賈朋賀，田軼男，徐曉軍，曾斯杰，楊定國(guó)，韓長(zhǎng)日，劉 紅,*

乙?；包S果多糖及其抗氧化活性研究

賈朋賀1，田軼男1，徐曉軍1，曾斯杰2，楊定國(guó)3，韓長(zhǎng)日3，劉 紅1,2*

1. 海南師范大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，海南海口 571158；2. 海口市熱帶特色藥食同源植物研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口 571158；3. 海南科技職業(yè)大學(xué)藥食同源植物資源海南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?571126

蛋黃果（A. DC）乙?；揎椂嗵堑目寡趸钚詢?yōu)于未修飾多糖，通過(guò)分析乙酰化蛋黃果多糖的乙?；取⒓t外光譜和形貌特征，闡明引起抗氧活性提升的原因。試驗(yàn)采用超聲波輔助法提取蛋黃果果肉粗多糖，用三氯乙酸法除去蛋白質(zhì)得到多糖。選取3份0.50 g多糖加入20% NaOH溶液溶解，分別加入1、3、5 mL乙酸酐，得到3種取代度（0.237±0.05、0.275±0.07、0.228±0.04）的乙?；包S果果肉多糖，評(píng)價(jià)其清除DPPH自由基、OH自由基和ABTS自由基的能力。結(jié)果表明，乙酸酐添加量由少到多時(shí)，蛋黃果多糖乙?；〈认蕊@著升高，后趨于平緩下降。乙酰化蛋黃果多糖的紅外光譜顯示了3417 cm–1（–OH）、2950 cm–1（–CH）處的伸縮振動(dòng)和1636 cm–1處的（–OH）轉(zhuǎn)動(dòng)振動(dòng)，1738 cm–1處出現(xiàn)酯基C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰，表明乙?；呀?jīng)成功接入。掃描電鏡結(jié)果顯示，未經(jīng)乙酰化的蛋黃果多糖表面相對(duì)光滑平整，呈片狀結(jié)構(gòu)；乙?；揎椂嗵欠肿娱g交聯(lián)增強(qiáng)，構(gòu)象發(fā)生了變化，變?yōu)楸砻嫘螤畈灰?guī)則，出現(xiàn)很多空隙且表面粗糙。3種乙?；包S果多糖中DHG-Ac2（3 mL醋酐）清除效果最好，在濃度1.0 mg/mL時(shí)，DPPH清除能力、ABTS自由基清除率、OH自由基清除率分別為91.37%、58.73%、56.36%，分別高于蛋黃果多糖10.0%、43.7%、25.3%。這是引入的乙?；芑罨嗵擎溨械漠愵^碳，使多糖的供氫能力提升，繼而提升乙?；包S果多糖的抗氧化作用。本研究為海南產(chǎn)蛋黃果多糖的深入開(kāi)發(fā)與抗氧化應(yīng)用提供了基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

