李成斌，陳超麗，丁志新，門 靜，李成利

（西安萬隆制藥股份有限公司，陜西 西安 710119）

福司氟康唑（Fosfluconazole）[1]為氟康唑的單磷酸酯，在體內經(jīng)水解生成氟康唑而起效。氟康唑廣泛用于治療各種念珠菌和隱性球菌病，半衰期長達30h，具有高效、低毒的優(yōu)點，既可口服又可靜脈給藥，臨床用于治療深部真菌感染，效果良好，不良反應較輕[2]。氟康唑在水中微溶，溶解度約為2mg·mL-1，如制成小水針（5ml，200mg），必須提高溶解度[3,4]。福司氟康唑是通過結構修飾，形成氟康唑的酯化物，增加溶解度，提高生物利用率[5]的成功案例。福司氟康唑注射液由輝瑞公司開發(fā)并于2003年在日本上市。

曹衛(wèi)凱[6]等人以氟康唑為起始原料，使用POCl3進行氯磷酸酯化，之后與芐醇進行縮合，得到中間體，將中間體用Pd/C催化，以NH4HCO2為氫供體，進行脫芐基，經(jīng)過酸化，析晶，得到福司氟康唑。

圖1 福司氟康唑合成路線圖Fig.1 Synthesis route of fosfluconazole

該合成路線簡單，起始物料便宜易得，其主要雜質是其合成起始物料氟康唑以及中間產(chǎn)物二芐酯。王琰[7]等人通過實驗篩選，確定了pH值為5.0的H3PO4緩沖液-甲醇為流動相，210nm為檢測波長進行有關物質的檢查，但是筆者通過實驗發(fā)現(xiàn)，中間體二芐酯未能得到有效的分離。

本文通過參考相關文獻[7,8]，調整緩沖鹽的濃度和pH值，優(yōu)化色譜的條件，以0.01mol·L-1的NaH2PO4（pH值為5.5）-乙腈為流動相，梯度洗脫，對福司氟康唑，氟康唑和二芐酯進行測定，本方法專屬性強，準確度好，可用于福司氟康唑含量及有關物質的質量控制。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

LC-20A型高效液相色譜儀（PDA檢測器 日本島津）；LabSolutions工作站（島津）；電子天平（賽多利斯）。

CP225D氟康唑對照品（100314-201605，99.8%中國食品藥品制品檢定研究院）；福司氟康唑對照品（AT12001，99.4%）、二芐酯對照品（AZ12001，96.6%），江蘇倍達醫(yī)藥有限公司；福司氟康唑原料（自制，F(xiàn)K-8001、FK-8002、FK-8003）；乙腈（色譜級Fisher）；NaH2PO4（AR國藥集團化學試劑有限公司）。

1.2 色譜條件

色譜柱：島津ODS色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流速：1.0mL·min-1，進樣體積20μL，柱溫為40℃,PDA檢測器（210nm）

流動相：A相：0.01mol·L-1的NaH2PO4（pH值為5.5）；B相：乙腈，梯度洗脫方法見表1。

表1 梯度洗脫方法Tab.1 Method of gradient elution

1.3 溶液的配制

1.3.1 稀釋劑50%乙腈

1.3.2 對照溶液 精密稱取對照品適量，分別配制1mg·mL-1福司氟康唑對照溶液，1mg·mL-1氟康唑對照溶液，1mg·mL-1二芐酯對照溶液。

1.3.3 系統(tǒng)適用性溶液 另取福司氟康唑對照品、氟康唑對照品、二芐酯對照品適量置于同一量瓶，配制成濃度分別為1、0.01、0.01mg·mL-1的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

1.3.4 福司氟康唑對照儲備液 精密稱取福司氟康唑對照品適量，置于10mL量瓶中，用稀釋劑溶解并定容，制成5mg·mL-1，作為對照儲備液。

1.3.5 福司氟康唑供試品儲備液 精密稱取福司氟康唑原料適量，置于10mL量瓶中，用稀釋劑溶解并定容，制成5mg·mL-1，作為供試品儲備液。

1.3.6 供試品溶液 精密稱取福司氟康唑原料藥10mg于10mL量瓶中，用稀釋劑溶解并定容，作為供試品。

2 結果與討論

2.1 專屬性實驗

按照1.2項下的色譜條件，取空白溶劑（稀釋劑）和各對照溶液、系統(tǒng)適用性溶液分別進樣，記錄色譜圖?？瞻兹軇y定無影響，待測物出峰順序依次為：福司氟康唑，氟康唑，二芐酯，各組分分離良好，R值均大于1.5。

