楊 然 李韶山

（華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 廣東廣州 510631）

新冠病毒感染人體后，會(huì)在鼻腔、咽部、下呼吸道等處“定居”并進(jìn)行繁殖。通過采集鼻咽拭子等標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸檢測，是目前盡早確定是否感染新冠病毒最有效的檢測方法。開展大規(guī)模的核酸檢測有利于精準(zhǔn)防控、早診早治，維護(hù)群眾的身體健康；同時(shí)也利于保障人員的合理流動(dòng)，推動(dòng)社會(huì)經(jīng)濟(jì)復(fù)蘇及人們生活秩序的恢復(fù)。

1 新冠病毒的核酸檢測

新冠病毒的核酸檢測其實(shí)就是對(duì)其遺傳物質(zhì)RNA進(jìn)行檢測，其方法是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法。新冠病毒通過呼吸道感染人體，所以從呼吸道采集樣本。目前常規(guī)的樣本類型大致有2類：①用咽拭子在人的上呼吸道（咽部或鼻腔）擦拭采集。②收集下呼吸道痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。通常肺部灌洗液和痰液中的病毒含量高于鼻咽等呼吸道拭子，而呼吸道拭子中的病毒量會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血液。出于大量采集樣本需要便攜與快捷的考慮，大多核酸檢測通常采取咽拭子在人的上呼吸道擦拭采集。采集到的樣本將被低溫封存，并送到專門的檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測。

新冠病毒的核酸檢測步驟為：①從采集的樣品提取RNA。②將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA：加入逆轉(zhuǎn)錄酶、Oligo（dT）引物、dNTP。根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，Oligo（dT）引物與病毒RNA 3′端相結(jié)合，逆轉(zhuǎn)錄酶在此結(jié)合處開始，以RNA為模板沿著5′→3′端合成堿基互補(bǔ)的DNA鏈，即cDNA。③PCR擴(kuò)增，通常采取探針法，即以新冠病毒cDNA某一高度保守基因序列區(qū)域?yàn)闄z測靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使這段靶標(biāo)數(shù)量呈指數(shù)級(jí)式增加，通過檢測靶標(biāo)的熒光信號(hào)來確定樣本中是否有病毒核酸。中國疾病預(yù)防控制中心推薦選用的新型冠狀病毒的檢測靶標(biāo)是核殼蛋白N，全長99個(gè)堿基對(duì)（bp），與之對(duì)應(yīng)的正向引物、反向引物、熒光探針，同時(shí)還需加入DNA聚合酶、dNTP。

2 新冠病毒核酸檢測中的“假陽性”與“假陰性”

新冠病毒核酸檢測的“假陽性”是指患者沒感染新冠病毒，但核酸檢測出現(xiàn)陽性結(jié)果。“假陽性”的出現(xiàn)通常是由于實(shí)驗(yàn)室檢測過程中標(biāo)本間的交叉污染或?qū)嶒?yàn)室核酸污染造成的。在技術(shù)層面上講，只要實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格落實(shí)質(zhì)控工作，可有效避免“假陽性”的產(chǎn)生。

“假陰性”是指患者的臨床癥狀、肺部影像學(xué)結(jié)果甚至流行病學(xué)史都支持為新冠肺炎，但患者病毒核酸檢測結(jié)果為“陰性”，檢測結(jié)果與臨床不符。通常“假陰性”產(chǎn)生原因有：①病毒入侵人體初期，人體內(nèi)病毒載量尚未達(dá)到可檢測的程度。在病毒潛伏期、輕度癥狀、嚴(yán)重癥狀的不同時(shí)期，人體的不同部位（如鼻咽部、口咽部、氣管、支氣管和肺泡）的病毒載量會(huì)存在差異。所以，采樣時(shí)機(jī)和采樣部位的不同可能導(dǎo)致所采集的標(biāo)本中沒有足夠量的病毒。②采樣不規(guī)范、采集部位不正確，導(dǎo)致樣品中被病毒感染的細(xì)胞太少或沒有，則有可能造成“假陰性”。③任何檢測方法都有其檢測下限，如果患者標(biāo)本內(nèi)的病毒達(dá)不到所使用試劑和方法的檢測下限，則會(huì)出現(xiàn)假陰性。

由于“假陽性”和“假陰性”的存在，為避免出現(xiàn)誤差，實(shí)驗(yàn)室操作過程需要避免樣本之間的交叉污染和陽性擴(kuò)增產(chǎn)物及陽性對(duì)照引起的實(shí)驗(yàn)室污染，實(shí)驗(yàn)過程中合理的陰性、陽性對(duì)照設(shè)置是實(shí)驗(yàn)質(zhì)控與結(jié)果有效的保證。

新冠病毒的核酸檢測已經(jīng)是比較成熟的檢測方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鐘就可以采集到標(biāo)本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發(fā)現(xiàn)感染者，甚至在感染者出現(xiàn)癥狀前就可以檢測到陽性。感染者在隔離治療后，若其咽拭子檢測陰性說明病毒已經(jīng)清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無癥狀感染者解除隔離的標(biāo)準(zhǔn)之一。

3 新冠病毒的抗原、抗體檢測

核酸檢測是對(duì)病毒的核酸進(jìn)行檢測，而抗原檢測則是對(duì)新冠病毒表面的核衣殼蛋白（N蛋白）進(jìn)行檢測。因新冠病毒核衣殼蛋白表達(dá)量較高、更易突變，對(duì)其進(jìn)行檢測可直接反映是否感染新冠病毒。此外，因抗原檢測無需進(jìn)行核酸檢測所需的PCR擴(kuò)增等過程，檢測速度更快、操作更便捷，有助于提高檢測效率；但準(zhǔn)確度較低，一般用于感染早期。

核酸檢測與抗原檢測都是對(duì)新冠病毒進(jìn)行直接檢測，而抗體檢測則是通過特定的抗原與待測樣品中的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中的抗體進(jìn)行檢測；抗體檢測是通過抗原-抗體特異性免疫反應(yīng)來間接判斷是否感染新冠病毒的一種檢測方式。