胡泰然 李雪苓

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)2019級(jí)碩士研究生，安徽 合肥 230000；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，安徽 合肥 230000)

冠心病是動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致器官病變的最常見類型，是全球人類死亡的首要原因[1]。在我國(guó)，2018年以來，冠心病的死亡率更是超過了腫瘤等其他疾病而位居首位，且呈逐年升高趨勢(shì)[2-3]。冠心病主要的病理變化是動(dòng)脈粥樣斑塊的形成及發(fā)展。研究表明，鐵死亡的機(jī)制與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。細(xì)胞鐵死亡是鐵依賴途徑的脂質(zhì)過氧化[4]，是區(qū)別于細(xì)胞凋亡、壞死和自噬的新型細(xì)胞程序性死亡方式。2003年最早由美國(guó)Stockwell B團(tuán)隊(duì)在研究抗癌藥物時(shí)發(fā)現(xiàn)，并在隨后的研究中命名為“ferroptosis(鐵死亡)”。其產(chǎn)生的作用機(jī)制主要有2種[5]，一種是細(xì)胞內(nèi)的游離鐵離子通過芬頓反應(yīng)(fenton reaction)與過氧化氫相互作用，發(fā)生脂質(zhì)過氧化從而產(chǎn)生過多的不飽和脂肪酸，造成細(xì)胞的程序性死亡，可能與谷胱甘肽(GSH)合成減少有關(guān)；另一種是鐵蛋白的轉(zhuǎn)換異常，使細(xì)胞外的鐵離子數(shù)量異常升高，也稱“鐵過載”。近年來，隨著鐵死亡研究的進(jìn)展，其與冠心病的關(guān)系也有了更加合理的解釋[6]。在冠心病發(fā)展的早期，氧化應(yīng)激是其主要的病理因素之一，過氧化酶(POD)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞器脂質(zhì)過氧化，同時(shí)介導(dǎo)炎性反應(yīng)而導(dǎo)致炎癥介質(zhì)沉積，加速冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。隨著病情的進(jìn)展，鐵死亡等其他細(xì)胞程序性死亡廣泛發(fā)生，并誘導(dǎo)斑塊的不穩(wěn)定、破裂，是影響冠心病中晚期發(fā)展的關(guān)鍵因素[7]。

中藥治療冠心病療效確切，具有多靶點(diǎn)、多途徑、經(jīng)濟(jì)成本低等優(yōu)勢(shì)，中藥中的多種成分也已經(jīng)被證明具有抑制脂質(zhì)過氧化的作用[8]。本研究結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)[9]和數(shù)據(jù)分析方法，以鐵死亡為分析方向，篩選中藥調(diào)控冠心病的關(guān)鍵靶點(diǎn)，為中藥治療冠心病提供新思路。

1 材料與方法

1.1 鐵死亡相關(guān)基因和冠心病相關(guān)基因的獲取 鐵死亡相關(guān)基因通過搜索檢索詞“ferroptosis”從FerrDb數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.zhounan.org/ferrdb)獲取，并選擇“Driver”“Suppressor”“Marker”模塊，下載鐵死亡相關(guān)基因文件，再通過檢索文獻(xiàn)，補(bǔ)充未收錄的鐵死亡相關(guān)基因，去除重復(fù)值后獲得鐵死亡相關(guān)基因。登錄OMIM(https://omim.org)、GeneCards(https://www.genecards.org)、DurgBank(https://www.drugbank.com)、Disgenet(https://www.disgenet.org)數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索指令設(shè)置為“Coronary Heart Disease”，物種設(shè)置為“human”，檢索冠心病相關(guān)基因，去除重復(fù)值及轉(zhuǎn)換、規(guī)范基因名后獲得冠心病相關(guān)基因。

1.2 “鐵死亡-冠心病”交集基因獲取及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將篩選得到的鐵死亡相關(guān)基因和冠心病相關(guān)基因數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel表格中，合并成一列后選擇“條件格式—突出顯示單元格—重復(fù)值”，得到的重復(fù)值即為“鐵死亡-冠心病”交集基因，并通過微生信(http://www.bioinformatics.com.cn)平臺(tái)制作韋恩圖展示。將交集基因?qū)隨TRING(https://string-db.org)數(shù)據(jù)庫(kù)，最高置信度設(shè)置為0.7，去除游離沒有關(guān)聯(lián)的蛋白，下載得到PPI文件。文件導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件進(jìn)行可視化處理，構(gòu)建“鐵死亡-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)，選擇“Cytohub”插件分析節(jié)點(diǎn)連接度值(Degree值)、節(jié)點(diǎn)介度和節(jié)點(diǎn)緊密度，并根據(jù)Degree值的大小設(shè)置網(wǎng)絡(luò)圖的節(jié)點(diǎn)(node)、邊(edge)、顏色(colour)，最終分析得到Degree值排名前20的基因?yàn)椤拌F死亡-冠心病” 關(guān)鍵基因靶點(diǎn)。

