馬永犇，王春龍，王鳳霞，王 夢(mèng)，田 偉，吳玲芳*，牛麗穎*

UPLC-Q-TOF-MS法快速分析石楠葉中化學(xué)成分

馬永犇1, 2, 3，王春龍4，王鳳霞1, 2, 3，王 夢(mèng)1, 2, 3，田 偉1, 2, 3，吳玲芳1, 2, 3*，牛麗穎1, 2, 3*

1. 河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050091 2. 河北省中藥配方顆粒技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 石家莊 050091 3. 中藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)化河北省工程研究中心，河北 石家莊 050091 4. 盈科瑞（天津）創(chuàng)新醫(yī)藥研究有限公司，天津 300382

采用超高效液相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）法快速分析石楠葉化學(xué)成分。色譜柱為Waters BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫，體積流量0.3 mL/min。采用peakview 1.2軟件解析樣品和混合對(duì)照品質(zhì)譜圖，得到化合物的精確相對(duì)分子質(zhì)量、多級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)、質(zhì)譜碎片離子信息等，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行成分鑒定。共鑒定了98個(gè)化學(xué)成分，主要包括30個(gè)黃酮類(lèi)成分，24個(gè)有機(jī)酸類(lèi)成分，15個(gè)苯丙素類(lèi)成分，14個(gè)萜類(lèi)成分和15個(gè)其他類(lèi)成分，其中95個(gè)化合物是首次從該植物中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分。建立的UPLC-Q-TOF-MS法能快速、準(zhǔn)確、較全面地鑒定石楠葉藥材化學(xué)成分，為石楠葉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。

UPLC-Q-TOF-MS；石楠葉；黃酮；有機(jī)酸；酚酸；苯丙素；三萜類(lèi)

石楠Lindl. 是薔薇科石楠屬Lindl. 植物，石楠的藥用部位為其干燥葉片，稱為石楠葉，現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥材第一冊(cè)》（1992年版）。石楠葉是彝族常用藥材，性平，味辛、苦，有小毒，具有祛風(fēng)補(bǔ)腎的功效，用于腰背酸痛、腎虛腳弱、偏頭痛、風(fēng)疹、風(fēng)痹、風(fēng)濕筋骨痛、陽(yáng)痿遺精等癥。石楠葉呈長(zhǎng)橢圓形或長(zhǎng)倒卵形，長(zhǎng)8～16 cm，寬2.5～6.5 cm。廣泛分布于長(zhǎng)江流域及秦嶺以南。石楠葉別稱石眼樹(shù)葉、老少年葉，因獨(dú)特的樹(shù)形和不斷變幻顏色的葉子而常用作觀賞樹(shù)種。

石楠葉用藥歷史悠久，歷代本草都有關(guān)于石楠葉的記載，功效均為祛風(fēng)補(bǔ)腎?！侗静輷褚V目》記載石楠葉浸酒飲治頭風(fēng)，為治風(fēng)痹腎弱要藥。《本草綱目》記載，石南（通石楠），古方為治風(fēng)痹腎弱要藥，浸酒飲治頭風(fēng)?！侗静輳男隆酚涊d石楠利筋骨皮毛，逐諸風(fēng)，療風(fēng)痹腳弱，浸酒飲，治頭風(fēng)。《本草備要》記載，石楠補(bǔ)內(nèi)傷陰衰，利筋骨皮毛，為治腎虛、腳弱、風(fēng)痹要藥?！短交菝窈蛣┚址健分杏涊d，石楠丸常服補(bǔ)益元?dú)?，令人筋骨壯健，耳目聰明，婦人血?dú)庖嗫煞痪泻颉?/p>

目前關(guān)于石楠葉的現(xiàn)代研究報(bào)道較少，現(xiàn)有的報(bào)道多傾向于臨床研究，主要是治療不孕癥、婦科疾病和男性疾病的臨床應(yīng)用。關(guān)于石楠葉化學(xué)成分研究的僅有少量文獻(xiàn)報(bào)道，崔俊鳳等[1]采用HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地石楠葉中熊果酸的含量。羅曉清等[2]采用RP-HPLC法測(cè)定石楠葉中熊果酸和齊墩果酸的含量。周玉等[3]采用超臨界CO2流體萃取石楠葉中的揮發(fā)油，經(jīng)GC-MS對(duì)揮發(fā)油成分進(jìn)行分離和鑒定，共鑒定出55種化學(xué)成分，均為極性較小的脂溶性成分。本研究關(guān)注石楠葉中非揮發(fā)性成分，首次采用UPLC-Q-TOF-MS法對(duì)石楠葉化學(xué)成分進(jìn)行指認(rèn)，共鑒別了98個(gè)成分，除齊墩果酸、α-石竹烯和β-石竹烯為文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道的，另外95個(gè)均是首次從石楠葉中發(fā)現(xiàn)的，本研究為石楠葉藥效物質(zhì)研究提供基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters超高效液相色譜；ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國(guó)Waters公司）；SCIEX Triple-TOF 6600+質(zhì)譜系統(tǒng)（美國(guó)AB公司）；BSA224S-CW電子天平（德國(guó)賽多利斯）；KQ-250型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

