李蕾，謝麗娟，初賽君，董亞南，婁子恒，曹志強，徐芳菲

(吉林人參研究院·吉林通化·134002)

三七為五加科多年生草本植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根[1]，是一種珍貴的中藥，泛用于治療心腦血管疾病[2-4]。始載于《本草綱目》，在我國已有400多年的栽培歷史，主產(chǎn)于云南、廣西等地[5,6]。三七味甘，微苦，溫，歸肝、胃、大腸經(jīng)，其根、莖、葉、花均可入藥。皂苷類化合物是三七的主要化學成分，也是三七中公認的主要有效成分之一。迄今為止，已從三七中分離提取鑒定了120種皂苷類化合物，而且不斷有新的化合物被發(fā)現(xiàn)[7]。三七中的皂苷類成分均為達瑪烷型四環(huán)三萜，未發(fā)現(xiàn)含有齊墩果酸型皂苷。從苷元角度分類，三七中的皂苷可分為20(S)-原人參二醇型皂苷（如人參皂苷Rg1、Rg2、Rh1(S)、Rh1(R)、RK3、R2等）和20(S)-原人參三醇型皂苷（如人參皂苷Rb1、Rd、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、Rg5等）；從皂苷角度分類，三七中皂苷大致可分為人參皂苷、三七皂苷和七葉膽皂苷等，它們通常被用作三七質(zhì)量控制的標記。

黑三七是以三七為原料，經(jīng)過蒸制、干燥加工的黑色或深棕色的產(chǎn)品。通過加工炮制，三七中的主要單體皂苷通過水解轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rg3、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rk3、人參皂苷Rg5、人參皂苷Rh1、三七皂苷R2等稀有人參皂苷[8,9]，藥理研究表明以上稀有皂苷具有更強的抗腫瘤、抗炎、提高免疫力、益智、保護心血管等藥理作用，藥用價值及產(chǎn)品附加值大幅度提升，具有很好的開發(fā)前景[10-12]。本文建立了HPLC法測定黑三七中20種單體皂苷的含量的方法，比較干三七在加工炮制過程中，隨著蒸制時間的變化，黑三七中單體皂苷含量的變化，為更好的研究黑三七提供了理論依據(jù)。

1 儀器和材料

1.1 儀器

1.2 材料

三七；三七皂苷R1、R2(R)，人參皂苷Rg1、Re、Rh1(S)、Rh1(R)、Rg2(S)、Rg2(R)、Rg5、Rh2(S)、Rh2(R)、PPD、Rb1、Rd、RK3、PPT、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、RK2標準品均購自中國食品藥品檢定研究院；色譜乙腈購自Fisher；分析甲醇和正丁醇購自北京化工廠；水為超純水。

2 方法

2.1 對照品溶液制備

精密稱取三七皂苷R1、R2(R)，人參皂苷Rg1、Re、Rh1(S)、Rh1(R)、Rg2(S)、Rg2(R)、Rg5、Rh2(S)、Rh2(R)、PPD、Rb1、Rd、RK3、PPT、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、RK2適量，制成對照品濃度分別為0.2460、0.2830、0.2530、0.3120、0.2590、0.2730、0.2980、0.2820、0.5050、0.1960、0.1750、0.2230、0.2770、0.2610、0.2200、0.2640、0.2510、0.2080、0.2450、0.2180mg/mL的對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備

以干三七為樣品，進行加工炮制。蒸制溫度為98～100℃，蒸制時間每5h為一個試驗點，設(shè)置22個試驗點，最終得到22個黑三七樣品，分別命名為G1～G21。分別取黑三七粉末2.00g，加50mL（25倍量）75%乙醇加熱回流3h，重復(fù)提取2次，合并濾液，蒸干。殘渣加40mL水溶解并轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，再加40mL正丁醇萃取，重復(fù)萃取5次，合并正丁醇萃取液，蒸干。殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即為單體皂苷檢測樣品。

2.3 色譜條件

檢測單體皂苷 色譜條件條件1 R1、Rg1、Re、R2(R)、Rh1(S)、Rg2(S)、Rh1(R)、Rg2(R)0～30min（19% A），30～35min（19%A～22%A），35～170min（22%A），170～175min（22%A～90%A），175～200min（90%A）流動相：乙腈-水（A-B）、波長：203nm、流速：1.0mL/min、柱溫：40℃0～55min（27.5%A），55～70min（27.5%A～37%A），70～100min（37%A），100～120min（37%A～44%A），120～125min（44%A～60%A），125～155min（60%A），155～160min（60%A～90%A），160～185min（90%A）流動相：乙腈-水（A-B）、波長：203nm、流速：1.0mL/min、柱溫：30℃條件3 Rg5、Rh2(S)、Rh2(R)、PPD 0～35min（51%A），35～45min（51%A～70%A），45～60min（70%A），60～65min（70%A～90%A），65～條件2 Rb1、RK3、Rd、PPT、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、R 90min（90%A）流動相：乙腈-水（A-B）、波長：203nm、流速：1.0mL/min、柱溫：40℃

3 結(jié)果

精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按“2.3”項下的色譜條件進行檢測。供試品色譜中，再與色譜峰相應(yīng)的位置上，顯示出保留時間相同的色譜峰。不同蒸制時間制得的黑三七中單體皂苷含量見表1。

表1 黑三七單體皂苷含量

4 討論

4.1 通過比較黑三七中二醇型皂苷含量可知，皂苷成分發(fā)生水解反應(yīng)，人參皂苷Rb1、Rd含量逐漸變少，人參皂苷Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、Rg5含量明顯增加，G1～G10中單體皂苷含量呈逐步增加的狀態(tài)，G11～G18增加幅度不明顯，G19～G21含量較高。干三七制黑三七中含量最高的是G21，人參皂苷RK1為主要成分，最高可達23mg/g，詳見表2。

表2 干三七制黑三七二醇型稀有皂苷含量變化

4.2 通過比較黑三七中三醇型皂苷含量可知，皂苷成分發(fā)生水解反應(yīng)，人參皂苷Rg1、Re、三七皂苷R1含量逐漸變少。人參皂苷Rh1(S)、Rh1(R)、RK3、R2(R)含量明顯增加，G1～G7中單體皂苷含量呈逐步增加的狀態(tài)，G8～G21增加幅度不明顯，G19～G21含量較高。干三七制黑三七中含量最高的是G20，三七皂苷R1、R2為三七的特征成分，三七中僅含有R1，不含R2，經(jīng)加工制得的黑三七中R1轉(zhuǎn)化成R2，R2含量可達4.5 mg/g，詳見表3。

表3 干三七制黑三七三醇型稀有皂苷含量變化

4.3 干三七通過加工炮制，三七中的主要單體皂苷通過水解轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rg3、人參皂苷Rk1、人參皂苷Rk3、人參皂苷Rg5、人參皂苷Rh1、三七皂苷R2等稀有人參皂苷，這些稀有皂苷具有更強的抗腫瘤、抗炎、提高免疫力、益智、保護心血管等藥理作用，藥用價值及產(chǎn)品附加值大幅度提升，具有很好的開發(fā)前景。