乙酰化多糖；結(jié)構(gòu)修飾；抗氧化活性；蛋黃果

蛋黃果（A. DC），原產(chǎn)于古巴、北美洲熱帶，樹(shù)姿美麗，果形美觀，果肉似蛋黃，故名為蛋黃果[1]。蛋黃果果肉營(yíng)養(yǎng)非常豐富，含有膳食纖維、碳水化合物、多種礦物質(zhì)、維生素、脂肪和蛋白質(zhì)等，可加工制成果醬、飲料和果酒等，是具有廣泛研究前景的優(yōu)質(zhì)食用資源[2]。近年來(lái)，蛋黃果的淀粉、成熟度、多糖研究受到學(xué)者的關(guān)注，如蛋黃果淀粉的物化性質(zhì)、多尺度超分子蛋黃果淀粉結(jié)構(gòu)分析等[3]。蛋黃果成熟期分3個(gè)階段，當(dāng)果皮顏色從綠變黃時(shí)，其硬度和可滴定酸度下降[4]，不同成熟度的淀粉和多糖的積累程度不同，因此選擇成熟度非常重要。由于蛋黃果多糖具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗癌、免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、維持腸道穩(wěn)態(tài)保護(hù)肝臟、抗病毒、降血糖等重要的生物活性[5]，且蛋黃果種子多糖的抗氧化性優(yōu)于果肉[6]。多糖乙?；揎椀难芯繄?bào)道顯示乙?；拇笏舛嗵荹7]、青錢柳多糖[8]、銀耳多糖[9]、秀珍菇多糖[10]、石斛多糖[11]等抗氧化性優(yōu)于未修飾多糖，其中乙?；噱X柳多糖提高H2O2處理樹(shù)突狀細(xì)胞的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶活性[8]；乙?；嗵谴龠M(jìn)RAW 264.7巨噬細(xì)胞的吞噬活性和一氧化氮釋放[11]。鑒于乙?；包S果多糖的研究未見(jiàn)報(bào)道，本研究將果肉多糖進(jìn)行乙?；揎椇捅碚鳎骄恳阴；包S果多糖引起抗氧化性提升的原因，旨在為海南產(chǎn)蛋黃果多糖的深入開(kāi)發(fā)與抗氧化應(yīng)用提供了基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

多糖的乙酰化是指在堿性水溶液條件中利用乙酸酐與多糖的羥基氧進(jìn)行反應(yīng)，乙?；却笮∮绊懚嗵堑纳锘钚?。由于多糖在強(qiáng)堿溶液中溶解，制備乙?；嗵潜仨毐ＷC在堿性條件下進(jìn)行反應(yīng)，同時(shí)乙酸酐的添加量將直接影響乙?；?。CHEN等[7]將1.5 g大蒜多糖溶解于15 mL蒸餾水，緩慢加入5 mL乙酸酐和10% NaOH溶液控制pH在7～11之間，于30℃保持2.5 h，然后加入10 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH為7，反應(yīng)終止得到抗氧化性較好的乙?；笏舛嗵?。

乙?；揎椂嗵歉纳贫嗵墙Y(jié)構(gòu)，提高多糖的溶解度和抗氧化性。乙?；せ疃嗵菤湓赢惓Ｌ既萘?，顯示很強(qiáng)的供質(zhì)子能力[12]。另外，其還可以通過(guò)將自由基轉(zhuǎn)化為以前的產(chǎn)物來(lái)終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)使其擁有更好的抗氧化活性[13]。為了充分利用蛋黃果的營(yíng)養(yǎng)成分，分析乙?；包S果多糖的抗氧化活性，通過(guò)對(duì)蛋黃果多糖提取與乙?；〈确治?，尋找具有優(yōu)良抗氧化活性的乙?；嗵墙Y(jié)構(gòu)，更好地開(kāi)發(fā)利用海南蛋黃果資源，提升產(chǎn)品的利用度，挖掘新型食品抗氧化劑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料與試劑 蛋黃果購(gòu)于海南省?？谑兴袌?chǎng)，成熟度相近的果實(shí)。

無(wú)水乙醇、石油醚、三氯乙酸、乙酸酐、鹽酸、氫氧化鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；ABTS、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（美國(guó)Sigma公司）；水楊酸，廣州化學(xué)試劑廠。

1.1.2 儀器與設(shè)備 冷凍干燥機(jī)，LGJ-10，北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，DHG-9070A，上海申賢恒溫設(shè)備廠；超聲波清洗儀，XO-5200DTS，南京先歐儀器制造有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，HH-1，江蘇智博瑞儀器制造有限公司；循環(huán)水式多用真空泵，SHZ-D（Ⅲ），河南省予華儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，RE-52A，上海亞榮生化儀器廠；電子天平，TP-214，丹佛儀器（北京）有限公司；恒流泵，HL-2D，上海青浦滬西儀器公司；紅外光譜儀，Nicolet 6700，美國(guó)；雙光束紫外分光光度計(jì)，TU-1901，北京普析通用儀器有限公司；高速離心機(jī)，LGJ-10，北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司。