石楠葉經(jīng)楚雄彝族自治州中醫(yī)院名余惠祥副主任醫(yī)師鑒定為薔薇科植物石楠Lindl.的干燥葉片。

對(duì)照品腺苷（批號(hào)110879-201703，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%）、蘋(píng)果酸（批號(hào)190013-201702，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%）、表兒茶素（批號(hào)110878-201703，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%）、阿魏酸（批號(hào)110773-201915，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.4%）、蘆?。ㄅ?hào)100080-201811，質(zhì)量分?jǐn)?shù)91.7%）、異槲皮苷（批號(hào)111809-201804，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.2%）、金絲桃苷（批號(hào)111521-201507，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.3%）、槲皮素（批號(hào)100081-201610，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%）、山柰酚（批號(hào)110861-202013，質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.2%）黃芩苷（批號(hào)110715-202122，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.2%），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；紫云英苷（批號(hào)MUST-16030810，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.81%）購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司。屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）、甲醇、乙腈為色譜純（德國(guó)默克醫(yī)藥生物科技公司），其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 供試品溶液的制備

取石楠葉藥材，粉碎過(guò)40目篩，精密稱取藥材粉末0.1 g置具塞三角瓶中，加入50%甲醇20 mL，超聲（功率500 W）提取10 min，靜置放涼至室溫，補(bǔ)足減失質(zhì)量。樣品用12 000 r/min離心10 min取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜備用。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品金絲桃苷10.79 mg、黃芩苷11.84 mg、表兒茶素7.04 mg、阿魏酸11.21 mg、蘋(píng)果酸10.55 mg、紫云英苷11.06 mg、槲皮素10.80 mg、蘆丁10.60 mg、異槲皮苷12.20 mg、兒茶素4.25 mg和腺苷9.91 mg于25 mL量瓶中，加入分析純甲醇定容至25 mL并溶解制備成母液，將母液稀釋1000倍，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，供分析用。溶液中各對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為金絲桃苷0.43 μg/mL、黃芩苷0.47 μg/mL、表兒茶素0.28 μg/mL、阿魏酸0.45 μg/mL、蘋(píng)果酸0.42 μg/mL、紫云英苷0.44 μg/mL、槲皮素0.43 μg/mL、蘆丁0.42 μg/mL、異槲皮苷0.49 μg/mL、兒茶素0.17 μg/mL和腺苷0.40 μg/mL。

2.3 色譜和質(zhì)譜條件

2.3.1 液相色譜條件 采用梯度洗脫（0～6 min，10% A；6～9 min，10%～14% A；9～18 min，14%～18% A；18～2 min，18%～23% A；22～26 min，23%～29% A；26～29 min，29%～40% A；29～31 min，40%～90% A）。體積流量0.3 mL/min，柱溫25℃，進(jìn)樣體積1 μL。

2.3.2 質(zhì)譜條件 SCIEX Triple-TOF 6600+質(zhì)譜系統(tǒng)采用電噴霧離子源（ESI），正、負(fù)離子模式，電壓分別為5500V/?4500V，離子源溫度為550℃，霧化氣344.74 kPa，輔助氣344.74 kPa，氣簾氣241.32 kPa，DP：±80 V，CE：（40±20）V。一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為/100～1500，IDA設(shè)置響應(yīng)值超過(guò)100 cps的15個(gè)最高峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，子離子掃描范圍為/50～1000，開(kāi)啟動(dòng)態(tài)背景扣除。

2.4 分析方法

由于關(guān)于石楠葉化學(xué)成分的報(bào)道比較少，為了更全面地對(duì)石楠葉中化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，將化學(xué)成分檢索范圍擴(kuò)大到薔薇科，建立了包括化合物的中、英文名稱、分子式、精確相對(duì)分子質(zhì)量等信息的本地?cái)?shù)據(jù)庫(kù)。將液質(zhì)聯(lián)用儀采集的數(shù)據(jù)導(dǎo)入Peakview 1.2軟件中，結(jié)合所建立的本地?cái)?shù)據(jù)庫(kù)、Chem spider（http://www.chemspider.com/）和Chem book（https:// www.chemicalbook.com/）數(shù)據(jù)庫(kù)得到化合物可能的分子式。采用Analyst TF 1.6和Peakview 1.2（AB SCIEX）軟件對(duì)石楠葉的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，按偏差小于5.0×10?6、同位素分布正確及含有二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片的原則，確定化合物的分子式，匹配可能的化合物。根據(jù)二級(jí)碎片信息和檢索的化合物裂解過(guò)程中產(chǎn)生的碎片信息，分析總結(jié)化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律。

