唐鳳鸞， 梁英藝， 孫菲菲， 趙 健*

( 1. 廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院 廣西植物研究所, 廣西 桂林 541006； 2. 中共羅定市龍灣鎮(zhèn)委員會， 廣東 羅定 527235； 3. 桂林醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院， 廣西 桂林 541001 )

走馬胎()為紫金牛科紫金牛屬常綠灌木，具有祛風壯骨、活血化瘀、消腫止痛、止血生肌等功效，是壯、瑤、苗醫(yī)的常用藥，因為療效安全可靠被收入100種經(jīng)典壯藥，并在瑤醫(yī)理論體系“七十二風”中占有重要地位，民間常有“兩腳行不開，不離走馬胎”之說。走馬胎葉為西南地區(qū)民間傳統(tǒng)藥浴、足浴的保健原料，近年來被開發(fā)成代泡茶，并發(fā)現(xiàn)對老年人漏尿具有良好的治療效果。隨著對走馬胎葉片資源的不斷開發(fā)利用，其營養(yǎng)價值應(yīng)將逐漸得以重視。

我們在引種栽培中發(fā)現(xiàn)，走馬胎葉片外觀形態(tài)因植株種植年限不同存在較大差異，如1年生植株葉面積小，質(zhì)地薄，且上下表面呈暗紅色，2年生植株葉面積變大，葉色轉(zhuǎn)綠，生長3年及以上植株的葉大、厚，表面密布腺體。前人研究證明，葉片結(jié)構(gòu)建成是營養(yǎng)物質(zhì)及有效成分積累和變化的基礎(chǔ)，而植株生長年限是其重要影響因素(李雁群和吳鴻，2018)。如植株年齡可明顯影響鶴望蘭葉片中鉀、磷、硼、鐵、鋅等礦質(zhì)元素含量(黃敏玲等，2007)，2年生中國肉桂枝條較1年和4年生枝條葉片的油細胞密度大、數(shù)量多、揮發(fā)油含量高(Li et al., 2016)，50年生銀杏葉中總銀杏酸含量最高，25年生最低(姚鑫等，2012)。走馬胎葉片形態(tài)及栽培年限差異是否改變內(nèi)部代謝物質(zhì)的積累，進而影響療效或使用價值？

有關(guān)走馬胎的研究主要集中于根莖化學(xué)成分(Gong et al.，2010；婁方明等，2010；封聚強等，2011)、藥理作用(鄭小麗等，2013；Mu et al，2013；谷永杰等，2014)，及種質(zhì)資源和組織培養(yǎng)(毛世忠等，2010；符運柳等，2017；魏蓉等，2018；唐鳳鸞等，2019)等方面,尚未見對其營養(yǎng)成分和食用價值的報道。因此,我們以不同栽培年限走馬胎植株的葉片為對象,對其開展營養(yǎng)成分研究,在此基礎(chǔ)上進一步評價栽培時間對走馬胎葉片營養(yǎng)成分的影響。研究結(jié)果旨在了解走馬胎葉片營養(yǎng)價值,為其開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2020年10月中旬在廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所的走馬胎栽培試驗地，選擇1～4年生，生長良好，無病蟲危害的走馬胎植株。從植株頂端往下，取當年生的完整功能葉片帶回實驗室，用純凈水沖洗干凈，無菌濾紙吸干表面水分后裝入自封袋，送廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心進行鮮樣檢測。

1.2 檢測方法

檢測依據(jù): 礦質(zhì)元素[鈣(Ca)、鎂(Mg)、磷(P)、鉀(K)、鈉(Na)、銅(Cu)、鐵(Fe)、錳(Mn)、鋅(Zn)]含量按照GB 5009.268—2016測定，硫含量按照JY/T 015—1996測定；維生素C、總糖(轉(zhuǎn)化糖，以葡萄糖計)、蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸含量分別按照GB 5009.86—2016、GB 5009.8—2016、GB 5009.5—2016、GB 5009.6—2016、GB 5009.124—2016測定；總黃酮(以無水蘆丁計)、總皂苷、總酚含量分別按照SN/T 4592—2016(《出口食品中總黃酮的測定》)、NY 318—1997附錄B(《人參制品》)、GB/T 8313—2018測定。

