楊雪，詹江輝，仲華，閆雪云，洪亞

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院 輸血科，河南 新鄉(xiāng) 453100；2.新鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院 檢驗科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

新生兒溶血主要是指由于母、子血型不合導致的同種免疫性溶血，母親血型抗體經(jīng)胎盤進入胎兒體內(nèi)后，導致胎兒及新生兒紅細胞遭到破壞。在人類多種血型系統(tǒng)內(nèi)，ABO 血型不合導致的溶血性疾病較為常見，Rh血型不合引起的較少見。另外，新生兒溶血還可能是由非同種免疫性因素，例如藥物、感染、自身免疫性疾病、血紅蛋白缺陷、紅細胞先天酶缺陷等因素引起。新生兒溶血病患兒疾病輕重同溶血程度一致，主要表現(xiàn)為網(wǎng)織紅細胞升高、貧血及黃疸，病情嚴重者還可發(fā)生胎兒水腫。新生兒溶血病通常出現(xiàn)在既往有新生兒溶血發(fā)病史、流產(chǎn)史、妊娠史的孕產(chǎn)婦。近年來新生兒溶血病患兒數(shù)量將逐漸升高，而對該疾病開展研究能夠更好地確保疑似新生兒溶血病胎兒娩出后獲得準確的診斷及治療，降低疾病給新生兒產(chǎn)生的傷害及后遺癥。臨床對新生兒溶血病的診斷一般采用溶血三項，檢驗報告屬于定性結(jié)果，在新生兒機體中IgG 型血型抗體水平定量檢測方面的研究較少，需要以此為切入點開展深入分析。故而，本次研究針對新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院收治的215 例新生兒溶血病患兒進行IgG 型ABO 血型系統(tǒng)抗體效價檢測，現(xiàn)針對研究相關(guān)情況作出以下介紹。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究群體為本院2019年1月至2021年12月收治的215 例新生兒溶血病患兒。215 例患兒內(nèi)，男114 例，女101 例；年齡1～6 d，平均(3.26±1.01)d；體 重2.4～4.1 kg，平均(3.22±0.21)kg；血型數(shù)目A 型112例，B 型98 例，AB 型5 例。本研究資料在本院倫理專家查看后允許繼續(xù)實施研究。

納入標準：(1) 患兒在開展各種臨床項目檢查后，均被確診為新生兒溶血?。?2) 妊娠周期在37～42周者；(3) 母體病例資料完整，在妊娠過程中未出現(xiàn)妊娠并發(fā)癥；(4) 臨床病例資料完整者；(5)家長了解研究內(nèi)容，同意參與試驗。

排除標準：(1) 存在先天性血管、腦、心臟病變情況者；(2) 存在顱內(nèi)出血、感染、窒息及胎兒窘迫等病變情況者；(3) 雙胎及以上者；(4) 巨大兒、早產(chǎn)兒及畸形兒；(5) 母親患有肝臟疾病、甲亢、妊娠期糖尿病及妊娠期高血壓者。

1.2 研究方法

1.2.1 檢測儀器和試劑

XN-10 血液細胞分析儀(采購自日本希森美康公司)，AU5800 型全自動生化分析儀(采購自貝克曼庫爾特有限公司)。離心機系統(tǒng)、卡式孵育器(采購自美國BIO-RED)、不規(guī)則抗體篩檢細胞、人ABO 紅細胞、新生兒溶血病檢測卡、ABO 及Rh 單克隆抗體血型檢測卡采購自長春博訊生物技術(shù)有限責任公司。

1.2.2 血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查

分別采集新生兒母親及新生兒抗凝靜脈全血，將其放置在1 000 g 離心力的離心機中進行持續(xù)3 min 離心處理，將紅細胞與血漿分離后待用。依據(jù)微柱凝膠卡檢測方式對不規(guī)則抗體、Rh 及ABO 血型進行檢測。

1.2.3 溶血三項檢測

挑選新生兒紅細胞壓積，使用生理鹽水進行3 次洗滌，使用56℃熱放散試驗，并且針對新生兒血漿實施游離試驗。選用洗滌后紅細胞開展直接抗人球蛋白試驗。

1.2.4 測定新生兒機體中抗體效價

針對游離試驗及放散試驗結(jié)果呈陽性的標本，依據(jù)濃度梯度稀釋法對檢測液進行處理，并將其滴注在凝膠卡里，放置于37℃卡式孵育器中孵育15 min，取出之后進行離心(900 r/2 min，1 500 r/3 min)，離心之后取出并記錄效價結(jié)果。

1.2.5 血細胞計數(shù)

采集新生兒靜脈全血，并使用乙二胺四乙酸二鉀進行抗凝處理，利用XN-10 血液細胞分析儀開展紅細胞、網(wǎng)織紅細胞、血紅蛋白及有核紅細胞檢測。

1.2.6 生化檢測

采集新生兒未抗凝靜脈全血，將其置入37℃溫育箱內(nèi)進行持續(xù)30 min 溫育，隨后放置在1 000 g 離心力的離心機中進行持續(xù)5 min 離心處理，選擇AU5800 型全自動生化分析儀針對鉀離子、白蛋白及未結(jié)合膽紅素水平實施檢測。

1.3 觀察項目

(1) 分析患兒溶血試驗結(jié)果。(2) 分析放散試驗和游離抗體試驗分布情況。(3) 分析不同放散試驗滴度(1∶1～1∶32) 的患兒特點。(4) 分析不同游離抗體試驗(1∶1～1∶4) 的患兒特點。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 患兒溶血試驗結(jié)果分析

在215 例患兒中，紅細胞抗體放散試驗陽性率是184 例(85.6%)，游離抗體試驗陽性率是176 例(81.9%)，直接抗球蛋白試驗陽性率是86 例(40.0%)，三種試驗方式陽性率對比。差異有統(tǒng)計學意義(χ=129.125，＜0.05)。見表1。