3 結(jié)果

3.1 化學(xué)成分的鑒定

通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)以及相關(guān)的數(shù)據(jù)庫(kù)，建立薔薇科48個(gè)屬的735個(gè)化學(xué)成分的本地?cái)?shù)據(jù)庫(kù)。對(duì)提取溶劑、色譜條件、質(zhì)譜條件等進(jìn)行了優(yōu)化，選擇最優(yōu)的條件對(duì)石楠葉供試液進(jìn)行UPLC-Q-TOF-MS分析。正離子模式下顯示出更為豐富的信息，因此本研究選擇正離子模式所得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，正離子模式下樣品和混合對(duì)照品的總離子流圖見(jiàn)圖1、2。根據(jù)化合物相對(duì)分子質(zhì)量、二級(jí)質(zhì)譜碎片信息及在線數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索，共鑒定了98個(gè)成分，包括30個(gè)黃酮類(lèi)成分，24個(gè)有機(jī)酸類(lèi)成分，16個(gè)苯丙素類(lèi)成分，14個(gè)萜類(lèi)成分和15個(gè)其他類(lèi)成分，如表1所示。

圖1 石楠葉樣品總離子流圖

1-腺苷 2-蘋(píng)果酸 3-表兒茶素 4-阿魏酸 5-蘆丁 6-異槲皮苷 7-金絲桃苷 8-紫云英苷 9-黃芩苷 10-槲皮素 11-山柰酚

表1 石楠葉中鑒定出的98個(gè)化合物

Table 1 98 compounds identified in Folium Photiniae

峰號(hào)tR/min分子式實(shí)驗(yàn)值理論值偏差(×10?6）碎片離子（MS）化合物名稱 1b0.59C6H10O4147.065 2 [M＋H]+146.057 9?2.7101.017 1 [M＋H－C2H6O]+琥珀酸單乙酯 2e0.59C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+原兒茶醛 3b0.60C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+水楊酸 4b0.61C7H6O3139.039 0 [M＋H]+138.031 7?3.5111.042 8 [M＋H－C2H4]+, 121.033 0 [M＋H－H2O]+對(duì)羥基苯甲酸 5e0.79C10H13N5O4268.104 0 [M＋H]+267.096 8?1.4136.061 1 [M＋H－C5H9O4]+, 119.034 3 [M＋H－C5H11NO4]+腺苷 6c0.80C9H8O3182.081 2 [M＋NH4]+164.047 3?3.7119.047 2 [M＋NH4－CH5O2N]+, 123.046 9 [M＋NH4－C2H5ON]+對(duì)香豆酸 7b0.84C4H6O5152.055 4 [M＋NH4]+134.021 52.5135.032 9 [M＋NH4－NH3]+蘋(píng)果酸 8c1.16C11H12O4209.080 8 [M＋H]+208.073 6?1.9132.901 9 [M＋H－C2H4O3]+, 193.084 8 [M＋H－O]+甲基阿魏酸 9b1.66C7H6O4155.033 6 [M＋H]+154.026 6?0.7137.027 3 [M＋H－H2O]+, 109.027 4 [M＋H－CH2O2]+龍膽酸 10b1.66C7H6O4155.033 6 [M＋H]+154.026 6?0.7137.027 3 [M＋H－H2O]+, 109.027 4 [M＋H－CH2O2]+原兒茶酸 11b1.73C8H8O4169.049 5 [M＋H]+168.042 3?3.4115.056 2 [M＋H－C3H2O]+, 139.056 4 [M＋H－CH2O]+香草酸 12b2.13C9H10O3167.070 3 [M＋H]+166.063 0?2.9123.046 6 [M＋H－C2H4O]+, 105.040 4 [M＋H－C2H6O2]+, 121.028 9 [M＋H－C2H6O]+, 151.040 7 [M＋H－CH4]+羅布麻寧 13e2.13C15H22O9369.115 6 [M＋Na]+346.126 4?0.9185.041 3 [M＋Na－C6H9O5Na]+, 167.069 9 [M＋Na－C6H11O6Na]+4-(羥基甲基)-2,6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷 14c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+異阿魏酸 15c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 133.022 7 [M＋H－CH2O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+反式阿魏酸 16c3.79C10H10O4195.065 2 [M＋H]+194.057 9?4.3135.043 4 [M＋H－C2H4O2]+, 105.030 2 [M＋H－C3H6O3]+, 163.031 2 [M＋H－CH4O]+順式阿魏酸 17c4.20C9H6O4179.033 8 [M＋H]+178.026 6?4.2133.031 4 [M＋H－CH2O2]+, 123.045 6 [M＋H－C2O2]+，135.015 4 [M＋H－CO2]+7,8-二羥基香豆素 18c4.21C16H18O9372.129 0 [M＋NH4]+354.095 1?2.4163.038 8 [M＋NH4－C7H15O6N]+, 145.027 6 [M＋NH4－C7H17O7N]+, 135.043 1 [M＋NH4－C8H15O7N]+, 117.032 2 [M＋NH4－C8H17O8N]+綠原酸 19c4.21C18H22O9400.160 2 [M＋NH4]+382.126 4?1.8163.038 3 [M＋NH4－C9H19O6N]+, 145.027 3 [M＋NH4－C9H21O7N]+, 117.029 7 [M＋NH4－C13H17O6N]+, 135.044 5 [M＋NH4－C10H19O7N]+綠原酸乙酯 20c4.21C9H6O4179.033 9 [M＋H]+178.026 6?4.2133.031 4 [M＋H－CH2O2]+, 109.034 1 [M＋H－C3H2O2]+, 123.045 6 [M＋H－C2O2]+, 135.015 4 [M＋H－CO2]+七葉內(nèi)酯 21a4.26C22H22O11485.105 4 [M＋Na]+462.116 2?2.1265.044 1 [M＋Na－C6H12O6－OH]+當(dāng)藥黃素 22b4.71C10H12O4197.080 8 [M＋H]+196.073 6?4.3151.039 3 [M＋H－C2H6O]+, 123.042 3 [M＋H－C3H6O2]+短葉蘇木酚 23e5.13C20H27NO11475.192 2 [M＋NH4]+457.158 4?0.9145.049 1 [M＋NH4－C14H22N2O7]+, 163.058 9 [M＋NH4－C14H20N2O6]+1H-吲哚-3-基-4-O-β- D-吡喃葡萄糖基- β-D-吡喃葡萄糖苷 24a5.40C30H26O12579.149 7 [M＋H]+578.142 4?0.7127.038 4 [M＋H－C23H16O10]+, 123.045 4 [M＋H－C23H20O10]+, 163.040 5 [M＋H－C21H20O9]+, 135.043 1 [M＋H－C22H20O10]+原花青素B1