儀器設(shè)備：Optima 2000DV電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(美國Perkin Elmer公司)，ZEEEnit700原子吸收光譜儀(德國耶拿)，高效液相色譜系統(tǒng)(美國 Waters)，日立L-8900 型全自動氨基酸分析儀(日本 Hitachi 公司)，F(xiàn)OSS2300全自動定氮儀(瑞典Foss公司)，雙光束掃描紫外可見光分光光度計(美國熱電)，IRIS In-trepid等離子體發(fā)射光譜儀(美國熱電)，SA-10 原子熒光形態(tài)分析儀(北京吉天)，TU-1810 紫外可見光分光光度計(北京譜析) 等。

分析方法：Ca、Mg、P、K、Na、Cu、Fe、Mn、Zn等元素檢測采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-OES)，硫元素檢測采用感耦等離子體原子發(fā)射光譜方法；維生素C檢測采用2,6-二氯靛酚滴定法，總糖檢測采用酸水解-萊因-埃農(nóng)氏法，蛋白質(zhì)檢測采用凱氏定氮法，脂肪檢測采用索氏抽提法，氨基酸檢測采用氨基酸分析儀(茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀)測定；總黃酮、總皂苷和總酚檢測采用分光光度法測定。每個樣品測定3次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

實驗數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS 16.0軟件處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 走馬胎葉片礦質(zhì)營養(yǎng)元素

由表1可知，走馬胎葉片含有非常豐富的礦質(zhì)元素，其中常量元素含量最高為鉀(K，5 610～7 150 mg·kg)，其次為鈣(Ca，2 930～5 560 mg·kg)，最低為鈉(Na，6.37～30.30 mg·kg)；K、Na比為235∶1～380∶1。微量元素含量最高為鐵(Fe，27.4～788 mg·kg)，其次為錳(Mn，5.84～11.40 mg·kg)，最低為銅(Cu，1.68～2.90 mg·kg)。

栽培年限對走馬胎植株葉片礦質(zhì)元素含量影響總體表現(xiàn)為1年生最高，2年生最低；1年生植株P(guān)、Fe、Mn、Zn含量顯著高于2～4年生(<0.05)，其中Fe含量高達788 mg·kg；3年生Ca和4年生硫(S)含量顯著高于其他年限(<0.05)；1年和4年生植株鎂(Mg)含量差異不明顯(>0.05)，說明1年生走馬胎植株葉片具有更好的礦質(zhì)營養(yǎng)。

2.2 走馬胎葉片一般營養(yǎng)成分

由表2可知，走馬胎葉片維生素C(36.20～177.00 mg·100g)含量最高，其次為蛋白質(zhì)(2.25～2.90 g·100g)，脂肪最低僅0.70～1.20 g·100g，呈現(xiàn)高維生素C低脂肪特征，符合人們對健康食品的要求。

走馬胎葉片維生素C含量隨著栽培時間延長增加顯著(<0.05)，總糖含量變化無規(guī)律，蛋白質(zhì)和脂肪含量相對較穩(wěn)定。4年生植株的維生素C、總糖和蛋白質(zhì)含量最高，分別為117.00 mg·100g、3.16 g·100g、2.90 g·100g，說明4年生走馬胎植株葉片具有更好的有機營養(yǎng)。

2.3 走馬胎葉片氨基酸成分

由表3可知，不同栽培年限走馬胎葉片均能檢出15種相同的氨基酸，并包括賴氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸6種人體必需氨基酸。檢出的15種氨基酸中門冬氨酸和谷氨酸(>0.2 g·100g)含量最高，其次為脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸(>0.1 g·100g)，酪氨酸和組氨酸的含量較低(<0.1 g·100g)；必需氨基酸(EAA)和非必需氨基酸(NEAA)的占比分別為39.08%～41.38%(EAA/TAA)、58.62%～60.92%(NEAA/TAA)。

走馬胎葉片中各類氨基酸、總氨基酸和必需氨基酸含量總體以4年生最高，2年生最低，最高含量出現(xiàn)時間與一般營養(yǎng)分析結(jié)果類似，說明走馬胎栽培年限可明顯影響葉片有機物的合成和積累。