表1 患兒溶血試驗結(jié)果分析[n(%)]

2.2 放散試驗和游離試驗分布情況分析

在患兒中，紅細胞放散試驗抗體效價最高的是1∶32，6 個不同放散液效價組患兒數(shù)量對比，差異有統(tǒng)計學意義(χ=143.738，＜0.05)。血漿游離抗體試驗效價最高的是1∶4，3 個不同游離抗體效價組患兒數(shù)量對比，差異有統(tǒng)計學意義(χ=434.267，＜0.05)。見表2。

表2 放散試驗和游離試驗分布情況分析(n)

2.3 不同放散試驗滴度(1∶1～1∶32)的患兒特點分析

在放散試驗中，患兒機體內(nèi)抗體效價越高，病情嚴重程度越高，治療恢復時間越長，呈現(xiàn)患兒住院時間隨效價上升而延長。見表3。

表3 不同放散試驗滴度(1∶1～1∶32)的患兒特點分析

2.4 不同游離抗體試驗(1∶1～1∶4)的患兒特點分析

在游離抗體試驗中，患兒機體內(nèi)抗體效價越高，病情嚴重程度越高，治療恢復時間越長，呈現(xiàn)患兒住院時間隨效價上升而延長。見表4。

表4 不同游離抗體試驗(1∶1～1∶4)的患兒特點分析

3 討 論

當前臨床對新生兒溶血病進行預(yù)測的主要方式是對夫妻雙方開展ABO 血型檢測，當兩者ABO 血型相同時，則不會出現(xiàn)ABO 型新生兒溶血??；當兩者ABO 血型不相同時，則有發(fā)生新生兒溶血的可能性。在該種情況下，孕婦需要開展IgG 型抗-A、抗-B 效價測定，當抗體效價在64 及以上時存在臨床價值。在孕婦妊娠期間，IgG 型抗-A、抗-B 效價出現(xiàn)明顯變化，表明臨床需要針對孕婦開展干預(yù)，進而確保胎兒能夠正常生長發(fā)育。

直接抗人球蛋白實驗、游離抗體試驗及放散試驗是臨床診斷新生兒出生后溶血的主要方式，在敏感度方面，放散試驗效果較好。通過開展本次研究后發(fā)現(xiàn)，在215例患兒中，紅細胞抗體放散試驗陽性率為85.6%，游離抗體試驗陽性率為81.9%，直接抗球蛋白試驗陽性率為40.0%，三種試驗方式陽性率對比，差異存在統(tǒng)計學意義(＜0.05)。本次研究通過對新生兒溶血患兒機體中IgG 型抗-A 及抗-B 紅細胞抗體效價的差異和臨床效應(yīng)進行對比分析，結(jié)果表明新生兒機體中放散抗體效價區(qū)間是1∶1～1∶32，游離抗體區(qū)間是1∶1～1∶4。分析結(jié)果，由于患兒機體中抗體通過胎盤屏障進入血液循環(huán)后，同紅細胞結(jié)合，大部分抗體會以結(jié)合形式存在。并且本次研究放散實驗選擇的樣本是濃縮紅細胞，能夠?qū)贵w實施富集，其也是放散實驗抗體效價相較于游離實驗較高的主要因素。

本次研究發(fā)現(xiàn)，新生兒溶血病患兒ABO 血型分布無明顯差異，這提示不同血型導致的新生兒溶血能力差異無統(tǒng)計學意義。當前臨床對新生兒溶血患兒疾病嚴重程度的判斷主要是利用血紅蛋白、紅細胞及膽紅素，當IgG 型抗體結(jié)合紅細胞后，會引起紅細胞免疫性溶血，使得血液內(nèi)膽紅素水平逐漸升高。當膽紅素在機體中的聚集遠高于肝臟代償功能時，可出現(xiàn)黃疸癥狀。紅細胞出現(xiàn)免疫性溶血后，會發(fā)生血紅蛋白水平降低及紅細胞計數(shù)下降的情況，而在臨床表現(xiàn)方面，則有缺氧及貧血癥狀。上述實驗室檢測指標改變及臨床表現(xiàn)均是IgG 型抗體同紅細胞結(jié)合達到一定程度后才會出現(xiàn)的，故而通過觀察上述指標會對疾病及時診斷發(fā)生不利影響。

本次研究發(fā)現(xiàn)，患兒機體內(nèi)抗體效價越高，病情嚴重程度越高，治療恢復時間越長，呈現(xiàn)患兒住院時間隨效價上升而延長。針對研究結(jié)果進行分析，患兒機體中IgG 型抗-A 及抗-B 紅細胞抗體效價越高，抗體水平越多，對紅細胞的破壞則越強，這使得紅細胞發(fā)生溶血，機體循環(huán)血液內(nèi)膽紅素水平升高。膽紅素在肝血竇面實施跨膜轉(zhuǎn)運時，需要同白蛋白結(jié)合，因此在診斷新生兒溶血時，血紅蛋白水平下降可發(fā)揮輔助作用。在新生兒溶血治療期間，醫(yī)護人員需要對血紅蛋白水平進行嚴密監(jiān)測，當發(fā)生血紅蛋白水平降低時，需要合理補充，確保機體內(nèi)膽紅素能夠獲得正常代謝。

綜上所述，新生兒機體中IgG 型ABO 血型系統(tǒng)抗體效價能夠?qū)π律鷥喝苎』純簷C體中抗A/B 抗體水平進行判斷，進而預(yù)測患兒機體中抗體誘發(fā)紅細胞溶血水平，有利于臨床評估新生兒溶血病的嚴重程度和疾病預(yù)后。