續(xù)表1

峰號(hào)tR/min分子式實(shí)驗(yàn)值理論值偏差(×10?6)碎片離子（MS）化合物名稱 25a5.41C30H26O12579.149 7 [M＋H]+578.142 4?0.7135.043 1 [M＋H－C22H20O10]+, 151.043 1 [M＋H－C22H20O9]+原花青素B2 26a6.24C15H14O6291.086 3 [M＋H]+290.079 0?1.6139.039 7 [M＋H－C8H8O3]+, 123.042 7 [M＋H－C8H8O4]+, 207.061 6 [M＋H－C4H4O2]+(+)-兒茶素 27a6.25C15H14O6291.086 3 [M＋H]+290.079 0?1.6139.039 7 [M＋H－C8H8O3]+, 123.042 7 [M＋H－C8H8O4]+, 207.061 6 [M＋H－C4H4O2]+(-)-表兒茶素 28b7.40C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+水楊酸甲酯 29b7.41C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+對(duì)羥基苯乙酸 30b7.43C8H8O3153.054 6 [M＋H]+152.047 3?4.3121.026 5 [M＋H－CH4O]+茴香酸 31a8.17C45H38O18867.213 1 [M＋H]+866.205 81.0245.052 2 [M＋H－C32H30O13]+, 287.061 7 [M＋H－C30H28O12]+原花青素C1 32c8.40C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C3H5O－OH]+松柏醛 33c8.49C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C3H5O－OH]+阿魏醛 34a8.50C17H16O5301.107 1 [M＋H]+300.100 0?1.8120.992 2 [M＋H－C9H8O4]+, 123.011 2 [M＋H－C10H10O3]+, 135.107 8 [M＋H－C9H10O3]+杜鵑素 35c8.51C10H10O3179.070 3 [M＋H]+178.063 0?4.0105.067 5 [M＋H－C2HO2－OH]+對(duì)香豆酸甲酯 36e11.13C16H28O7355.172 3 [M＋Na]+332.183 5?0.6163.045 7 [M＋Na－C10H17O2]+, 250.984 6 [M＋Na－CH3－C5H6]+羅哌啶 37a12.29C15H10O7303.0548 [M＋H]+302.042 7?3.4153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+, 137.023 5 [M＋H－C8H6O4]+, 165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+, 285.047 7 [M＋H－H2O]+, 123.041 6 [M＋H－C9H8O4]+槲皮素 38a12.29C15H10O7303.049 9 [M＋H]+302.042 7?3.4153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+, 137.023 5 [M＋H－C8H6O4]+, 165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+, 285.047 7 [M＋H－H2O]+草質(zhì)素 39a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+槲皮素-4′-O-葡萄糖苷 40a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+異槲皮苷 41a12.29C21H20O12465.102 8 [M＋H]+464.095 5?4.7303.050 4 [M＋H－C6H10O5]+金絲桃苷 42e12.30C19H28O10439.157 5 [M＋Na]+416.168 30.4147.042 6 [M＋Na－C13H17O6Na]+, 291.069 8 [M＋Na－C2H3O－C5H6ONa]+, 356.973 8 [M＋Na－C2H3O2Na]+, 388.965 8 [M＋Na－C2H3Na]+戊-4-烯基-2,3,4,6-四- O-乙?；?D-甘露吡喃糖苷 43a12.50C27H30O16611.160 7 [M＋H]+610.153 4?0.3303.049 1 [M＋H－C12H20O9]+蘆丁 44a13.60C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?1.4153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 137.022 9 [M＋H－C8H6O3]+山柰酚 45a13.98C27H30O15595.165 8 [M＋H]+594.158 5?2.5287.055 7 [M＋H－C15H16O7]+煙花苷 46a13.98C27H30O15595.165 8 [M＋H]+594.158 5?2.5287.055 7 [M＋H－C15H16O7]+3,6-二葡萄糖基芹菜素 47e14.06C41H32O26958.152 0 [M＋NH4]+940.118 2?0.3153.017 6 [M＋NH4－C34H31O22N]+, 771.101 7 [M＋NH4－C7H9O4N]+1,2,3,4,6-五沒(méi)食子酰葡萄糖 48a14.13C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?1.4287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+槲皮苷 49a14.14C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?1.4153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 137.022 9 [M＋H－C8H6O3]+，163.045 1 [M＋H－C6H4O3]+木犀草素 50a14.15C15H10O6287.055 0 [M＋H]+286.047 7?2.6153.020 3 [M＋H－C8H6O2]+, 147.045 9 [M＋H－C6H4O4]+野黃芩素 51a14.16C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+山柰酚-4'-葡萄糖苷 52a14.17C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+木犀草素-7-O-葡萄糖苷 53a14.18C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+山柰酚-3-O-半乳糖苷 54a14.19C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+紫云英苷 55a14.20C21H20O11449.107 8 [M＋H]+448.100 6?2.6287.055 4 [M＋H－C6H10O5]+木犀草素-5-O-葡萄糖苷 56c14.25C25H24O12517.134 1 [M＋H]+516.126 8?2.4163.038 8 [M＋H－C16H18O9]+異綠原酸C

