郭清云，胡福初，吳鳳芝，王祥和，范鴻雁，馮學(xué)杰，陳 哲

(海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶果樹(shù)研究所/海南省熱帶果樹(shù)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部?？跓釒Ч麡?shù)科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，?？冢?71100)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)是鑒定基因功能和分析分子機(jī)制的主要工具。然而，在基因轉(zhuǎn)錄水平研究中，模板cDNA 的質(zhì)量和數(shù)量、RNA質(zhì)量、cDNA合成效率、引物特異性和內(nèi)參基因穩(wěn)定性等因素都會(huì)影響RT-qPCR分析結(jié)果的準(zhǔn)確性[1]，其中以內(nèi)參基因穩(wěn)定性的影響最大。利用內(nèi)參基因?qū)δ康幕虮磉_(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn)，是確保定量結(jié)果準(zhǔn)確可信必不可少環(huán)節(jié)[2]。值得注意的是，由于試驗(yàn)品種、組織、發(fā)育時(shí)期及處理?xiàng)l件等因素不同，最佳的內(nèi)參基因也會(huì)有所不同[3-5]。李露雙等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在屏邊空竹不同組織器官(根、稈和葉)以及筍芽發(fā)育成筍的變化過(guò)程中，表達(dá)最穩(wěn)定的基因均不相同。李永平等[7]在篩選黃秋葵內(nèi)參基因時(shí)發(fā)現(xiàn)，6個(gè)候選內(nèi)參基因在不同組織、各發(fā)育階段及不同脅迫(低溫、高溫和干旱)下均有表達(dá)，但表達(dá)穩(wěn)定性不盡相同。因此，有必要依據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇最適的內(nèi)參基因。

榴蓮蜜Artocarpusinteger(Thunb.)Merr.，屬桑科木菠蘿屬熱帶特色果樹(shù)，我國(guó)主要在南方種植[8]，目前海南省實(shí)現(xiàn)了規(guī)?；N植。榴蓮蜜果肉柔軟芬芳，營(yíng)養(yǎng)豐富，素有“水果皇后”之美譽(yù)[9]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于榴蓮蜜的研究尚處于起步階段，主要集中于引種試種[8]、品種選育[10]、快繁技術(shù)[11]、栽培管理[9，12]、果實(shí)品質(zhì)和風(fēng)味[13]、以及功能性成分[14]等基礎(chǔ)性研究上，隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)榴蓮蜜研究的不斷關(guān)注，基因表達(dá)相關(guān)等分子生物學(xué)研究會(huì)逐漸成為重點(diǎn)內(nèi)容。至今鮮見(jiàn)關(guān)于菠蘿蜜屬植物內(nèi)參基因評(píng)價(jià)的研究。汪永保等[15]研究了5個(gè)內(nèi)參基因在菠蘿蜜各個(gè)組織不同發(fā)育階段的表達(dá)情況，分別在果實(shí)、嫩葉和花序中找到表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參組合。篩選榴蓮蜜內(nèi)參基因?qū)ωS富其內(nèi)參基因及解析相關(guān)基因功能研究具有重要意義。我們根據(jù)獲得的榴蓮蜜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)(未發(fā)表)，篩選并克隆獲得Actin1等5個(gè)傳統(tǒng)內(nèi)參基因，以“多異1號(hào)”榴蓮蜜不同組織及不同發(fā)育時(shí)期果苞為材料，利用4種主流軟件(GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder)評(píng)價(jià)5個(gè)內(nèi)參基因穩(wěn)定性，并驗(yàn)證內(nèi)參基因的穩(wěn)定性，旨在篩選適用于榴蓮蜜不同組織和不同發(fā)育時(shí)期果苞穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因，為進(jìn)一步研究榴蓮蜜基因表達(dá)調(diào)控分子機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