1.3 基因本體(GO)功能和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析 為分析鐵死亡蛋白的生物功能、細(xì)胞組成和化學(xué)成分，以及其所涉及的信號(hào)通路，將“鐵死亡-冠心病”交集基因?qū)隡etascape平臺(tái)(https://metascape.org)，得到GO功能和KEGG通路富集分析文件，將文件轉(zhuǎn)換后導(dǎo)入R軟件，利用“ggplot”包構(gòu)建富集分析圖，并分別制作GO氣泡圖和KEGG柱狀圖。

1.4 含有“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因的關(guān)鍵中藥獲取 將Degree值排名前20的“鐵死亡-冠心病” 關(guān)鍵基因分別導(dǎo)入U(xiǎn)niProt(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)數(shù)據(jù)庫(kù)，物種設(shè)置為“human”，相關(guān)研究設(shè)置為“已驗(yàn)證”，獲取蛋白名全稱。將蛋白全稱輸入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP, https://old.tcmsp-e.com)，得到含有“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因的相關(guān)中藥。為明確每個(gè)中藥中所包含的“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因的多少，將相關(guān)中藥按照關(guān)鍵基因名分組，此處假設(shè)得到了X個(gè)關(guān)鍵基因，即分為X組，并全部導(dǎo)入Excel表格中，合并為一列,先將所有組合并為一列,通過選擇“條件格式—突出顯示單元格—重復(fù)值” 篩選出的重復(fù)值即為包含所有關(guān)鍵基因(X個(gè))的中藥。按照此法，依次遞減(每次遞減一組)需要合并為一列并篩選重復(fù)值的組數(shù)，得到包含X-1、X-2、X-3、X-4……個(gè)關(guān)鍵基因的中藥，最終將包含10個(gè)及以上關(guān)鍵基因的中藥為關(guān)鍵中藥，并作為本研究的對(duì)象。它們即包含了多種鐵死亡基因，又有作用于冠心病的靶點(diǎn)。

1.5 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及“中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將篩選得到的關(guān)鍵中藥導(dǎo)入TCMSP，設(shè)置篩選條件為口服生物利用度(OB)≥30%，類藥性(DL)≥0.18，得到中藥活性成分及其作用的靶點(diǎn)，靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換、規(guī)范基因名，并運(yùn)用Cytoscape 3.8.2軟件制作“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。然后將所得的中藥靶點(diǎn)基因和冠心病疾病基因?qū)隕xcel中，通過選擇“條件格式—突出顯示單元格—重復(fù)值”篩選交集基因，并將交集基因?qū)隨TRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，結(jié)果再次導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件，構(gòu)建“中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)，并通過“Cytohub”插件分析拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)，篩選得到Degree值排名前10的基因?yàn)椤爸兴?冠心病”核心基因靶點(diǎn)。

1.6 中藥調(diào)控冠心病相關(guān)鐵死亡關(guān)鍵基因的獲取 將“鐵死亡-冠心病”核心基因與“中藥-冠心病”關(guān)鍵基因取交集，得到中藥調(diào)控冠心病相關(guān)鐵死亡的關(guān)鍵基因，并通過微生信平臺(tái)制作韋恩圖展示。

2 結(jié)果

2.1 鐵死亡相關(guān)基因和冠心病相關(guān)基因的獲取 從FerrDb數(shù)據(jù)庫(kù)不同模塊中和文獻(xiàn)檢索共得到383個(gè)鐵死亡相關(guān)基因靶點(diǎn)，除去重復(fù)值后得到259個(gè)鐵死亡相關(guān)基因。從OMIM、GeneCards、DurgBank、Disgenet數(shù)據(jù)庫(kù)中共得到7717個(gè)冠心病疾病相關(guān)基因，去除重復(fù)值后得到955個(gè)疾病相關(guān)基因。

2.2 “鐵死亡-冠心病”交集基因獲取及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將篩選得到的259個(gè)鐵死亡基因和955個(gè)冠心病基因取交集,最終得到161個(gè)“鐵死亡-冠心病”交集基因(見圖1)。利用Cytoscape 3.8.2軟件制作“鐵死亡-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)圖(見圖2)，結(jié)果顯示共有153個(gè)節(jié)點(diǎn)，1587條邊，顏色越深的節(jié)點(diǎn)代表Degree值越高，互作關(guān)系越強(qiáng)。通過“Cytohub”插件篩選得到Degree值排名前20的基因?yàn)椤拌F死亡-冠心病”關(guān)鍵基因靶點(diǎn)(見表1)。