1.2 方法

1.2.1 蛋黃果多糖提取工藝 （1）蛋黃果樣品預(yù)處理。蛋黃果去除果皮，分開(kāi)種子和果肉，并將果肉打漿，放在50℃烘干箱內(nèi)烘干12 h。隨后將足夠干燥的蛋黃果果肉粉碎，通過(guò)60目篩網(wǎng)，采用石油醚連續(xù)提取法脫脂，運(yùn)用乙醇溶液（99.5%）浸透48 h除雜，烘干處理，最后放置在干燥器中予以備用。

（2）蛋黃果多糖提取。根據(jù)馬金爽等[5]的超聲波輔助法方法提取蛋黃果多糖。采用蒸餾水為提取劑，稱取5.0 g蛋黃果果肉粉末置于錐形瓶?jī)?nèi)，超聲提取，然后4000 r/min離心15 min，過(guò)濾，接著用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮到5/1，添加4倍濃縮溶液體積的乙醇溶液（99.5%），放置在4℃環(huán)境下靜置12 h，減壓過(guò)濾、冷凍干燥得蛋黃果的果肉粗多糖[14]。

（3）蛋黃果多糖的除蛋白。蛋黃果粗多糖含有蛋白質(zhì)，采用三氯乙酸在低溫條件下使蛋白質(zhì)變性析出，除去蛋黃果多糖中的蛋白質(zhì)。將上述得到的蛋黃果粗多糖溶解于蒸餾水，并置于冰浴中，加入預(yù)先配置的15%三氯乙酸溶液，邊加入邊攪拌使溶液的pH為2～3，4℃下保持1h。將除蛋白的溶液取出，離心15 min，收集上清液，濃縮、添加4倍濃縮溶液體積的乙醇（99.5%）放置在4℃靜置12 h，減壓過(guò)濾、冷藏干燥得蛋黃果果肉除蛋白粗多糖，命名為DHG[15]。

1.2.2 蛋黃果多糖乙酰化修飾與取代度測(cè)定（1）乙?；包S果多糖制備。以蛋黃果多糖為原料，通過(guò)探索蛋黃果多糖的抗氧化活性效果，結(jié)合多糖乙酰化反應(yīng)對(duì)蛋黃果多糖進(jìn)行改性，將改性前后的抗氧化活性進(jìn)行對(duì)比，以期為后續(xù)的蛋黃果多糖的研究以及副產(chǎn)物開(kāi)發(fā)提供新的研究思路。

采用乙酸酐法修飾，參考CHEN等[16]的方法稍作修改。稱取3份蛋黃果多糖各0.50 g，在攪拌下用20 mL蒸餾水充分溶解，用20%NaOH溶液將pH調(diào)至9.0。將均相溶液在室溫下保持10 min，分別加入1、3、5 mL乙酸酐，獲得具有不同取代度的乙?；苌铩ｋS后向每種混合物中添加20%NaOH，將pH保持在8.0～8.5。30 min后，用20%HCl溶液停止反應(yīng)，并將pH調(diào)節(jié)至7.0。將所得溶液用離子水透析48 h（透析袋MW 3500），濃縮，醇沉，抽濾，冷凍，干燥得3種乙?；包S果多糖，即DHG-Ac1（1 mL醋酐）、DHG-Ac2（3 mL醋酐）和DHG-Ac3（5 mL醋酐）。

（2）蛋黃果多糖乙?；〈龋ǎy(cè)定。參考SáNCHEZ-RIVERA等[17]的方法。將20 mg Ac-DHG1-3溶于10 mL 20%NaOH溶液中，在50℃下攪拌2 h。以酚酞為指示劑，用20%HCl溶液滴定過(guò)量的NaOH。乙?；浚? %）按公式（1）計(jì)算，DHG為對(duì)照組。