“多異1號(hào)”榴蓮蜜種植于海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院永發(fā)果樹(shù)科研創(chuàng)新基地榴蓮蜜種質(zhì)資源圃內(nèi)，東經(jīng)109°5′～110°15′，北緯19°23′～20°01′。選擇樹(shù)齡相同、長(zhǎng)勢(shì)相當(dāng)?shù)?株樹(shù)，每株樹(shù)分別采集花序、嫩葉和莖組織，以及3個(gè)發(fā)育階段果實(shí)，即幼果(花后40 d)、小果(花后80 d)和大果(花后120 d)果肉，樣品采集后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 總RNA提取和cDNA合成 采用植物RNA提取試劑盒(北京華越洋生物科技有限公司產(chǎn))提取樣品總RNA，用核酸蛋白儀檢測(cè)總RNA純度，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA降解程度。參照MonAmpTM2×Taq Mix(+Dye)試劑盒(莫納生物科技有限公司產(chǎn))說(shuō)明書(shū)，每個(gè)樣品取總RNA 600 ng進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，合成cDNA第一鏈。

1.2.2 引物設(shè)計(jì) 選取擬南芥常用的5個(gè)內(nèi)參基因，即Actin，AT3G46520；GAPDH，AT1G13440；α-TUB，AT5G19770；β-TUB，AT5G23860；UBQ，AT1G55060，利用本地BLAST在榴蓮蜜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選比對(duì)出候選榴蓮蜜內(nèi)參基因序列10個(gè)，分別命名為Actin1、Actin2、GAPDH1、GAPDH2、α-TUB1、α-TUB2、β-TUB1、β-TUB2、UBQ1和UBQ2。利用Oligo 7軟件分別設(shè)計(jì)各個(gè)內(nèi)參基因的克隆引物(見(jiàn)表1)，以合成的cDNA第一鏈為模板，采用Phanta Max Supper-Fidelity DNA Polymerase高保真酶(南京諾唯贊生物科技股份有限公司產(chǎn))進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)純化、回收后連接至pTOPO-Blunt平末端克隆載體，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞(上海唯地生物技術(shù)有限公司產(chǎn))，經(jīng)篩選陽(yáng)性克隆后送天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司(廣州)測(cè)序。參照RT-qPCR 引物設(shè)計(jì)原則，根據(jù)克隆獲得內(nèi)參基因序列，利用Oligo 7軟件設(shè)計(jì)qPCR反應(yīng)引物(見(jiàn)表2)，并委托天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司(廣州)合成。

表1 榴蓮蜜內(nèi)參基因的克隆引物

1.2.3 半定量PCR 使用MonAmpTM2×Taq Mix(+Dye)，于PCR儀(型號(hào)BIO-RAD T100tm)進(jìn)行反應(yīng)。配制20 μL反應(yīng)體系，其中，MonAmpTM2×Taq Mix(+Dye)10 μL，cDNA 0.5 μL，上下游引物各0.5 μL(10 μmol/L)，ddH2O 8.5 μL。反應(yīng)程序?yàn)?4 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，32個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min；保存于4 ℃。取PCR產(chǎn)物5 μL進(jìn)行凝膠電泳檢查。

1.2.4 RT-qPCR分析及引物擴(kuò)增效率 配制10 μL反應(yīng)體系：2 ×Phanta Mix Master Mix 5 μL，cDNA 1 μL(稀釋2倍)，上下游引物各0.5 μL(10 μmol/L)，ddH2O 3 μL，每個(gè)反應(yīng)設(shè)置3次重復(fù)。在熒光定量PCR儀(型號(hào)LightCycler 480 Ⅱ)上設(shè)置反應(yīng)程序：95 ℃ 5 min；95 ℃ 15 s，56 ℃ 15 s，72 ℃ 35 s，40個(gè)循環(huán)；之后進(jìn)行65～97 ℃熔解曲線分析。每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)，取等量樣品的cDNA模板混合，然后按1∶10梯度稀釋為6個(gè)濃度后進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)。根據(jù)Ct值建立線性回歸方程，最后求得擴(kuò)增效率E(E=10-1/K-1，K為斜率)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析 利用geNorm[16]、NormFinder[17]和BestKeeper[18]評(píng)價(jià)5個(gè)內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性，最后通過(guò)RefFinder[19]在線工具(https：//heartcure.com.au/reffinder/)綜合評(píng)價(jià)內(nèi)參基因的穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 總RNA提取