2.4 走馬胎葉片主要生理活性物質(zhì)

表4結(jié)果顯示，走馬胎葉片含有豐富的酚類(590.0～880.0 mg·100g)和皂苷類(281.2～367.9 mg·100g)物質(zhì)，黃酮類物質(zhì)含量較低(<50.0 mg·100g)。1～3年生植株葉片總酚含量隨栽培年限的延長下降顯著(<0.05)，但第4年又快速回升至最大值；總皂苷含量隨栽培年限延長逐漸下降，且1年生顯著高于2～4年(<0.05)。1年和4年生走馬胎植株葉片分別含有較高的皂苷類和酚類活性物質(zhì)，因此使用時應(yīng)根據(jù)需要進行選擇。

表 1 走馬胎葉片礦質(zhì)營養(yǎng)元素含量Table 1 Mineral nutrient element contents of Ardisia gigantifolia leaves

表 2 走馬胎葉片一般營養(yǎng)含量Table 2 General nutrient content of Ardisia gigantifolia leaves

3 討論與結(jié)論

3.1 走馬胎葉片礦質(zhì)營養(yǎng)分析

本研究發(fā)現(xiàn)走馬胎葉片含有豐富的礦質(zhì)營養(yǎng)，且大部分元素含量明顯高于普通水果、鮮茶葉和蔬菜(李云仙等，2016；李金貴等，2018；倪楊等，2020)。尤其是1年生植株Fe含量高達788 mg·kg，分別為豬肝、蛋黃、芝麻醬的3、11和1.5倍。走馬胎葉片K、Na元素比值達235∶1～380∶1，對照余慶小葉苦丁茶和梵凈山白茶的K、Na含量(楊天友等，2016；楊天友和楊傳東，2020),及高鉀低鈉型蔬菜的比值(豌豆276∶1，南瓜181∶1)，走馬胎具有高鉀低鈉型食材特征。現(xiàn)有研究表明食物中的Ca、Mg、S、P、K、Fe、Mn、Zn等元素是人體結(jié)構(gòu)組成、生長發(fā)育及各種生理活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，高鉀低鈉型食物能有效維持體內(nèi)酸堿平衡及血壓正常(何志廉，1988)?？梢?，走馬胎葉片不僅能為人體提供良好的礦質(zhì)營養(yǎng)，具有高鉀低鈉型健康食材的特征，并對保持血壓穩(wěn)定具有潛在價值。

栽培年限能顯著影響走馬胎植株葉片中的礦質(zhì)元素含量，結(jié)果與樹齡能明顯影響油茶、柚等多年生常綠樹種葉片礦質(zhì)元素含量相似(閆榮玲等，2016；雷靖等，2019)，原因可能是不同樹齡植株根系對某一元素的吸收能力及樹體對具體元素的需求差異所致(馮美利等，2012)。本研究結(jié)果還顯示，1年生走馬胎植株葉片礦質(zhì)元素含量普遍較高，2年生較低，說明1年生植株葉片具有更好的礦質(zhì)營養(yǎng)價值。結(jié)合不同栽培年限走馬胎葉片外觀形態(tài)變化分析，高含量的Fe和Mn等有色金屬元素含量差異可能是導(dǎo)致葉片顏色變化的原因之一，1年生植株葉片因Fe和Mn的含量較高而呈暗紅色，2年生含量最低而呈綠色，具體原因有待進一步研究。

3.2 走馬胎葉片一般營養(yǎng)分析

維生素C是維持人體正常代謝的重要物質(zhì)，參與多種生理活動，但人體自身不能合成， 必須從日常食物中獲取。蛋白質(zhì)作為組織和細胞的重要組成，是人體生命活動不可缺少的物質(zhì)。故維生素C和蛋白質(zhì)被作為果蔬品質(zhì)評價的主要指標。走馬胎植株葉片維生素C(36.2～177 mg·100g)和蛋白質(zhì)(2.25～2.90 g·100g)含量普遍高于葡萄、番茄、油麥菜、紅綠茶、生菜、大白菜、芹菜等日常果蔬和茶葉(丁素君和張會芬，2014；曲媛等，2014；王延華等，2020；童蘭艷等，2020)，其中4年生維生素C高達177 mg·100g，已超過沙棘(160 mg·100g)和紅辣椒(144 mg·100g)等高維生素C含量品種。走馬胎葉片脂肪總體保持較低水平，含量僅為0.70～1.2 g·100g，非常有利于人體健康，說明走馬胎葉片具有較高的食用價值。