續(xù)表1

續(xù)表1

峰號(hào)tR/min分子式實(shí)驗(yàn)值理論值偏差(×10?6)碎片離子（MS）化合物名稱 80a28.32C30H24O12594.160 6 [M＋NH4]+576.126 8?0.2533.115 8 [M＋NH4－C2H7ON]+原花青素A6 81d28.34C15H24205.195 0 [M＋H]+204.187 8?1.4149.022 6 [M＋H－C4H8]+, 121.026 0 [M＋H－C6H12]+, 107.077 9 [M＋H－C7H14]+β-石竹烯 82a28.34C15H12O2225.091 0 [M＋H]+224.083 7?2.6105.033 2 [M＋H－C8H8O]+, 197.093 0 [M＋H－CO]+, 181.064 5 [M＋H－C2H4O]+黃烷酮 83e28.51C18H39N270.315 5 [M＋H]+269.308 30.5144.076 8 [M＋H－C9H18]+, 102.130 2 [M＋H－C12H24]+, 155.060 7 [M＋H－C7H17N]+, 158.094 1 [M＋H－C8H16]+，184.204 2 [M＋H－C6H14]+N,N-二甲基-1-十六烷基胺 84e28.67C11H16O3197.117 2 [M＋H]+196.109 9?2.9151.118 0 [M＋H－CH2O2]+, 179.102 6 [M＋H－H2O]+黑麥草內(nèi)酯 85e28.91C18H34O284.294 8 [M＋NH4]+266.261 0?4.5149.055 8 [M＋NH4－C7H21ON]+亞麻醇 86b28.93C24H38O4391.284 3 [M＋Na]+390.277 0?0.8149.022 4 [M＋Na－C16H34O]+, 333.202 9 [M＋Na－C4H10]+，361.220 9 [M＋Na－C2H6]+鄰苯二甲酸二辛酯 87b28.94C24H38O4391.284 3 [M＋H]+390.277 0?0.8149.022 4 [M＋H－C16H34O]+, 333.202 9 [M＋H－C4H10]+，361.220 9 [M＋H－C2H6]+鄰苯二甲酸二(2-乙基)已酯 88e28.98C18H30O263.236 9 [M＋H]+262.229 7?4.0233.105 6 [M＋H－C2H6]+2,6-二叔丁基-4-仲丁基苯酚 89d29.00C15H24205.195 1 [M＋H]+204.187 8?1.4121.029 9 [M＋H－C6H12]+, 149.027 0 [M＋H－C4H8]+α-石竹烯 90d29.01C15H24205.195 1 [M＋H]+204.187 8?1.4149.022 6 [M＋H－C4H8]+, 121.026 0 [M＋H－C6H12]+, 105.078 2 [M＋H－C7H16]+, 107.077 9 [M＋H－C7H14]+, 109.101 2 [M＋H－C7H12]+, 119.082 3 [M＋H－C6H14]+, 149.128 6 [M＋H－C4H8]+α-金合歡烯 91b29.10C21H36O4353.268 6 [M＋H]+352.261 4?1.3121.100 8 [M＋H－C12H24O4]+, 105.069 7 [M＋H－C13H28O4]+, 261.223 8 [M＋H－C3H8O3]+, 107.084 1 [M＋H－C13H26O4]+, 131.087 0 [M＋H－C14H22O2]+, 135.114 1 [M＋H－C11H22O4]+亞麻酸甘油酯 92b29.12C18H30O2279.231 9 [M＋H]+278.224 6?1.7149.022 5 [M＋H－C7H14O2]+, 121.028 6 [M＋H－C9H18O2]+亞麻酸 93d29.21C15H22O2252.195 8 [M＋NH4]+234.162 00.6211.107 0 [M＋NH4－C2H3N]+蜂斗菜內(nèi)酯A 94d29.27C30H46O5487.341 2 [M＋H]+486.334 5?2.3159.115 4 [M＋H－C21H28O3]+, 173.131 3 [M＋H－C20H26O3]+, 199.149 8 [M＋H－C19H28O2]+, 187.144 5 [M＋H－C19H24O3]+, 249.153 7 [M＋H－C15H26O2]+, 265.196 5 [M＋H－C14H22O2]+葛蘭素A 95b29.36C18H32O2281.247 5 [M＋H]+280.240 2?0.4145.097 9 [M＋H－C10H16]+, 151.032 0 [M＋H－C7H14O2]+, 248.985 6 [M＋H－CH4O]+, 109.101 2 [M＋H－C10H20O2]+, 111.117 6 [M＋H－C10H18O2]+, 149.024 8 [M＋H－C7H16O2]+, 151.023 1 [M＋H－C7H14O2]+亞油酸 96b29.43C12H14O4223.096 5 [M＋H]+222.089 2?2.3149.022 0 [M＋H－C3H6O2]+, 121.028 6 [M＋H－C5H9O2]+鄰苯二甲酸二乙酯 97b29.83C16H22O4279.158 9 [M＋H]+278.151 8?0.4149.026 5 [M＋H－C8H18O]+, 121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+鄰苯二甲酸二正丁酯 98b29.84C16H22O4279.159 1 [M＋H]+278.151 8?0.4149.026 5 [M＋H－C8H18O]+, 121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+鄰苯二甲酸二異丁酯