由圖1可知，提取的總RNA條帶清晰，28s RNA的亮度約為18s RNA亮度的2倍，所有待測(cè)樣品RNA濃度70～870 ng/μL，A260/A280值在1.8～2.0之間，A260/A230均大于2.0。說(shuō)明提取的RNA無(wú)明顯降解，且純度較高。

注：M為DL2000 DNA Maker，1～3為花序，4～6為嫩葉，7～9為莖，10～12為幼果，13～15為小果，16～18為大果。

2.2 內(nèi)參基因RT-qPCR引物評(píng)價(jià)

從10個(gè)內(nèi)參同源基因(Actin1、Actin2、α-TUB1、α-TUB2、β-TUB1、β-TUB2、GAPDH1、GAPDH2、UBQ1和UBQ2)中成功克隆出5個(gè)內(nèi)參基因，分別為Actin1、α-TUB1、β-TUB1、β-TUB2和GAPDH1。測(cè)序驗(yàn)證表明，克隆的5個(gè)內(nèi)參基因片段均與榴蓮蜜轉(zhuǎn)錄組序列高度同源，5對(duì)引物的擴(kuò)增效率介于94.1%～119.0%，R2值介于0.993 0～0.998 9。以榴蓮蜜花序cDNA為模板，對(duì)克隆出的內(nèi)參基因進(jìn)行半定量PCR擴(kuò)增。電泳結(jié)果顯示，產(chǎn)物只有單一的條帶，且條帶大小與目標(biāo)片段一致，長(zhǎng)度138～186 bp(見(jiàn)圖2和表2)。另外5個(gè)內(nèi)參基因引物的RT-qPCR 熔解曲線均為單一信號(hào)峰(見(jiàn)圖3和圖4)。表明本研究所用的定量引物的特異性良好。

注：M為DL2000 DNA Maker，1～5分別為GAPDH1、α-TUB1、β-TUB2、Actin1、β-TUB1。

表2 榴蓮蜜定量引物信息、擴(kuò)增效率及相關(guān)系數(shù)

圖3 榴蓮蜜4個(gè)內(nèi)參基因的熔解曲線

圖4 榴蓮蜜1個(gè)內(nèi)參基因的熔解曲線

2.3 內(nèi)參基因轉(zhuǎn)錄水平分析

由表3可知，5個(gè)內(nèi)參基因在不同組織中的平均Ct值在23.64～27.92之間，波動(dòng)范圍較大。同一組織中5個(gè)內(nèi)參基因的Ct值存在顯著性差異，說(shuō)明所選擇的內(nèi)參基因在不同組織中表達(dá)水平不同。Ct值與基因的表達(dá)豐度成反比，因此，GAPDH1的Ct值21.00～26.54，較低，表達(dá)量最高；而Actin1的Ct值26.16～29.8，較高，其表達(dá)量最低，顯著低于其他內(nèi)參基因。5個(gè)內(nèi)參基因的變異系數(shù)從低到高依次為β-TUB2<α-TUB1

表3 榴蓮蜜不同組織內(nèi)參基因表達(dá)情況

2.4 內(nèi)參基因穩(wěn)定性評(píng)價(jià)

由表4可知，運(yùn)用geNorm分析，所有樣品中Actin1和α-TUB1的表達(dá)最穩(wěn)定，GAPDH1的穩(wěn)定性最差。不同組織(花序、莖和嫩葉)中，同樣也是Actin1和α-TUB1的表達(dá)最穩(wěn)定，而β-TUB1的穩(wěn)定性最差。由于Actin1在所有組織中的表達(dá)量均最低，說(shuō)明Actin1作為內(nèi)參基因不可行。在果苞發(fā)育的不同時(shí)期，α-TUB1和β-TUB1的表達(dá)最穩(wěn)定，GAPDH1的穩(wěn)定性最差。由圖5可看出，在不同組織、果苞發(fā)育不同時(shí)期中，V2/V3、V3/V4 和V4/V5值均低于默認(rèn)值0.15，表明選用2個(gè)內(nèi)參基因即可使試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，無(wú)需引入其他內(nèi)參基因。

