劉媛媛，葉梅芳，蒙雪雁，江露娟，丘琴,2*，甄丹丹，黃鳳音，甄漢深

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200；2.廣西優(yōu)勢中成藥與民族藥開發(fā)工程技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530200)

凹葉景天，別名眾多，《中藥大辭典》[1]記載其別名有,馬牙半支、馬牙莧和醬瓣半支等，來源于景天科植物凹葉景天SedumemarginatumMigo的全草。其性涼，味苦、酸；歸心、肝、大腸經(jīng)；具有清熱解毒、涼血止血、止痛等功效。主治肝炎、痢疾、吐血、衄血、便血、月經(jīng)過多，外用時可治療跌打損傷、癰癤、帶狀皰疹,鮮品搗爛外敷可治疔瘡[2-3]?！侗静菥V目拾遺》[4]記載：“消癰腫，治濕熱，利水和血。治腸癰，痔漏，蛇咬，疔疽，便毒，風(fēng)痹，跌撲，黃疸。擦汗斑尤妙”?，F(xiàn)代藥理表明凹葉景天中黃酮類化學(xué)成分具有抗腫瘤[5]、止血、耐缺氧[6]和鎮(zhèn)靜催眠作用[7]。凹葉景天分布于全國，資源豐富，為藥食兩用藥，廣西各地都有種植，為廣西壯族民間用藥。目前，國內(nèi)外對凹葉景天的研究多集中于扦插栽培[8]和含量測定[9-10]，但對于不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)油成分的比較分析未見報道，因此本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上[11-12]，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，對10個不同產(chǎn)地的凹葉景天揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析研究，尋找共性成分，比較其主要差異，為凹葉景天藥材質(zhì)量的評價提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent5971B 質(zhì)譜儀(Agilent公司)；Agilent7890B氣相色譜儀(Agilent公司)；Agilent7683B 自動進(jìn)樣器(Agilent公司)；CPA225D型Sartorius電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)。

1.2 材料

乙酸乙酯(成都市科龍化工試劑，批號：2018022801，AR)；無水硫酸鈉(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；純水。10個不同產(chǎn)地凹葉景天藥材主要來源于廣西壯族自治區(qū)、浙江省和湖北省，經(jīng)廣西一心醫(yī)藥馬利飛副主任中藥師鑒定為景天科景天屬植物凹葉景天的地上部分。藥材來源見表1。

2 研究方法

2.1 揮發(fā)油的提取

取10批凹葉景天藥材，剪碎，稱取30.0 g，置于1 000 mL燒瓶中，按照中國藥典2015版第四部通則2204揮發(fā)油測定法[13]進(jìn)行操作，得油狀物約0.15 mL，揮發(fā)油得率為0.50%，轉(zhuǎn)移至15 mL離心管，乙酸乙酯萃取后加入無水硫酸鈉脫水，得到凹葉景天的揮發(fā)油備用。

表1 10個不同產(chǎn)地凹葉景天藥材來源

2.2 GC-MS測試條件

進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣口分流模式：不分流；載氣：He氣；色譜柱：HP-5MS色譜柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；流速：1.0 mL·min-1；檢測器溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；溶劑延遲時間：3 min；色譜柱升溫條件：程序升溫，見表2； EI離子源；離子源溫度：230 ℃；接口溫度：300 ℃；電子能量：70 eV；溶劑延遲時間：3.5 min；掃描范圍：質(zhì)荷比(m/z)50～400。

表2 氣相程序升溫條件

3 結(jié)果

對10個不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)油成分進(jìn)行GC-MS檢測得到總離子流圖，見圖1，通過運(yùn)用HP6890/5973N化學(xué)工作站NIST08、Chemical BooK標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫，按各色譜的質(zhì)譜裂解碎片圖，對基峰、質(zhì)荷比和相對豐度等進(jìn)行比較，并結(jié)合圖譜解析，確定揮發(fā)油的化學(xué)成分，采用面積歸一化法測得各組分的相對百分含量，分析鑒定結(jié)果見表3～5。

