文 雯 唐映紅， 伍 茗 李佳娜 龍 圓

（1.湖南文理學(xué)院/生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 常德 415000；2.湖南常德市人工智能與生物醫(yī)藥研究中心，湖南 常德 415000；3.湖南常德市農(nóng)業(yè)生物大分子研究中心，湖南 常德 415000）

多花蘭（Cymbidium floribundum）又稱蜜蜂蘭，是蘭科蘭屬的一種附生植物，是《瀕危野生動(dòng)植物種國際貿(mào)易公約》附錄二物種中的一員，是國家Ⅱ級(jí)保護(hù)野生植物。多花蘭葉革質(zhì)肥厚，具有光澤，花芽易分化，花朵多達(dá)40朵以上，色澤鮮艷，花期長，具有較高的觀賞價(jià)值。多花蘭具有藥用價(jià)值：其根可作為藥用，滋陰清肺，化痰止咳。多花蘭株型、花朵數(shù)及花色等方面均有豐富的變異，能耐高溫和低溫，《國際蘭花新品種名錄（New Orchid Hy-brids）》和國內(nèi)發(fā)現(xiàn)的蘭屬原生種的雜交利用情況顯示多花蘭雜種數(shù)量均排在前5名，其在新品種培育中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

目前，我國栽培的國蘭品種絕大多數(shù)都是由野生種類引種馴化而來。多花蘭的繁殖多以分株繁殖為主，繁殖速度較慢，且蘭科種子很小，內(nèi)含一些發(fā)育不完全的球形胚，無胚乳，自然狀態(tài)下很難萌發(fā)。因此，由于大量的野地采挖，造成多花蘭資源的巨大破壞和浪費(fèi)。自種子無菌萌發(fā)技術(shù)如建蘭（Cymbidium ensifolium）、蕙蘭（Cymbidium faberi）等獲得成功后，已建立起蝴蝶蘭（Phalaenopsis aphrodite）等的快繁體系，部分品種已達(dá)到產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)階段，大大帶動(dòng)整個(gè)蘭花的產(chǎn)業(yè)化。

本研究前期建立了野生多花蘭種子無菌萌發(fā)形成原球莖、原球莖增殖和出芽、芽生根的組織培養(yǎng)快繁體系，不僅保存了其種質(zhì)資源，而且獲得了大量的野生多花蘭組培苗。因此，本研究以該野生多花蘭組培苗為材料，研究不同營養(yǎng)液和不同基質(zhì)對(duì)組培苗馴化成活和生長的影響，旨在研究出簡易便于推廣的多花蘭組培苗馴化方案，為多花蘭種苗工廠化生產(chǎn)提供基礎(chǔ)，對(duì)多花蘭野生資源的保護(hù)和回歸、建立多花蘭無土農(nóng)業(yè)或發(fā)展多花蘭都市農(nóng)業(yè)均具有重要意義。

1.材料與方法

1.1 植物材料

試驗(yàn)材料為野生多花蘭組培苗。

1.2 不同營養(yǎng)液對(duì)多花蘭組培苗的馴化研究

當(dāng)多花蘭組培苗長至5-6 cm時(shí)，打開組培瓶瓶蓋，洗凈植株根部固體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接到13組不同營養(yǎng)液中進(jìn)行馴化（簡稱馴化苗1）。營養(yǎng)液分別為稀釋不同倍數(shù)的1/2MS（Murashige and Skoog）、1/4MS、1/8MS和花寶一號(hào)（Hyponex， HP），自來水為對(duì)照，將營養(yǎng)液EC值控制在2.0-3.5 mmhos·cm-1間，pH值在5.4-6.0，不含瓊脂和蔗糖。采用靜止式水培，即將組培苗插在泡沫盤的孔內(nèi)固定住植株，再將泡沫盤放入裝有營養(yǎng)液的水培箱中，使其漂浮在水培箱中，根浸在營養(yǎng)液中，每個(gè)處理組48株，重復(fù)2次。在75%蔭蔽處培養(yǎng)，溫度為20-26℃，平均每7 d更換1次營養(yǎng)液，若蒸騰作用過大則適當(dāng)加蒸餾水。培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計(jì)馴化成活率，成活率（%）=（成活植株數(shù)/總植株數(shù)）×100，每個(gè)處理組隨機(jī)抽取5株測(cè)量其根長和最長葉長表示株高。