圖1 “鐵死亡-冠心病”交集基因韋恩圖

圖2 “鐵死亡-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表1 “鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因

2.3 GO功能和KEGG通路富集分析 GO功能富集分析共獲得201個(gè)搜索結(jié)果，其中生物過程(BP)有68個(gè)結(jié)果，主要涉及化學(xué)應(yīng)激、活性氧化物的代謝過程、細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)、氧化水平的反映、多細(xì)胞有機(jī)體的形成、超氧化物的代謝、炎癥反應(yīng)；細(xì)胞組分(CC)有53個(gè)結(jié)果，主要涉及氧化酶復(fù)合物、次生溶酶體、轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物、內(nèi)分泌囊泡、細(xì)胞膜筏；分子功能(MF)有80個(gè)結(jié)果，主要涉及氧化酶活性、蛋白質(zhì)韌帶結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子綁定、鐵離子結(jié)合、p53綁定、線粒體蛋白激酶結(jié)合。按照P值由大到小排序，對(duì)排名前20的結(jié)果制作氣泡圖進(jìn)行展示(見圖3)。KEGG通路富集分析共得到40條通路，主要涉及流體剪應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路、自噬相關(guān)通路、鐵死亡通路、叉頭轉(zhuǎn)錄因子O亞族(FoxO)信號(hào)通路、自噬-動(dòng)物信號(hào)通路、晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE) -晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)信號(hào)通路，提示鐵死亡可能通過這些通路影響冠心病的發(fā)展。按基因富集的數(shù)量由大到小排序，對(duì)排名前13的通路制作柱狀圖進(jìn)行展示(見圖4)。

圖3 GO功能富集分析氣泡圖

續(xù)圖3 GO功能富集分析氣泡圖

圖4 KEGG通絡(luò)富集分析柱狀圖

2.4 含有“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因的關(guān)鍵中藥獲取 將2.2項(xiàng)獲得的20個(gè)“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因靶點(diǎn)分別導(dǎo)入U(xiǎn)niProt數(shù)據(jù)庫(kù)，轉(zhuǎn)換成基因全稱后結(jié)果導(dǎo)入TCMSP平臺(tái)，發(fā)現(xiàn)有5個(gè)基因未篩選到相關(guān)中藥，最終有15個(gè)“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因共得到498種中藥。通過分析發(fā)現(xiàn)，不同基因所相關(guān)的中藥數(shù)量是不同的(見圖5)。同時(shí)根據(jù)Excel數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，包含10種及以上關(guān)鍵基因的中藥共有7味，分別為麻黃、芫荽、余甘子、黃芩、丹參、青蒿、葛根，其中青蒿、葛根所包含的基因數(shù)最少，為13種，麻黃、芫荽、余甘子、黃芩、丹參均為14種(見圖6)，沒有得到包含所有關(guān)鍵基因的中藥。其余的中藥因包含的關(guān)鍵基因數(shù)量過少，故排除。

圖5 15個(gè)“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因所含中藥數(shù)

圖6 含“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因最多的前7味中藥

2.5 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及“中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 選取中藥麻黃、芫荽、余甘子、黃芩、丹參、青蒿、葛根通過TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選得到62種活性成分和356個(gè)靶點(diǎn)。將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件構(gòu)建“中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)(見圖7)，共有361個(gè)節(jié)點(diǎn)，1731條邊，顏色越深、節(jié)點(diǎn)越大、透明度越高的節(jié)點(diǎn)Degree值越高。將356個(gè)中藥靶點(diǎn)基因與955個(gè)冠心病疾病基因取交集，得到129個(gè)交集基因。將129個(gè)交集基因?qū)隨TRING平臺(tái)，并利用Cytoscape 3.8.2軟件構(gòu)建“中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)(見圖8)。通過“Cytohub”插件分析Degree值排名前10的基因?yàn)椤爸兴?冠心病”核心基因靶點(diǎn)(見表2)。

圖7 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

圖8 “中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表2 “中藥-冠心病”核心基因靶點(diǎn)