草害采取藥劑化除與人工除草相結(jié)合的辦法。一般在播后苗前，要趁雨后搶墑，畝用96%金都爾乳油60-70 mL兌水50 kg，均勻噴于土表；在苗期單子葉雜草5-6葉前，畝用25%蓋草能乳油40-50 mL加水30 kg，噴于雜草莖葉上，有很好的防除效果。

式中，0為NaOH的體積，mL；0為NaOH的濃度，mol/L；1代表HCl的體積，mL；1為HCl的濃度，mol/L；是樣品質(zhì)量，mg。

1.2.3 紅外光譜（IR）分析 取適量待測(cè)的蛋黃果多糖和乙?；包S果多糖樣品與干燥后的KBr粉末充分混合均勻后，放置于研缽內(nèi)研磨、壓片，以空氣為空白參照，在波長(zhǎng)4000～400 cm?1下對(duì)樣品掃描。

1.2.4 掃描電鏡（SEM）分析 取適量待測(cè)的蛋黃果多糖和乙?；包S果多糖樣品置于真空噴鍍儀內(nèi)噴金，室溫條件下進(jìn)行電鏡掃描。

1.2.5 抗氧化活性測(cè)試 （1）DPPH自由基清除能力的測(cè)定。參照BRAND-WILLIAMS等[18]的方法。采用抗壞血酸作對(duì)照。配制DPPH乙醇溶液（1 mmol/L），將DPPH溶液和多次準(zhǔn)確量取的2 mL多種質(zhì)量濃度的樣品溶液均勻混合，在25℃暗處放置30 min，隨后記錄下517 nm處的吸光度值，并計(jì)算其清除率。

（2）ABTS自由基清除能力的測(cè)定。參考RE等[19]的方法。用無(wú)水乙醇配置在734 nm下吸光度為0.7的ABTS溶液。配置待測(cè)溶液，室溫下反應(yīng)6 min，在734 nm下測(cè)量其吸光度值，用抗壞血酸作對(duì)照，計(jì)算清除率。

（3）OH自由基清除能力的測(cè)定。根據(jù)SMIRNOFF等[20]的方法。配置H2O2、FeSO4和水楊酸溶液，濃度均為6 mmol/L。配置待測(cè)溶液，混勻，避光在37℃水浴反應(yīng)1 h。在520 nm處測(cè)量吸光度，計(jì)算清除率。用抗壞血酸作對(duì)照。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)；采用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 取代度分析

乙?；嗵遣煌〈韧鶝Q定著乙酰化多糖的理化性質(zhì)和生物活性。取代度通常是指多糖的每個(gè)D-葡萄糖單元上的活性羥基被取代的物質(zhì)的量。本研究選擇3種取代度乙?；嗵?，分別命名為DHG-Ac1、DHG-Ac 2、DHG-Ac 3，進(jìn)一步研究其抗氧化活性，結(jié)果見(jiàn)表1。當(dāng)乙酸酐用量分別為1、3、5 mL時(shí)，制備得到的乙?；嗵侨〈确謩e是0.237±0.05、0.275±0.07、0.228± 0.04。由表1可看出，當(dāng)乙酸酐∶蛋黃果多糖=6.48± 0.02時(shí)，蛋黃果多糖乙?；娜〈茸畲?，為0.275±0.07。

表1 不同乙酸酐體積對(duì)取代度的影響

注：*表示不同處理間差異差異（<0.05）。

Note:*represents significant difference between different treatments (<0.05).

