龍一飛，肖英倫，鄂順梅，張宏遠(yuǎn)，陳茶，林冬玲(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 廣東省中醫(yī)院檢驗科，廣州 510006)

目前市場上主流品牌血細(xì)胞分析儀的體液模式在檢測腦脊液、漿膜腔積液等體液標(biāo)本時，有核細(xì)胞和紅細(xì)胞檢測結(jié)果具有重復(fù)性好、線性范圍寬、操作簡單方便等優(yōu)點(diǎn)，能有效避免手工計數(shù)結(jié)果重復(fù)性差、操作繁瑣、耗時長等不足[1]。因此，腦脊液標(biāo)本的自動化檢測逐漸普及。但不同品牌或同一品牌不同型號血細(xì)胞分析儀的體液模式往往存在儀器間的系統(tǒng)誤差，易導(dǎo)致實驗室內(nèi)部結(jié)果不可比。目前體液檢測模式下血細(xì)胞分析儀系統(tǒng)間的對比研究較少。因此，比較不同品牌自動化檢測系統(tǒng)體液檢測模式間結(jié)果的重復(fù)性、一致性以及可比性很有必要。本研究主要參照CLSI EP9-A3文件，對BC-6000Plus和Sysmex XN-1000系統(tǒng)的體液模式下體液總有核細(xì)胞計數(shù)(TC-BF)、體液白細(xì)胞計數(shù)(WBC-BF)、體液紅細(xì)胞計數(shù)(RBC-BF)、單個核細(xì)胞計數(shù)(MN)、多個核細(xì)胞計數(shù)(PMN)檢測結(jié)果進(jìn)行方法間比較和偏移評估。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本收集 收集2021年7月廣東省中醫(yī)院大學(xué)城醫(yī)院檢驗科新鮮腦脊液標(biāo)本40份。所有腦脊液標(biāo)本采集與送檢均符合WS/T 662—2020《臨床體液檢驗技術(shù)要求》[2]，細(xì)胞計數(shù)均在2個檢測系統(tǒng)線性范圍內(nèi)并均勻分布。本研究方案經(jīng)廣東省中醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號：ZE2021-202-01)。

1.2主要儀器與試劑 BC-6000Plus全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑(深圳邁瑞公司)；XN-1000全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑(日本Sysmex公司)。上述檢測系統(tǒng)體液模式的檢測范圍為：WBC-BF，0～10 000×106/L；RBC-BF，0～5 000×109/L。檢測下限為：WBC-BF，4×106/L；RBC-BF，4×109/L。

1.3重復(fù)性 取高值與低值濃度水平的新鮮腦脊液標(biāo)本作為重復(fù)性驗證標(biāo)本，經(jīng)手工計數(shù)復(fù)核，高濃度水平WBC-BF為81×106/L，RBC-BF為49.3×109/L；低濃度水平WBC-BF為24×106/L，RBC-BF為9.4×109/L。標(biāo)本經(jīng)充分混勻后，分別用2個品牌檢測系統(tǒng)按常規(guī)方法連續(xù)重復(fù)檢測11次，選取后10次檢測結(jié)果，分別計算2個儀器TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN的變異系數(shù)(CV)，以科室設(shè)定的質(zhì)量目標(biāo)作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.4結(jié)果可比性與一致性分析 參照本實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，分別用2個檢測系統(tǒng)的體液模式檢測40份腦脊液標(biāo)本，并記錄2個檢測系統(tǒng)的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN結(jié)果。

1.4.1離群值檢查 按照EP9-A3文件以及文獻(xiàn)[3-4]要求，通過ESD(extreme studentized deviate)法檢驗離群值，如存在離群值標(biāo)本，則補(bǔ)充相應(yīng)濃度范圍的標(biāo)本重新測定并記錄。

1.4.2檢測系統(tǒng)間比對與偏移評估 繪制差值偏差圖，評估差值偏移類型；然后選用合適的普通線性回歸(ordinary linear regression，OLR)、加權(quán)最小二乘法(weighted least squares，WLS)、Deming、Passing-Bablok(P-B)模型擬合回歸方程，并計算各參數(shù)的95%置信區(qū)間(CI)和醫(yī)學(xué)決定水平處的偏移。

1.4.3一致性分析 采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)法評估2個檢測系統(tǒng)間結(jié)果的一致性。

2 結(jié)果

2.1重復(fù)性 見表1。2個品牌檢測系統(tǒng)TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN與PMN的高、低濃度水平標(biāo)本結(jié)果的重復(fù)性均在科室質(zhì)量目標(biāo)要求的允許范圍內(nèi)。

表1 兩品牌檢測系統(tǒng)體液模式檢測結(jié)果的重復(fù)性

2.22個品牌檢測系統(tǒng)間結(jié)果的可比性

2.2.1離群值檢驗結(jié)果 ESD法定量檢驗結(jié)果顯示，40個標(biāo)本檢測數(shù)據(jù)中，TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN分別有1、1、1、1、2個離群值；剔除離群值后，分別補(bǔ)充相似濃度的腦脊液標(biāo)本。數(shù)據(jù)經(jīng)再次分析，未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.2.2偏差圖分析2個品牌檢測系統(tǒng)間差值的變化特征 差值偏差圖顯示，2個品牌檢測系統(tǒng)TC-BF、WBC-BF的差值變化為恒定CV變化，采用WLS回歸分析；RBC-BF、MN、PMN的差值為混合變化，采用P-B回歸分析。