1.3 不同基質(zhì)對(duì)多花蘭組培苗的馴化研究

當(dāng)多花蘭組培苗長至5-6 cm時(shí)，打開培養(yǎng)瓶瓶蓋，組培溫室內(nèi)培養(yǎng)3 d；再加水室溫室內(nèi)培養(yǎng)3 d；然后洗凈植株根部固體培養(yǎng)基，用500倍多菌靈消毒植株根部15 s備用（簡稱馴化苗2）。將馴化苗1和2移栽到6組不同基質(zhì)中培養(yǎng)，每組移栽48株，重復(fù)2次，移栽之后澆透水，在75%蔭蔽處培養(yǎng)，溫度為20-26℃。培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計(jì)成活率，成活率（%）=移栽成活株數(shù)/移栽總株數(shù)×100。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行方差分析，采用新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

2.結(jié)果與分析

2.1 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗成活的影響

方差分析結(jié)果顯示（表1），不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗成活的影響表現(xiàn)出極顯著差異。通過多重比較可以看出（表2），處理組2和處理組4馴化苗的成活率分別為98.96%和95.29%，顯著高于其他處理組；其次是處理組10的馴化苗成活率為85.46%，顯著高于其他處理組；處理組1的馴化苗成活率最低，為21.17%，且顯著低于對(duì)照組馴化苗的成活率39.71%。處理組2（圖1）和處理組4（圖2）馴化前隨機(jī)選取的5株組培苗培養(yǎng)60 d后全部成活，并且株高伸長，葉片深綠色，生長狀況良好。

圖1 1/2 MS（稀釋500倍）馴化前后苗生長情況（處理組2）

圖2 1/4 MS（稀釋50倍）馴化前后苗生長情況（處理組4）

表1 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗成活的方差分析

表2 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗成活與生長的影響（培養(yǎng)60 d）

11 HP 5000．23±0．11 de 0．39±0．27 ab 79．38±1．88 c 12 HP 10000．75±0．17 bc 0．18±0．40 b 57．92±0．42 e 13 water CK -0．07±0．09 e 0．04±0．12 b 39．71±0．71 f

同列不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），下同

2.2 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗根生長的影響

方差分析結(jié)果顯示（表3），不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗根生長的影響表現(xiàn)出極顯著差異。通過多重比較可以看出（表2），組培苗移栽入處理7營養(yǎng)液中培養(yǎng)60 d根平均伸長1.86 cm，顯著高于其他處理；處理5、處理9、處理10營養(yǎng)液中培養(yǎng)60 d后根平均伸長均約為1 cm；稀釋50倍的1/2MS營養(yǎng)液和自來水中苗的根沒有生長，根腐爛反而使根長減短。

表3 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗根生長的方差分析

馴化后所有處理組（除處理組1和13外）中苗的根均有伸長，但許多小根發(fā)生腐爛使根的數(shù)量均減少（圖3A，以處理組7為例作圖），馴化前淺綠色的根（圖3B）經(jīng)馴化后均變成深綠色或棕色根（圖3A）。

圖3 1/8 MS（稀釋50倍）馴化前后苗根生長情況（處理7）

2.3 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗生長的影響

方差分析結(jié)果顯示（表4），不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗生長的影響表現(xiàn)出顯著差異。通過多重比較可以看出（表2），馴化苗株高伸長較多的是處理組2（圖1）和處理組7（圖3），均伸長約0.9 cm；馴化苗株高幾乎沒有變化的是處理組1、9和13；所有處理組均有少量外側(cè)葉片黃化脫落，也有新葉片形成，中心葉片均有不同程度的伸長，所有葉片顏色由馴化前的淺綠色變成深綠色，葉片變得較馴化前硬（圖1）。

表4 不同營養(yǎng)液對(duì)馴化苗生長的方差分析

2.4 不同基質(zhì)對(duì)馴化苗成活的影響

將在稀釋500倍的1/2MS營養(yǎng)液中培養(yǎng)60 d的馴化苗1（圖4A），以及馴化苗2（圖4B）轉(zhuǎn)移到6組不同基質(zhì)中培養(yǎng)。方差分析結(jié)果顯示（表5），不同基質(zhì)對(duì)馴化苗成活的影響表現(xiàn)出極顯著差異，馴化苗1和2在不同基質(zhì)中的成活也表現(xiàn)出顯著差異。多重比較結(jié)果顯示（表6），馴化苗1和2移栽入基質(zhì)6（林下腐殖土：風(fēng)化石=3∶1， v/v）中培養(yǎng)60 d的成活率分別約為88%和99%，顯著高于其他基質(zhì)（基質(zhì)2除外）；整體來看，成活率較高的是含有腐殖土的基質(zhì)，顯著高于不含腐殖土的基質(zhì)；不同基質(zhì)中馴化苗1的成活率顯著高于馴化苗2。綜上所述，獲得的最優(yōu)多花蘭組培苗馴化基質(zhì)為林下腐殖土：風(fēng)化石=3∶1（v/v），在該基質(zhì)中培養(yǎng)60 d葉片明顯伸長，葉色翠綠，植株生長約1 cm（圖4C）。

