在對(duì)川澤瀉的配方施肥中發(fā)現(xiàn)，鉬肥可以顯著提高澤瀉中23-乙酰澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇A兩種成分的含量；孟杰等[16]研究發(fā)現(xiàn)，在北柴胡的各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期進(jìn)行鋅硼鉬配施的處理，會(huì)影響其柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的積累；徐繼振等[17]研究也發(fā)現(xiàn)，栽培當(dāng)歸施用鉬、錳微肥能提高揮發(fā)油、多糖和70%醇溶物等的含量。

本試驗(yàn)通過(guò)噴施Mo肥、Zn肥、B肥，能夠有效提高關(guān)蒼術(shù)不同有效成分含量，提高關(guān)蒼術(shù)有效成分蒼術(shù)酮、蒼術(shù)素含量的最優(yōu)水平均為B2Mo2Zn1；提高關(guān)蒼術(shù)的白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量的最優(yōu)水平均為Zn2B1Mo2和Zn2B1Mo1，這與前人研究的微肥處理能夠提高藥用植物品質(zhì)的試驗(yàn)結(jié)果相符。因此在實(shí)際生產(chǎn)中要注意微量元素的供給，保證關(guān)蒼術(shù)有效成分的積累，為后期關(guān)蒼術(shù)的種植管理提供參考依據(jù)。