2.2.3偏移初步估算 繪制2個品牌檢測系統(tǒng)間差值頻數(shù)柱狀圖，結(jié)果顯示，TC-BF、WBC-BF、MN、PMN為正態(tài)分布，可利用差值平均數(shù)來估算偏移，各平均值分別為1.16%、0.52%、4.55%、-3.37%；RBC-BF為非正態(tài)分布，可利用中位數(shù)來估算偏移，其中位值為0%，所有參數(shù)偏移均小于質(zhì)量目標(biāo)值。

2.2.4回歸分析 TC-BF、WBC-BF采用WLS回歸分析，RBC-BF、MN、PMN采用P-B回歸分析，回歸方程及其各參數(shù)結(jié)果見表2，將各參數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平分別代入回歸方程，其偏移結(jié)果見表3。

表2 BC-6000Plus與XN-1000比對回歸方程及各參數(shù)結(jié)果

表3 BC-6000Plus與XN-1000比對回歸模型醫(yī)學(xué)決定水平處的偏移結(jié)果

2.3組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析 組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析顯示，2個品牌檢測系統(tǒng)的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN的組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)值(95%CI)分別為0.998(0.997～0.999)、0.998(0.997～0.999)、0.999(0.998～0.999)、0.995(0.991～0.997)、0.995(0.990～0.997)，P值均<0.001；表明2個儀器的體液檢測模式上述檢測參數(shù)的結(jié)果具有較好一致性。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，驗證BC-6000Plus與XN-1000檢測系統(tǒng)體液模式檢測高、低濃度標(biāo)本的重復(fù)性時，TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN檢測項目的CV均能滿足科室的質(zhì)量目標(biāo)要求。組內(nèi)相關(guān)系數(shù)一致性分析測量的是同一組內(nèi)觀察對象某定量測量結(jié)果的相似程度，ICC值越大則系統(tǒng)誤差與隨機(jī)誤差引起的變異越小[5]。ICC>0.80為良好，0.61～0.80為中等，0.41～0.60為一般，0.11～0.40為較低，小于0.1為無一致性，Landis和Koch建議結(jié)果一致性ICC值應(yīng)大于0.80[6]。本研究對BC-6000Plus與XN-1000檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測結(jié)果一致性分析，結(jié)果顯示2個檢測系統(tǒng)體液模式的TC-BF、WBC-BF、RBC-BF、MN、PMN參數(shù)結(jié)果具有較好一致性，上述參數(shù)的ICC值介于0.979～0.999(ICC值均大于0.900，P值均<0.001)，其中一致性最好的項目是RBC-BF(ICC值為0.999)。

本研究依據(jù)CLSI EP9-A3文件指南要求對2個品牌系統(tǒng)體液模式結(jié)果進(jìn)行比較分析。首先用ESD法排除數(shù)據(jù)的離群點(diǎn)，并補(bǔ)充對應(yīng)離群數(shù)據(jù)后再分析，在確保數(shù)據(jù)無離群值的前提下，進(jìn)一步分析2個系統(tǒng)間差值偏差圖與頻數(shù)柱狀圖，圖示TC-BF、WBC-BF、MN、PMN為正態(tài)分布，利用差值平均數(shù)來估算偏移；RBC-BF為非正態(tài)分布，利用中位數(shù)來估算偏移。經(jīng)估算，上述參數(shù)偏移均在質(zhì)量目標(biāo)允許范圍內(nèi)。然而這種偏移初步評估方法準(zhǔn)確性與適用性不高，因此須進(jìn)一步選用最佳的回歸模型進(jìn)行回歸方程分析。結(jié)果2個系統(tǒng)間5個參數(shù)的偏移分別為-1.397%～3.526%、-2.427%～3.279%、-3.840%～0.000%、0.290%～9.004%、-7.865%～0.880%，均在質(zhì)量目標(biāo)允許范圍內(nèi)。將TC-BF、WBC-BF、RBC-BF高、低水平濃度值分別代入回歸方程中，偏移也在質(zhì)量目標(biāo)允許范圍內(nèi)。

綜上所述，BC-6000Plus與XN-1000 2個品牌系統(tǒng)體液模式在檢測腦脊液標(biāo)本時，結(jié)果重復(fù)性均較好；系統(tǒng)間結(jié)果具有較強(qiáng)的一致性與可比性。值得注意的是，人工鏡檢仍然是腦脊液檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，不能被儀器自動化檢測完全替代。當(dāng)標(biāo)本細(xì)胞數(shù)低于檢出下限值或分類散點(diǎn)圖異常時(如異常腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞碎片或凝塊)，仍需要按照科室程序文件要求進(jìn)行人工鏡檢復(fù)檢。