a-黃酮類(lèi) b-有機(jī)酸類(lèi) c-苯丙素類(lèi) d-萜類(lèi) e-其他類(lèi)

a-flavonoids b-organic acids c-phenylpropanoids d-terpenoids e-others

3.2 質(zhì)譜裂解規(guī)律總結(jié)

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的薔薇科植物中含有的化學(xué)成分建立本地?cái)?shù)據(jù)庫(kù)，從石楠葉總離子流圖中選擇較明顯的峰，結(jié)合對(duì)照品質(zhì)譜圖，推測(cè)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，共匹配98種化合物。分別對(duì)每類(lèi)化學(xué)成分質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行總結(jié)。

3.2.1 黃酮類(lèi)化合物 黃酮類(lèi)化合物的基本母核為2-苯基色原酮，以游離或糖苷的形式存在于自然界[4]，黃酮類(lèi)化合物具有相同的母核，在進(jìn)行質(zhì)譜解析過(guò)程中具有相似的裂解規(guī)律，黃酮及其苷類(lèi)在裂解過(guò)程中容易發(fā)生糖苷鍵斷裂、C環(huán)的逆狄爾斯-阿爾德（RDA）裂解以及一氧化碳（CO）、二氧化碳（CO2）、水（H2O）等一些中性分子的丟失[5-6]。本實(shí)驗(yàn)共鑒定出33種黃酮類(lèi)成分。以化合物槲皮素和翻白葉苷A為例，簡(jiǎn)述黃酮類(lèi)化合物的鑒定過(guò)程?；衔?7的保留時(shí)間為12.29 min，在正離子模式下準(zhǔn)分子離子峰[M＋H]+/303.054 8，分子式為C15H10O7，在二級(jí)質(zhì)譜中，主要進(jìn)行2種方式的裂解，裂解方式1為C 環(huán)的RDA裂解，產(chǎn)生特征碎片離子/153.018 3 [M＋H－C8H6O3]+，裂解方式2為丟失C7H6O3形成離子碎片/165.020 3 [M＋H－C7H6O3]+，與文獻(xiàn)報(bào)道裂解方式一致[7]。故推測(cè)其為槲皮素，二級(jí)碎片和裂解方式如圖3所示?；衔?3的保留時(shí)間為17.50 min，在正離子模式下形成準(zhǔn)分子離子[M＋H]+/595.144 2，分子式為C30H26O13，在二級(jí)質(zhì)譜圖主要發(fā)生糖苷鍵的斷裂，產(chǎn)生黃酮苷元/287.055 2和苯丙素苷元/147.044 0，見(jiàn)圖4，與文獻(xiàn)報(bào)道裂解方式一致[8]，推測(cè)其為翻白葉苷A。