2.2 結(jié)構(gòu)分析

蛋黃果多糖和乙?；包S果多糖DHG-Ac2的紅外譜圖如圖1所示。乙?；包S果多糖的紅外光譜顯示了3417 cm–1（–OH）、2950 cm–1（–CH）處的伸縮振動(dòng)和1636 cm–1處的（–OH）轉(zhuǎn)動(dòng)振動(dòng)，由此可知，乙?；磻?yīng)并沒(méi)有影響蛋黃果多糖的基本結(jié)構(gòu)。不同的是乙酰化蛋黃果多糖在1738 cm–1處有酯基C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰，而在蛋黃果多糖紅外光譜中沒(méi)有出現(xiàn)，表明其乙?；晒Α?/p>

圖1 蛋黃果多糖和乙?；包S果多糖紅外光譜圖

蛋黃果多糖和乙酰化蛋黃果多糖的掃描電鏡圖如圖2所示。未經(jīng)乙酰化的蛋黃果多糖表面相對(duì)光滑平整，呈片狀結(jié)構(gòu)。乙?；蟮牡包S果多糖表面形狀不規(guī)則，出現(xiàn)很多空隙并且表面粗糙。

A：蛋黃果多糖；B：乙酰化蛋黃果多糖。

2.3 抗氧化活性對(duì)比分析

2.3.1 DPPH自由基清除能力 DPPH為1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，其自由基在517 nm處有強(qiáng)吸收的單電子，使其醇溶液顯示出紫色的特征。自由基清除劑和單電子配對(duì)時(shí)，吸收效果逐漸消失，配對(duì)電子數(shù)量和褪色變化具有定量關(guān)系[21]。圖3結(jié)果顯示，Vc、蛋黃果多糖和乙?；包S果多糖對(duì)DPPH都有較好的清除效果。整體DPPH自由基清除能力表現(xiàn)為，Vc>乙?；包S果多糖>蛋黃果多糖，其清除率隨樣品濃度逐步增加而趨于穩(wěn)定。且3種乙?；包S果多糖中DHG-Ac2（3 mL醋酐）清除效果最好，在1.0 mg/mL時(shí)，清除能力達(dá)91.37%，高出蛋黃果多糖DPPH自由基清除能力10%左右。

2.3.2 ABTS自由基清除能力 ABTS自由基能夠被抗氧化劑提供的電子或氫原子滅活，導(dǎo)致溶液顏色變化，通過(guò)顏色變化檢測(cè)其物質(zhì)的抗氧化活性[22]。圖4結(jié)果顯示，整體ABTS自由基清除能力為Vc>乙?；包S果多糖>蛋黃果多糖，其隨濃度升高而增加。同濃度下，清除率由高到低依次是Vc、DHG-Ac2（3 mL醋酐）、DHG-Ac3（5 mL醋酐）、DHG-Ac1（1 mL醋酐），最低為蛋黃果多糖。乙?；包S果多糖和蛋黃果多糖ABTS自由基最高清除率分別為58.73%和40.86%。說(shuō)明通過(guò)乙?；揎椇蟮牡包S果多糖ABTS自由基清除率得到了提升，提高了43.7%。

圖3 乙酰化蛋黃果多糖和蛋黃果多糖DPPH自由基清除能力

圖4 乙?；包S果多糖和蛋黃果多糖ABTS自由基清除能力

2.3.3 OH自由基清除能力 OH在機(jī)體內(nèi)氧化能力很強(qiáng)，當(dāng)羥基自由基過(guò)量產(chǎn)生時(shí)，機(jī)體內(nèi)的氧化反應(yīng)系統(tǒng)動(dòng)態(tài)平衡被破化，導(dǎo)致很多疾病的發(fā)生，故要對(duì)羥基自由基進(jìn)行清除。圖5結(jié)果顯示，整體OH自由基清除能力為Vc>乙?；包S果多糖>蛋黃果多糖，其隨濃度升高而增加。DHG-Ac1（1 mL醋酐）和DHG-Ac3（5 mL醋酐）的消除率基本無(wú)差別。乙酰化蛋黃果多糖和蛋黃果多糖濃度在1.0 mg/mL時(shí)清除率達(dá)最高，分別為56.36%和44.97%。本研究中乙?；包S果多糖OH自由基清除能力高于蛋黃果多糖25.3%。