2.6 中藥調(diào)控冠心病相關(guān)鐵死亡關(guān)鍵基因的獲取 將2.2項(xiàng)篩選得到的20個(gè)“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因與2.5項(xiàng)篩選得到的10個(gè)“中藥-冠心病”核心基因取交集，最終獲得8個(gè)交集基因靶點(diǎn)(見圖9)，即TP53、MAPK1、MAPK8、Jun、IL-6、STAT3、VEGFA、MAPK3。其中Jun是轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物激活蛋白-1(AP-1)的主要成分，主要參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡，以及人類不同的腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖[10]，由于缺乏實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)，故排除。同時(shí)，文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，PTGS2與鐵死亡和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性較強(qiáng)[11]，可作為關(guān)鍵基因靶點(diǎn)。這些基因靶點(diǎn)既是鐵死亡在冠心病中的關(guān)鍵位點(diǎn)，也是中藥調(diào)控鐵死亡的關(guān)鍵靶點(diǎn)，是本研究分析得到的中藥調(diào)控冠心病發(fā)展的鐵死亡關(guān)鍵基因。

圖9 “鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因

3 討論

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的冠心病，特別是急性冠狀動(dòng)脈綜合征，是威脅人類生命，造成全球死亡率升高的主要原因之一[12]。鐵死亡是導(dǎo)致多種疾病發(fā)生發(fā)展的新的病理機(jī)制。目前已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)，鐵死亡在抗癌藥物的研發(fā)、帕金森的治療、肺部疾病、急性腎損傷中具有重要作用[13-17]，但在冠心病發(fā)展中的作用尚缺乏相關(guān)研究，特別是在斑塊的形成、破裂及管腔狹窄方面。

本研究通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)搜索、PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，篩選出鐵死亡在冠心病中的關(guān)鍵基因靶點(diǎn)，通過GO和KEGG分析顯示鐵死亡基因在冠心病的發(fā)展中主要參與氧化反應(yīng)、炎性反應(yīng)及細(xì)胞的代謝過程，這可能與鐵死亡脂質(zhì)過氧化的發(fā)生機(jī)制有關(guān)。Su L J等[18]研究顯示，脂質(zhì)過氧化介質(zhì)會(huì)促進(jìn)細(xì)胞釋放高遷移率族蛋白B1(HMGB1)而誘導(dǎo)炎性反應(yīng)，在用亞硝酸鈉(谷胱甘肽過氧化物酶4激活劑)后，小鼠的炎癥因子IL-1、IL-6水平顯著降低，說明鐵死亡可能是炎癥的起始因素，具有促炎作用。KEGG通路富集分析顯示，排名前3名的通路為流體剪應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路、自噬相關(guān)通路及鐵死亡通路。流體剪應(yīng)力是血流在血管內(nèi)流動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的摩擦力，與血流速度有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，正常范圍內(nèi)的血流速度會(huì)抑制炎癥信號(hào)，激活、穩(wěn)定血管的通路，而高于或低于正常的血流速度則會(huì)誘導(dǎo)炎癥信號(hào)，抑制穩(wěn)定血管的通路[19]。血流紊亂也會(huì)通過增加纖維連接蛋白激活氧化的低密度脂蛋白，抑制一氧化氮合酶(eNOS)的激活和一氧化氮(NO)的產(chǎn)生而影響血流狀態(tài)，誘導(dǎo)內(nèi)皮功能障礙，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化[20]。鐵死亡在血流動(dòng)力學(xué)改變的情況下或許參與了這一過程。自噬和鐵死亡作為不同類型的細(xì)胞死亡形式，具有密切聯(lián)系，許多鐵死亡調(diào)控因子如腫瘤抑制因子p53、熱休克蛋白B1(HSPB1)、重組蛋白因子CDGSH鐵硫結(jié)構(gòu)域1(CISD1)、長(zhǎng)鏈酯酰輔酶A合成酶4(ACSL4)已被證實(shí)為自噬的潛在調(diào)控因子[21]。Kang R等[22]發(fā)現(xiàn)，自噬條件下，F(xiàn)e2+會(huì)在溶酶體內(nèi)降解，隨著Fe2+的減少，F(xiàn)e3+鐵增多，進(jìn)而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生，而氧化應(yīng)激損傷同樣是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的病理因素。