表5 不同基質(zhì)對(duì)馴化苗成活的方差分析

表6 不同基質(zhì)對(duì)馴化苗成活的影響（培養(yǎng)60 d）

圖4 基質(zhì)6對(duì)多花蘭組培苗的馴化研究

3.討論

目前幾乎沒有采用營養(yǎng)液培養(yǎng)多花蘭相關(guān)的報(bào)道，其他蘭科植物多采用霍格蘭營養(yǎng)液配方、日本園試配方和楊少輝試驗(yàn)配方或改變?cè)睾康认鄳?yīng)改良的配方進(jìn)行水培，伍成厚等采用改良楊少輝試驗(yàn)配方培養(yǎng)100 d后的五唇蘭植株成活率為95.8%。本研究最優(yōu)營養(yǎng)液中（稀釋500倍的1/2MS營養(yǎng)液）培養(yǎng)60 d后的馴化苗成活率可達(dá)99%，苗增高0.91 cm，優(yōu)于周啟貴等采用的營養(yǎng)液培養(yǎng)春蘭的株高增量。本研究采用的稀釋50倍的1/8MS營養(yǎng)液可使馴化苗根伸長1.86 cm、苗增高0.92 cm，優(yōu)于其他蘭科研究所采用的營養(yǎng)液。本研究結(jié)果顯示兩種不同濃度的大量元素對(duì)馴化苗的成活和根的生長存在差異，但生長差異不顯著。若要獲得成活率高的馴化苗則采用稀釋500倍的1/2MS營養(yǎng)液，若要獲得根生長較多的馴化苗則采用稀釋50倍的1/8MS營養(yǎng)液。因此，本研究獲得的最適營養(yǎng)液是延用組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基，對(duì)提高組培苗馴化成活具有一定的作用，后期選擇經(jīng)稀釋500倍的1/2MS營養(yǎng)液馴化60 d的苗，移栽入基質(zhì)中繼續(xù)馴化培養(yǎng)，提高最終的田間移栽成活率。

本研究獲得的最優(yōu)多花蘭組培苗的馴化基質(zhì)為林下腐殖土：風(fēng)化石=3∶1（v/v），此基質(zhì)模擬野生多花蘭的生長環(huán)境，效果優(yōu)于其他無土基質(zhì)。馴化苗2在該基質(zhì)中培養(yǎng)60 d成活率達(dá)88%，但成活率都較低于已報(bào)到的其他蘭科植物，如碎火磚塊：腐質(zhì)土=1∶1（v/v）的基質(zhì)培養(yǎng)50 d后的成活率達(dá)90%，草炭：珍珠巖：火山石=3∶3∶4（v/v/v）基質(zhì)中培養(yǎng)60 d后成活率達(dá)到96%；本研究經(jīng)前期營養(yǎng)液馴化60 d后的馴化苗1，在該基質(zhì)中培養(yǎng)60 d成活率高達(dá)99%，優(yōu)于已報(bào)到的多花蘭或其他蘭科移栽成活率。本研究使用腐殖土基質(zhì)的成活率高于其他基質(zhì)的，可能是因?yàn)楦惩脸煞峙c野外的林下腐殖土成分接近。

4.結(jié)論

本研究不僅獲得了多花蘭組培苗成活率高達(dá)99%的營養(yǎng)液馴化方案，而且將經(jīng)該營養(yǎng)液培養(yǎng)60 d后的馴化苗轉(zhuǎn)移至基質(zhì)中培養(yǎng)60 d，成活率也高達(dá)99%。既可采用營養(yǎng)液單獨(dú)馴化，也可采用營養(yǎng)液結(jié)合基質(zhì)馴化，整個(gè)馴化過程可在2-4個(gè)月內(nèi)完成。該馴化方案簡易便于推廣，有利于多花蘭野生資源的保護(hù)和回歸，對(duì)建立多花蘭種苗工廠化、多花蘭無土農(nóng)業(yè)或發(fā)展多花蘭都市農(nóng)業(yè)均具有重要意義。