圖5 乙?；包S果多糖和蛋黃果多糖OH自由基清除能力

以上結(jié)果均表明，蛋黃果多糖具有一定的抗氧化活性，經(jīng)乙?；男院蟮牡包S果多糖，抗氧化性能力提高。

3 討論

植物多糖由許多相同或不同的單糖以α-或β-糖苷鍵所組成，其擁有多種生物活性。許多研究發(fā)現(xiàn)，蛋黃果多糖具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗癌、免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、維持腸道穩(wěn)態(tài)保護(hù)肝臟、抗病毒、降血糖等多種生物活性。蛋黃果多糖顯示較好的清除自由基能力、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用以及提高谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶活性等。將乙?；尤氲包S果多糖支鏈，改變多糖分子的橫向次序和定向性，增強(qiáng)多糖的表面粗糙性和溶水性。乙?；罨愵^碳的氫原子的程度越高，基團(tuán)的激活能力越強(qiáng)，氫衍生物的原子貢獻(xiàn)能力越強(qiáng)，表現(xiàn)出的抗氧活性越強(qiáng)。

乙?；包S果多糖的DPPH自由基、ABTS自由基和OH自由基的清除能力測(cè)定結(jié)果表明：在濃度為1.0 mg/mL時(shí)，乙酰化蛋黃果多糖中DHG-Ac2（3 mL醋酐）的DPPH清除能力、ABTS自由基清除率、OH自由基清除率分別為91.37%、58.73%、56.36%，高于蛋黃果多糖10%、43.7%、25.3%。這說(shuō)明乙?；包S果多糖提高了蛋黃果果肉的抗氧化性，與LI等[23]、蔡婉靜等[24]的研究結(jié)果相符。乙?；包S果多糖和蛋黃果多糖在清除DPPH自由基方面表現(xiàn)顯著，這與蛋黃果多糖的疏水性有關(guān)。乙?；鶊F(tuán)的引入可以提高蛋黃果多糖對(duì)ABTS自由基和OH的清除能力，主要由于多糖溶解性的改善導(dǎo)致抗氧化能力的提升。與王警等[25]、馬波等[26]、WANG等[27]的研究結(jié)果相符，即與乙酰龍眼肉多糖、辣木多糖、龍須菜多糖對(duì)OH自由基的清除能力一致。

取代度（D）是蛋黃果乙?；揎棶a(chǎn)物重要參數(shù)之一，本研究在堿性條件下，添加1、3、5 mL乙酸酐于蛋黃果多糖中，室溫反應(yīng)得到3種取代度（0.237±0.05、0.275±0.07、0.228±0.04）的乙酰化蛋黃果果肉多糖。WANG等[28-31]在實(shí)驗(yàn)中雖然增加乙酸酐添加量，但取代度呈先升高后趨于平緩下降的趨勢(shì)，并且抗氧化活性隨著取代度的增加而增加，這與本研究結(jié)果相符合。推測(cè)較高的取代度引起多糖抗氧化能力的提高，這可能是引入的乙?；芑罨嗵擎溨械漠愵^碳，使得多糖的供氫能力提升，繼而提升乙?；包S果多糖的抗氧化作用[27]。

蛋黃果多糖和乙酰化蛋黃果多糖的紅外光譜顯示了3417 cm–1（–OH）、2950 cm–1（–CH）處的伸縮振動(dòng)和1636 cm–1處的（–OH）轉(zhuǎn)動(dòng)振動(dòng)，表明乙酰化反應(yīng)沒(méi)有影響蛋黃果多糖基本結(jié)構(gòu)。本研究分析了D=0.275±0.07的乙酰化蛋黃果多糖在1738 cm–1酯基C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰，表明乙?；揎椇蠖嗵浅霈F(xiàn)了酯基中C=O的振動(dòng)吸收峰，實(shí)驗(yàn)也顯示較低乙?；鹊牡包S果多糖的紅外光譜在酯基C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰處表現(xiàn)不明顯。