3.2.2 有機(jī)酸類(lèi)成分 本研究共檢測(cè)到有機(jī)酸類(lèi)成分（包括脂肪酸和酚酸類(lèi)成分）有24個(gè)，在MS掃描過(guò)程中均以[M＋H]+的準(zhǔn)分子離子峰形式存在。現(xiàn)以化合物鄰苯二甲酸二正丁酯為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。在正離子模式下，化合物97的保留時(shí)間為29.83 min形成準(zhǔn)分子離子/279.158 9 [M＋H]+，分子式為C16H22O4，在二級(jí)質(zhì)譜中，主要離子碎片有/149.026 5 [M＋H－C8H18O]+，/121.029 1 [M＋H－C9H18O2]+，見(jiàn)圖5，該化合物的質(zhì)譜裂解方式與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，推測(cè)該化合物為鄰苯二甲酸二正丁酯。有機(jī)酸中酚酸類(lèi)物質(zhì)成分極性強(qiáng)，故出峰時(shí)間靠前，共鑒定出14種酚酸類(lèi)化合物，化合物22在正離子模式下保留時(shí)間為4.71 min形成準(zhǔn)分子離子/197.080 8 [M＋H]+，分子式為C10H12O4，在二級(jí)質(zhì)譜中，主要離子碎片有/151.039 3 [M＋H－C2H6O]+、123.042 3 [M＋H－C3H6O2]+，根據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[10-11]對(duì)比可知此化合物為短葉蘇木酚。圖6為短葉蘇木酚二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解方式。

圖3 槲皮素的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解規(guī)律

圖4 翻白葉苷A的二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解規(guī)律

圖5 鄰苯二甲酸二正丁酯二級(jí)質(zhì)譜圖及裂解規(guī)律

3.2.3 苯丙素類(lèi) 苯丙素是一類(lèi)由C6-C3結(jié)構(gòu)單元構(gòu)成的一類(lèi)化合物，從質(zhì)譜中檢測(cè)出15個(gè)苯丙素類(lèi)成分，包含3個(gè)香豆素類(lèi)成分：7,8-二羥基香豆素、七葉內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯。12個(gè)簡(jiǎn)單苯丙素類(lèi)成分：對(duì)香豆酸、甲基阿魏酸、異阿魏酸、反式阿魏酸、順式阿魏酸、綠原酸、綠原酸乙酯、松柏醛、阿魏醛、對(duì)香豆酸甲酯、異綠原酸C、丁香酚。以東莨菪內(nèi)酯為例，簡(jiǎn)述其鑒定過(guò)程。在正離子模式下保留時(shí)間為22.98 min，準(zhǔn)分子離子峰/193.049 5 [M＋H]+，推測(cè)其分子式為C10H8O4。該碎片離子繼續(xù)失去CO2中性分子得到產(chǎn)物離子/149.029 9 [M＋H－CO2]+。結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[12]對(duì)東莨菪素裂解的介紹，推測(cè)其為東莨菪內(nèi)酯。

圖6 短葉蘇木酚的二級(jí)質(zhì)譜圖及其裂解規(guī)律

3.2.4 萜類(lèi)成分 根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)果分析，推測(cè)出14個(gè)萜類(lèi)成分，其中包括9個(gè)三萜類(lèi)成分和3個(gè)倍半萜類(lèi)成分和1個(gè)二萜，其中4個(gè)倍半萜為β石竹烯、α-石竹烯、蜂斗菜內(nèi)酯A和α-金合歡烯，根據(jù)其log值區(qū)分其保留時(shí)間，其中9個(gè)三萜類(lèi)成分為齊墩果烷型的五環(huán)三萜類(lèi)成分，分別為葛蘭素A、委陵菜酸、阿江欖仁酸、鐵冬青酸、積雪草酸、野鴉椿酸、2, 24-二羥基熊果酸、覆盆子酸和2α,19α,23-三羥基齊墩果酸。

3.2.5 其他類(lèi)成分 從石楠葉提取液中鑒定出15個(gè)其他類(lèi)成分。包括1個(gè)鞣質(zhì)類(lèi)化合物：1,2,3,4,6-五--沒(méi)食子酰葡萄糖；1個(gè)胺類(lèi)成分,-二甲基-1-十六烷基胺；2個(gè)生物堿類(lèi)成分腺苷和1-吲哚-3-基-4--β--吡喃葡萄糖基-β--吡喃葡萄糖苷；1個(gè)酮類(lèi)成分β-紫羅蘭酮；1個(gè)脂肪醇類(lèi)亞麻醇；1個(gè)苯甲醇類(lèi)成分2-苯氧基-1-丙醇；3個(gè)苯酚類(lèi)成分：4-(羥基甲基)-2,6-二甲氧基苯基-β--吡喃葡萄糖苷、羅布麻寧和原兒茶醛和1個(gè)脂肪醇類(lèi)化合物亞麻醇，此外還有二氫獼猴桃內(nèi)酯、姜酮酚、2,6-二叔丁基-4-仲丁基苯酚和羅哌啶。