表3分析結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地樣品中揮發(fā)性成分差異顯著，浙江寧海產(chǎn)樣品中共鑒定出23種揮發(fā)性成分，占總含量的48.04%；浙江麗水產(chǎn)樣品中共鑒定出13種揮發(fā)性成分，占總含量的56.29%；廣西隆安產(chǎn)樣品中共鑒定出15種揮發(fā)性成分，占總含量的58.54%；廣西南寧產(chǎn)樣品中共鑒定出19種揮發(fā)性成分，占總含量的39.05%；廣西武鳴產(chǎn)樣品中共鑒定出16種揮發(fā)性成分，占總含量的52.63%；廣西桂林產(chǎn)樣品中共鑒定出14種揮發(fā)性成分，占總含量的74.75%；廣西龍勝產(chǎn)樣品中共鑒定出9種揮發(fā)性成分，占總含量的78.13%；湖北恩施建始縣產(chǎn)樣品中共鑒定出12種揮發(fā)性成分，占總含量的77.92%；湖北恩施宜恩縣產(chǎn)樣品中共鑒定出12種揮發(fā)性成分，占總含量的50%；湖北恩施巴東縣產(chǎn)樣品中共鑒定出11種揮發(fā)性成分，占總含量的65.99%。不同產(chǎn)地共有的揮發(fā)性成分有3種，分別是1,3-二叔丁基苯、2,4-二叔丁基苯酚和鄰苯二甲酸二丁酯。其中，浙江寧海產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分癸烷、氰化芐、Naphthalene、二十二烷、5alpha-膽甾烷；浙江麗水產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分正三十一烷；廣西隆安產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分十二烷、二十八烷、2-十四醇；廣西南寧產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分亞油酸、正三十四烷；廣西武鳴產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分1-二十二醇、1,2-環(huán)氧十六烷；湖北恩施建始縣產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分正十七烷、正二十烷、十四烷；湖北恩施宣恩縣產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分正三十一烷；湖北恩施巴東縣產(chǎn)地含特有揮發(fā)性成分月桂酸。

進(jìn)一步從表3、4分析結(jié)果來看，10個不同產(chǎn)地共有成分中鄰苯二甲酸二丁酯的含量最高，其相對百分含量均在15%以上，其中廣西龍勝所含的鄰苯二甲酸二丁酯含量為50.05%，湖北恩施建始縣所含的含量為39.55%，湖北恩施巴東縣所含的含量為37.03%；在其揮發(fā)性成分種類數(shù)量中：烷烴類>酯類>其他類>醇類>酚類>醛類>胺類>酸類>酮類。由表5分析結(jié)果可知，10個不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分主要是酯類化合物(324.28%)，其次是烷烴類(102.58%)和醇類(70.66%)，其中廣西龍勝產(chǎn)地?fù)]發(fā)性化學(xué)成分中酯類相對含量最高(55.25%)，浙江寧海產(chǎn)地?fù)]發(fā)性化學(xué)成分中酯類相對含量最低(17.6%)，只有浙江麗水和廣西南寧含有酮類成分，分別占1.17%和2.52%。

注：A.浙江寧海；B.浙江麗水；C.廣西隆安；D.廣西南寧；E.廣西武鳴；F.廣西桂林；G.廣西龍勝；H.湖北恩施建始縣；I.湖北恩施宣恩縣；J.湖北恩施巴東縣。圖1 不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分GC/MS總離子流圖

表3 不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分分析結(jié)果

續(xù)表3

表4 10個產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分的種類(種)

表5 10個產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分的相對百分含量(%)

4 討論

不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)性成分組成和含量存在差異，其中1,3-二叔丁基苯、2,4-二叔丁基苯酚和鄰苯二甲酸二丁酯是不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)油的共有成分，但在10個不同產(chǎn)地凹葉景天揮發(fā)油的成分之間又有較大的差異，說明產(chǎn)地對于凹葉景天揮發(fā)油成分具有較大影響。而部分不同地區(qū)凹葉景天揮發(fā)油含有標(biāo)志性成分，其可能是藥材在水土情況、太陽光照、氣候條件、海拔高度和采集季節(jié)等環(huán)境因素下，使得藥材中的揮發(fā)油在生物合成過程中受到影響，針對部分產(chǎn)地中的特有成分，大量樣本的分析結(jié)果可鑒別不同產(chǎn)地來源的凹葉景天，因此可為凹葉景天的品種和產(chǎn)地鑒別提供思路。

歷史上大多數(shù)新藥都是由自然產(chǎn)物衍生的化合物，天然植物就是其中一種重要的藥物資源[14]，因此，鑒定天然植物中具有特定功效的活性成分具有重要意義[15]。研究表明三七是臨床上治療跌打損傷、關(guān)節(jié)疼痛常用的一類經(jīng)典藥物，而三七中的活性單體鄰苯二甲酸二丁酯通過抑制破骨細(xì)胞融合而阻斷破骨細(xì)胞生成，從而有效抑制骨性關(guān)節(jié)炎的啟動和進(jìn)程[16]。凹葉景天在治療跌打損傷方面頗有療效，而鄰苯二甲酸二丁酯作為凹葉景天揮發(fā)油成分中含量最高的化合物，推測該成分可能為凹葉景天在治療鐵打損傷方面的活性成分。