從形貌特征觀察，蛋黃果多糖表面相對(duì)光滑平整，呈片狀結(jié)構(gòu)，這是大多數(shù)植物多糖的特征[32-34]，但乙酰化修飾多糖的分子間交聯(lián)增強(qiáng)，構(gòu)象發(fā)生了變化[35]，呈現(xiàn)表面形狀不規(guī)則、粗糙，多空隙，形貌的改變促進(jìn)了抗氧化性的提升。

綜上，通過(guò)乙酰化修飾可以改善多糖結(jié)構(gòu)，增加溶解性和表面粗糙度，改變了供氫能力可以提高其抗氧活性。相信隨著對(duì)蛋黃果多糖乙酰化修飾方法研究的進(jìn)一步深入，可以進(jìn)一步闡明乙?；包S果多糖的抗氧化活性機(jī)制。

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AcetylatedPolysaccharide and Its Antioxidant Activity

JIA Penghe1,TIAN Yinan1, XU Xiaojun1, ZENG Sijie2, YANG Dingguo3, HAN Changri3, LIU Hong1,2*

1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou, Hainan 571158, China; 2. Haikou Key Laboratory of Research and Development on Topical and Special Medicine and Edible Plant, Haikou, Hainan 571158, China; 3. Key Laboratory of Medicinal and Edible Plants Resources of Hainan Province, Haikou Institute of Science and Technology, Haikou, Hainan 571126, China

The antioxidant activity of the acetylated polysaccharides ofis better than that of unmodified polysaccharide. The reasons for the improvement of antioxidant activity of acetylated polysaccharides ofwere analyzed by degrees of acetyl substitution, infrared spectra and morphological characterization. Thepolysaccharide was extracted using the ultrasonic-assisted method, and the protein was removed by the trichloroacetic acid method. 0.50 g of thepolysaccharide was dissolved in 20% NaOH solution, then 1 mL, 3 mL and 5 mL of acetic anhydride were added respectively to obtain three degrees of substitution (0.237±0.014, 0.275±0.011 and 0.228±0.012) of acetylated polysaccharides. The scavenging effects were evaluated by DPPH free radical, OH radical and ABTS radical. The degree of acetyl substitution of polysaccharides increased significantly at first, then decreased gently with addition of acetic anhydride. The infrared spectra of the acetylated polysaccharides showed a stretching vibration of 3417 cm–1hydroxyl (–OH), 2950 cm–1methylene (–CH), 1636 cm–1hydroxyl (–OH) rotational vibration, and 1738 cm–1C=O stretching vibration, indicating that acetylation was successfully connected. The results of scanning electron microscope showed that the surface of theoriginal polysaccharides was relatively smooth and flat. As for acetylated polysaccharides, the intermolecular crosslinking was enhanced, the conformation was changed, and the surface shape became irregular and rough. Among the three acetylated polysaccharides, DHG-Ac2 (3 mL acetic anhydride) had the best scavenging effect. At the concentration of 1.0 mg/mL, the DPPH scavenging capacity, ABTS radical scavenging rate and OH radical scavenging rate was 91.37%, 58.73% and 56.36% respectively, which was higher than 10.0%, 43.7% and 25.3% of the original polysaccharides. The introduced acetyl group could activate the heterocephalic carbon in the polysaccharide chain to improve the hydrogen supply capacity of the polysaccharides, and then to enhance the antioxidant effect. This study would provide basic research data for further development and application of the polysaccharides of

aetylated polysaccharide; structural modifications; antioxidant activity;

Q539

A

10.3969/j.issn.1000-2561.2022.09.014

2021-12-14；

2022-03-07

?？谑兄攸c(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目（No. 2021-034）。

賈朋賀（1998—），男，碩士研究生，研究方向：植物化學(xué)。*通信作者（Corresponding author）：劉 紅（LIU Hong），E-mail：lh@hainnu.edu.cn。