表4 不同軟件分析的榴蓮蜜內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性和RefFinder進(jìn)行綜合比較

圖5 基于geNorm的內(nèi)參基因穩(wěn)定性分析及配對(duì)差異分析

運(yùn)用NormFinde軟件分析，所有樣品中，β-TUB1和β-TUB2的穩(wěn)定性較好，GAPDH1的穩(wěn)定性最差；不同組織中，β-TUB2的穩(wěn)定性最好，β-TUB1的穩(wěn)定最差；在果苞不同發(fā)育時(shí)期，α-TUB1和β-TUB1的穩(wěn)定性較好，GAPDH1的穩(wěn)定性最差。

運(yùn)用BestKeeper軟件分析，α-TUB1和β-TUB2在所有樣品及不同組織中穩(wěn)定性均較好，GAPDH1的穩(wěn)定性最差。然而，果苞發(fā)育不同時(shí)期中GAPDH1穩(wěn)定性最好。

由于geNorm、NormFinde和BestKeeper分析得出的基因穩(wěn)定性不同，所以采用RefFinder對(duì)這3種軟件結(jié)果進(jìn)行綜合排名看出，在不同組織中，β-TUB2和α-TUB1排前，穩(wěn)定性較好；在果苞不同發(fā)育時(shí)期，β-TUB1和α-TUB1的穩(wěn)定性較好；所有樣品中，β-TUB2和α-TUB1的穩(wěn)定性較好。

綜合來(lái)看，α-TUB1在榴蓮蜜不同組織中均較穩(wěn)定，在榴蓮蜜果苞發(fā)育過(guò)程中，可選擇β-TUB1和α-TUB1作共同內(nèi)參基因。

2.5 內(nèi)參基因穩(wěn)定性驗(yàn)證

以穩(wěn)定性較好的α-TUB1、α-TUB1+β-TUB1及α-TUB1+β-TUB2分別作為內(nèi)參基因，分析成花基因(TEM1和SPA1)以及蔗糖合成酶基因(SUS1、SUS2、SUS3和SUS4)分別在不同樣本中的表達(dá)情況。由圖5可知，2個(gè)成花基因和4個(gè)SUS基因各自在不同內(nèi)參基因標(biāo)定下的表達(dá)趨勢(shì)基本一致。以α-TUB1和α-TUB1+β-TUB2作內(nèi)參基因，TEM1在嫩葉和莖中的相對(duì)表達(dá)量最低，在果苞發(fā)育階段最高，而SPA1的表達(dá)模式正好與之相反。這與TEM1及SPA1分別在開(kāi)花時(shí)間調(diào)控位點(diǎn)的作用基本吻合。在α-TUB1+β-TUB1標(biāo)定下，嫩葉中TEM1的相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)，而果苞發(fā)育階段中TEM1的相對(duì)表達(dá)量變化規(guī)律與以α-TUB1以及α-TUB1+β-TUB2標(biāo)定下的相似，這種差異與RifFinder綜合評(píng)價(jià)結(jié)果相符，說(shuō)明α-TUB1+β-TUB1更適合在果苞階段作為內(nèi)參基因。SUS1、SUS2和SUS3表達(dá)量均在嫩葉中顯著下調(diào)。與其余3個(gè)SUS不同，SUS4在嫩葉中的表達(dá)量較高。另外，隨著果苞發(fā)育成熟，SUS4的表達(dá)量逐漸降低，而SUS1、SUS2和SUS3呈先增加后降低的趨勢(shì)。這說(shuō)明4個(gè)SUS基因的表達(dá)部位與表達(dá)時(shí)間存在差異。