4 討論

本研究首次基于UPLC-Q-TOF-MSn法對(duì)彝族藥石楠葉中化學(xué)成分進(jìn)行了分析，共鑒定了98種成分，其中黃酮類(lèi)成分30個(gè)、有機(jī)酸類(lèi)成分24個(gè)、苯丙素類(lèi)成分15個(gè)、萜類(lèi)成分14個(gè)和其他類(lèi)化合物15個(gè)，除了齊墩果酸、α-石竹烯和β石竹烯為文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道的，另外95個(gè)均為首次從石楠葉中報(bào)道的化學(xué)成分。對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)石楠葉中黃酮和酚酸類(lèi)成分種類(lèi)最多，占比大于一半，推測(cè)這2類(lèi)成分可能為石楠葉發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤以及保護(hù)心腦血管等藥理作用，近年來(lái)備受關(guān)注[13]，酚酸類(lèi)成分具有抗菌、抗癌、解熱鎮(zhèn)痛[14-16]等藥理作用。從石楠葉中鑒定出的化學(xué)成分可能為相關(guān)藥理作用的活性成分，但是如何將化學(xué)成分與藥效相關(guān)聯(lián)，以確定石楠葉藥效物質(zhì)是今后的一個(gè)研究方向。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)目前關(guān)于石楠葉化學(xué)成分研究的報(bào)道比較少，石楠葉化學(xué)成分的相關(guān)研究還有很大空間。石楠葉生物多樣性評(píng)價(jià)及其與化學(xué)成分種類(lèi)及含量的相關(guān)性研究、石楠葉中活性成分的積累規(guī)律和最佳采摘時(shí)間研究、影響石楠葉化學(xué)成分的環(huán)境條件研究等領(lǐng)域，都可以作為今后石楠葉的研究方向[17]。

目前中醫(yī)藥市場(chǎng)需求量大，全國(guó)各地都在發(fā)展中藥材種植，但石楠葉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)沒(méi)有明確，活性成分的積累規(guī)律和最佳采摘時(shí)間、影響化學(xué)成分含量的環(huán)境條件等問(wèn)題均有待解決，這些都是制約石楠葉種植業(yè)發(fā)展的瓶頸問(wèn)題，而解決這些問(wèn)題的基礎(chǔ)都是化學(xué)成分研究。目前石楠葉的臨床應(yīng)用僅依靠中醫(yī)基礎(chǔ)理論，缺乏現(xiàn)代化研究，不利于中醫(yī)藥的現(xiàn)代化發(fā)展。另外石楠葉的研究可能涉及農(nóng)學(xué)、園林、臨床醫(yī)學(xué)等不同學(xué)科，需要進(jìn)行多學(xué)科的交叉融合研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Rapid identification of chemical components ofbased on UPLC-Q-TOF-MS

MA Yong-ben1, 2, 3, WANG Chun-long4, WANGFeng-xia1, 2, 3, WANG Meng1, 2, 3, TIAN Wei1, 2, 3, WU Ling-fang1, 2, 3, NIU Li-ying1, 2, 3

1. Hebei University of Traditional Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China 2. Hebei Traditional Chinese Medicine Formula Granule Engineering & Technology Innovate Center, Shijiazhuang 050091, China 3. Quality Evaluation & Standardization Engineering Research Center of Traditional Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China 4. Yingkerui (Tianjin) Innovative Medicine Research Co., Ltd., Tianjin 300382, China

UPLC-Q-TOF-MS was used to quickly analyze the chemical components of.The chromatographic column was waters BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm). The mobile phase was acetonitrile (A)-0.1% formic acid water (B). The flow rate was 0.3 mL/min. To obtain the accurate molecular weight, multi-stage mass spectrum data, and mass fragment ion information, etc., peak view 1.2 software was used to analyze the mass spectra. The components were identified in combination with literature reports.A total of 98 chemical components were identified, mainly including 30 flavonoids, 24 organic acids, 15 phenylpropanoids, 14 terpenoids and 15 other components, of which 95 components are first identified from of.The method established in this study can quickly, accurately and comprehensively identify the chemical constituents of, and provide the basis for the research on the material basis of its medicinal effect.

UPLC-Q-TOF-MS;; flavonoids; organic acid; phenolic acids; triterpenoids

R284.1

A

0253 - 2670(2022)20 - 6401 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.20.012

2022-02-16

河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目（2023114）；河北省自然基金資助項(xiàng)目（H2019423050）；河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（QN2019119）

馬永犇（1997—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)及作用機(jī)制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: Mayongben@hebcm.edu.cn

牛麗穎，博士生導(dǎo)師，二級(jí)教授，主要從事中藥藥效物質(zhì)及作用機(jī)制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: niuliyingyy@163.com

吳玲芳，副教授，博士，主要從事中藥藥效物質(zhì)及作用機(jī)制研究。Tel: (0311)89926890 E-mail: fanglingwu@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]