表 3 走馬胎葉片氨基酸含量Table 3 Contents of amino acids of Ardisia gigantifolia leaves

表 4 走馬胎葉片主要活性物質(zhì)含量Table 4 Main active substance contents of Ardisia gigantifolia leaves

栽培年限對走馬胎葉片中維生素C和總糖含量的影響較大，蛋白質(zhì)和脂肪的影響相對較小，其中4年生維生素C、總糖和蛋白質(zhì)含量最高，1年生較低。葉片是植物進行光合作用的主要場所，葉片組織結(jié)構(gòu)直接影響其化合物的產(chǎn)生和積累。1年生走馬胎植株葉片小而薄，且葉色暗紅葉綠素含量較低，導(dǎo)致光合作用和儲藏能力較弱，因此，維生素和碳水化合物含量低；而4年生植株葉大而厚，并含大量腺體，結(jié)構(gòu)完整，光合作用和儲藏能力較強，因此維生素和碳水化合物含量高。

3.3 走馬胎葉片氨基酸分析

走馬胎葉片包含6種人體必需氨基酸，其中EAA/TAA比值為39.08%～41.38%，NEAA/TAA比值為58.62%～60.92%，與理想蛋白模式EAA/TAA=40%、EAA/NEAA=60%幾乎接近，說明不同生長年限走馬胎葉片氨基酸配比合理。走馬胎葉片氨基酸含量最高是門冬氨酸和谷氨酸，門冬氨酸在臨床上被廣泛用于肝炎、肝硬化、肝昏迷等肝病的治療，谷氨酸則為哺乳動物獲得凈氨基氮的主要氨基酸，能解除組織代謝過程中產(chǎn)生的氨毒害作用，并參與腦組織代謝(徐瑾等，2011)，可見走馬胎葉片中含量最高的兩種氨基酸均具有較好的藥用價值。

不同生長年限走馬胎植株葉片所含氨基酸種類相同，總含量則以4年生最高，2年生最低，說明走馬胎葉片氨基酸種類受栽培年限的影響較小，但含量受影響較大。與一般營養(yǎng)分析結(jié)果比較可知，4年生走馬胎具有更好的有機營養(yǎng)。

3.4 走馬胎葉片活性物質(zhì)分析

走馬胎葉片含有豐富的皂苷類和酚類物質(zhì)，前人研究表明，從走馬胎中分離提取的三萜皂苷類物質(zhì)對多種腫瘤細胞具有較強的抑制作用(穆麗華等，2011；谷永杰等，2014；陳超等，2015)，而巖白菜素衍生物(屬于酚類物質(zhì))具有較強的抗氧化作用(楊竹等，2008)，兩者是走馬胎的主要活性物質(zhì)。1年生走馬胎植株葉片總皂苷含量最高，4年生總酚含量最高，推測走馬胎幼年植株葉片可能具有更好的抗腫瘤活性物質(zhì)，成年植株葉片具有更好的抗炎活性物質(zhì)。

綜上所述，走馬胎葉片富含多種人體所需的營養(yǎng)成分和生理活性物質(zhì)，有較高的藥用和保健價值，具有深度開發(fā)利用的價值潛力。但因成分類型不同含量呈現(xiàn)較大的年限差異，總體表現(xiàn)為1年生植株葉片含有較高的礦質(zhì)元素和皂苷類物質(zhì)，4年生植株含有較高的有機營養(yǎng)、酚類物質(zhì)和氨基酸，2年生植株的大多數(shù)檢測指標均處于最低值，因此在生產(chǎn)中應(yīng)避免使用2年植株葉片，并根據(jù)需要選擇1年或4年生植株葉片或開發(fā)成不同產(chǎn)品。