注：A和D以α-TUB1為內(nèi)參基因，B和E以α-TUB1+β-TUB1為內(nèi)參基因，C和F以α-TUB1+β-TUB2為內(nèi)參基因。不同小寫(xiě)字母表示顯著差異(p<0.05)。

因此α-TUB1和α-TUB1+β-TUB2可作為榴蓮蜜不同組織中的內(nèi)參基因進(jìn)行功能基因表達(dá)研究；而僅對(duì)果苞功能基因進(jìn)行表達(dá)研究時(shí)，可選擇α-TUB1、α-TUB1+β-TUB1或α-TUB1+β-TUB2作為內(nèi)參基因。

3 結(jié)論與討論

本研究克隆獲得榴蓮蜜Actin1、α-TUB1、β-TUB1、β-TUB2和GAPDH1基因，分析了這5個(gè)候選內(nèi)參基因在榴蓮蜜不同組織中的表達(dá)穩(wěn)定性，結(jié)合4個(gè)軟件的分析結(jié)果及內(nèi)參基因穩(wěn)定性驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)β-TUB2和α-TUB1是所有測(cè)試樣本中及不同組織中(花序、莖和嫩葉)表達(dá)最穩(wěn)定的基因，β-TUB1和α-TUB1在榴蓮蜜果苞發(fā)育過(guò)程中表達(dá)最穩(wěn)定。這為開(kāi)展榴蓮蜜基因表達(dá)分析提供了參考和依據(jù)。

基因表達(dá)是鑒定基因功能和分析分子機(jī)制的重要手段。RT-qPCR是一種精確、穩(wěn)定、靈敏的基因表達(dá)檢測(cè)技術(shù)。合適的內(nèi)參基因是RT-qPCR準(zhǔn)確分析基因表達(dá)模式的重要前提。不同品種、同品種不同組織及不同脅迫作用下同組織，適合的內(nèi)參基因會(huì)有所不同。3個(gè)不同類型桃品種中，ACTIN是“Hakuho”(果肉溶質(zhì)型))品種最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，UBC是“Fantasia”和“NJC108”(果肉不溶質(zhì)型)品種最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，而EF-1α是“霞脆”(硬肉型)品種最穩(wěn)定的內(nèi)參基因[20]。Actin是火龍果不同組織和果實(shí)發(fā)育階段表達(dá)最穩(wěn)定的基因[21]。蓮霧果肉和果皮中表達(dá)穩(wěn)定的分別是ACT-7和α-TUB基因[22]。高溫和鹽脅迫處理的碭山酥梨葉片中表達(dá)穩(wěn)定的是UBQ，而低溫脅迫處理的葉片中表達(dá)穩(wěn)定的是TUB和WDP[23]。本研究也發(fā)現(xiàn)，榴蓮蜜組織類型及果苞發(fā)育階段顯著影響5個(gè)候選內(nèi)參基因的轉(zhuǎn)錄水平。其中，α-TUB1在花序中的轉(zhuǎn)錄水平最高，β-TUB1在花序和幼果中的轉(zhuǎn)錄水平較高，GAPDH1則在果苞中的轉(zhuǎn)錄水平較高。因此需針對(duì)特定物種、試驗(yàn)環(huán)境的需求開(kāi)發(fā)并篩選出最適的內(nèi)參基因[24-25]。多項(xiàng)研究表明，將轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果與定量分析相結(jié)合可以快速篩選到合適的內(nèi)參基因[7，26-27]。楊丹等[19]發(fā)現(xiàn)，根據(jù)材料自身轉(zhuǎn)錄組基因序列設(shè)計(jì)的引物特異性更好。Santos等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在擬南芥Arabidopsisthaliana中，大多數(shù)通過(guò)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選的自定義內(nèi)參基因比傳統(tǒng)內(nèi)參基因表達(dá)更穩(wěn)定。本研究通過(guò)榴蓮蜜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，克隆獲得榴蓮蜜5個(gè)候選內(nèi)參基因Actin1、α-TUB1、β-TUB1、β-TUB2和GAPDH1，并對(duì)其表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