在獲得Degree值排名前20的“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因后，通過頻數(shù)分析得到了與“鐵死亡-冠心病”關(guān)鍵基因關(guān)聯(lián)最密切的7味中藥，分別為麻黃、黃芩、芫荽、余甘子、丹參、青蒿、葛根。其中丹參活血化瘀，祛瘀生新；黃芩清熱燥濕，瀉火解毒；葛根清熱降火，生津止渴；青蒿清濕熱，退虛熱；麻黃發(fā)汗解表，宣肺平喘，利水消腫；芫荽發(fā)汗透疹，消食下氣，醒脾和中；余甘子清熱涼血，消食健脾，生津止渴?，F(xiàn)代藥理研究顯示，丹參的主要成分丹參素具有抗炎、抗血小板聚集、抗冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌能量代謝的作用[23]，已廣泛應(yīng)用于臨床，如中成藥復(fù)方丹參滴丸的主要成分即為丹參素，其聯(lián)合氯吡格雷片抗血小板聚集的效果明顯優(yōu)于單用復(fù)方丹參滴丸或氯吡格雷片[24]。Zhang Y等[25]研究發(fā)現(xiàn)，丹參素可以調(diào)控谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)，通過增強(qiáng)GSH-Px的活性來減輕氧化應(yīng)激損傷，抑制細(xì)胞鐵死亡。黃芩的主要成分為黃芩苷，也稱黃芩素，能通過抑制活性氧(ROS)發(fā)揮抗氧化作用，進(jìn)而抑制鐵死亡[26]。葛根的主要成分為葛根素[27]，具有抗炎、抗氧化、改善心肌能量代謝的作用，還能通過上調(diào)熱休克蛋白72(HSP72)因子的表達(dá)來減緩細(xì)胞脂質(zhì)過氧化和鐵過載[28]。青蒿的主要成分青蒿素具有抗炎、抗腫瘤、抗心律失常的作用[29]，目前青蒿素通常用于鐵死亡的誘導(dǎo)劑參與腫瘤藥物的研發(fā)[30]。麻黃、芫荽、余甘子在鐵死亡和心血管病領(lǐng)域的研究較少，其中芫荽為傘狀科植物芫荽的全草和果實(shí)，又名胡荽，有研究顯示，其主要成分具有抗氧化的作用[31]，可能通過這一機(jī)制抑制細(xì)胞鐵死亡。

通過多次取交集及文獻(xiàn)檢索，最終得到了中藥調(diào)控冠心病相關(guān)鐵死亡的8個(gè)關(guān)鍵基因，分別為TP53、PTGS2、IL-6、STAT3、VEGFA、MAPK1、MAPK3、MAPK8。Tarangelo A等[32]通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 腫瘤抑制因子TP53可以增強(qiáng)GSH的活性，減少ROS的產(chǎn)生和能量消耗，抑制細(xì)胞鐵死亡。Kolovou V等[33]研究顯示，TP53基因頻率越低，發(fā)生冠狀動(dòng)脈疾病和心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)性越高。說明TP53不僅在腫瘤疾病中發(fā)揮作用，對(duì)冠心病的發(fā)展同樣具有影響。最新研究發(fā)現(xiàn)，PTGS2在冠心病的發(fā)展過程中表達(dá)上調(diào)，是鐵死亡在冠心病發(fā)展中的樞紐基因[33]。IL-6、STAT3作為炎癥相關(guān)因子，參與炎性反應(yīng)，而炎性反應(yīng)產(chǎn)生炎癥介質(zhì)是冠狀動(dòng)脈硬化斑塊早期形成的病理因素之一[34]。VEGFA表達(dá)降低是導(dǎo)致血管內(nèi)皮障礙的關(guān)鍵因素，這可能與miR-451的調(diào)控有關(guān)[35]。MAPK1、MAPK3、MAPK8都屬于絲裂原活化蛋白激酶家族分子，可以通過激活ROS參與細(xì)胞增殖、分化、死亡等多個(gè)細(xì)胞過程。Chang W T等[36]發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞鐵死亡同樣可以通過MAPK激活ROS參與細(xì)胞過程。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和數(shù)據(jù)分析的方法構(gòu)建“鐵死亡-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)及“中藥-冠心病”PPI網(wǎng)絡(luò)，篩選分析出“中藥-冠心病-鐵死亡”三者共同的相關(guān)基因。結(jié)果顯示，麻黃、芫荽、余甘子、黃芩、丹參、青蒿、葛根可能通過調(diào)控細(xì)胞鐵死亡的途徑參與治療冠心病,具體藥理機(jī)制需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。TP53、PTGS2、IL-6、STAT3、VEGFA、MAPK1、MAPK3、MAPK8是本研究得出的中藥從鐵死亡途徑調(diào)控冠心病的關(guān)鍵基因，這些基因可能是中藥在治療冠心病過程中的重要作用靶點(diǎn)，也可能是參與調(diào)節(jié)、傳導(dǎo)等，但其具體的通過何種通路治療冠心病有待在后續(xù)的研究中驗(yàn)證。