圖2 系統(tǒng)適用性色譜圖Fig.2 System suitability chromatogram

表2 專屬性實驗Tab.2 Separation of the components

2.2 檢測限與定量限

取1.3.2項下福司氟康唑，氟康唑，二芐酯對照溶液，用稀釋劑稀釋至各樣品主峰的響應值約為噪音水平的10倍及3倍，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見表3。

表3 檢測限與定量限（ng·mL-1）Tab.3 Limits of detection and quantification（ng·mL-1）

由表3可知，本方法有著較高的靈敏度，可以有效檢出雜質。

2.3 線性與范圍

精密量取福司氟康唑對照儲備液3mL，氟康唑對照溶液0.2mL，二芐酯對照溶液0.2mL置于同一10mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得線性儲備溶液（線性6）。精密量取線性儲備溶液5mL置于10mL量瓶中，作為線性5；精密量取線性5溶液3mL置于10mL量瓶中，作為線性4；精密量取線性4溶液3mL置于10mL量瓶中，作為線性3；精密量取線性3溶液3mL置于10mL量瓶中，作為線性2；將2.2項下配制的定量限溶液濃度作為線性1溶液。精密量取各線性溶液20μL注入色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，作線性回歸。福司氟康唑濃度在0.05～1556.28μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系；氟康唑濃度在0.02～20.70μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系；二芐酯濃度在0.04～21.74μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

表4 線性與范圍Tab.4 Linearity and range

2.4 回收率

配制含福司氟康唑1000μg·mL-1、氟康唑200μg·mL-1、二芐酯含量為200μg·mL-1的回收率儲備液。取福司氟康唑供試品儲備液1.0mL，加入回收率儲備液7.5mL，于10mL量瓶中，作為150%的回收率溶液；取福司氟康唑供試品儲備液1.0mL，加入回收率儲備液5.0mL，于10mL量瓶中，作為100%的回收率溶液；取福司氟康唑供試品儲備液1.0mL，加入回收率儲備液2.5mL，于10mL量瓶中，作為50%的回收率溶液。精密量取各溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。福司氟康唑、氟康唑和二芐酯的回收率分別為99.28%、97.03%和100.51%，回收率良好。

表5 加樣回收率Tab.5 Result of recovery tests（n=9）

2.5 重復性試驗

在同一實驗室，照1.3.3配制6份樣品，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。福司氟康唑、氟康唑和二芐酯的RSD分別為0.17%，0.43%和0.30%，重復性良好。

2.6 精密度試驗

取線性5溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，進樣6針，記錄色譜圖。福司氟康唑、氟康唑和二芐酯的RSD分別為0.05%，0.13%和0.32%，精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

取線性5溶液，在室溫下分別放置2、4、6、8、12h，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。福司氟康唑、氟康唑和二芐酯的RSD分別為0.27%，0.30%和0.29%，樣品溶液隨放置時間的延長有關物質均無明顯變化，溶液配制12h內穩(wěn)定。

2.8 樣品測定

照1.3.6項下的配制供試品溶液，按照本方法進樣，結果見表6。

表6 樣品檢測（%）Tab.6 API detection（%）

2.9 討論

（1）檢測波長的選擇 氟康唑在中國藥典2020年版二部和文獻有相關報道[9]，以260nm作為其檢測波長，經(jīng)對福司氟康唑、氟康唑和二芐酯以PDA檢測器進行分析，測得在210和260nm均有較強的紫外吸收，在210nm處各雜質響應較260nm強，所以，本文選取210nm作為檢測波長。

（2）雜質產(chǎn)生的途徑 根據(jù)合成路線、反應原理以及福司氟康唑理化性質，福司氟康唑的主要雜質氟康唑來源于未完全除去的起始物料，以及福司氟康唑高溫降解產(chǎn)物，二芐酯來源于合成反應的中間產(chǎn)物。

3 結論

根據(jù)上述結果，可采用此方法對福司氟康唑中含量及有關物質進行質量控制，本方法專屬性強，準確度高，可用于相關的檢測。目前，中國藥典2020年版并未收錄該品種，因此，本文的研究結果對今后標準的起草提供了較強的科學依據(jù)。