目前geNorm、NormFinder及BestKeeper軟件是評(píng)估內(nèi)參基因穩(wěn)定性最常用的軟件[29-31]。由于這3種軟件的統(tǒng)計(jì)學(xué)原理和算法不同，最終的分析結(jié)果可能會(huì)存在差異。本研究發(fā)現(xiàn)，利用這3種軟件分析得到的內(nèi)參基因穩(wěn)定性結(jié)果不完全一致，前人研究也有類似現(xiàn)象[22，32-33]。因此，為篩選最適的內(nèi)參基因，提高結(jié)果可信度，利用RifFinder軟件進(jìn)行綜合分析和排名。結(jié)果表明，在榴蓮蜜花序、莖和嫩葉中，最穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)棣?TUB2和α-TUB1，另外β-TUB1和α-TUB1在榴蓮蜜果苞發(fā)育過(guò)程中最穩(wěn)定。α-TUB和β-TUB作為細(xì)胞器骨架的基本組分，對(duì)維持生物體生命活動(dòng)有重要作用[34]。有研究報(bào)道，β-TUB在琯溪蜜柚不同組織和果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期表達(dá)最穩(wěn)定[35]，珙桐的根、莖、葉中穩(wěn)定表達(dá)的是β-TUB[33]。這與本研究結(jié)果相似。但并非所有同源基因表達(dá)模式相似。本研究中，β-TUB1和β-TUB2為榴蓮蜜的2個(gè)同源基因，在不同組織中β-TUB2的綜合排名首位，表達(dá)最穩(wěn)定，而β-TUB1的穩(wěn)定性最差；果苞發(fā)育過(guò)程中，β-TUB1和β-TUB2的綜合排名與之相反。這說(shuō)明即使同一組織中，內(nèi)參基因雖互為同源基因，但它們的表達(dá)穩(wěn)定性也會(huì)有顯著差異。

榴蓮蜜作為一種新興熱帶果樹(shù)，國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究剛剛起步。糖信號(hào)和成花相關(guān)基因一直是研究熱點(diǎn)，而榴蓮蜜這一方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此本研究選擇了成花基因和蔗糖合成酶基因作為驗(yàn)證基因，初步分析其在不同組織中的表達(dá)模式，也可為今后相關(guān)分子機(jī)理研究打下基礎(chǔ)。TEM1是開(kāi)花抑制因子，能結(jié)合成花素FT啟動(dòng)子抑制其表達(dá)，而且還可以抑制GA合成酶基因GA3OX1和GA3OX2的表達(dá)，從而抑制 GA依賴的開(kāi)花路徑[36]。TEM1在花序和莖中的相對(duì)表達(dá)量最低，在果苞發(fā)育階段最高，推測(cè)源于莖中及花序自身積累的TEM1表達(dá)量減少，有助于榴蓮蜜開(kāi)花。SPA1參與隱花色素對(duì)去黃化作用的調(diào)控，可激活下游成花起始轉(zhuǎn)錄調(diào)控子CO的表達(dá)，進(jìn)而激活FT的表達(dá)，促進(jìn)開(kāi)花[37-38]。4個(gè)SUS在參與調(diào)控蔗糖分配過(guò)程中發(fā)揮不同功能，具有發(fā)育和組織特異性。SUS1、SUS2和SUS3在花序、莖、幼果及小果果苞中表達(dá)較高，SUS4在花序、嫩葉和莖中表達(dá)較高。由于蔗糖合成酶催化蔗糖轉(zhuǎn)化為果糖和尿苷二磷酸葡萄糖是一個(gè)可逆反應(yīng)，因此明確不同SUS的作用還需將其與不同組織和果苞發(fā)育過(guò)程中糖分積累變化規(guī)律結(jié)合分析。