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        表面活性劑對(duì)茫崖諾卡氏菌降解鄂爾多斯盆地富油煤過(guò)程的影響

        2022-10-03 07:35:16申文盛劉向榮吳燕趙順省楊再文盧璇
        應(yīng)用化工 2022年8期
        關(guān)鍵詞:效果實(shí)驗(yàn)

        申文盛,劉向榮,吳燕,趙順省,楊再文,盧璇

        (1.西安科技大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院, 陜西 西安 710054;2.自然資源部煤炭資源勘查與綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安 710021)

        富油煤是一種特殊的煤炭資源,通過(guò)微生物降解能有效提取其高附加值產(chǎn)物,但降解率低限制了該技術(shù)在工業(yè)上的推廣[1-7]。Fakoussa等學(xué)者先后報(bào)道了表面活性劑能促進(jìn)煤的生物增溶程度,為提高煤的生物轉(zhuǎn)化提供了一個(gè)新的思路[8-11]。

        本研究利用茫崖諾卡氏菌降解鄂爾多斯盆地富油煤,探究了降解時(shí)間、菌液用量、加煤量、SDS、LAS、Tw-80和Triton X-100 4種表面活性劑和對(duì)茫崖諾卡氏菌降解富油煤的影響,對(duì)降解產(chǎn)物的組成進(jìn)行紅外光譜、氣質(zhì)聯(lián)用色譜分析。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 材料與儀器

        煤樣,采自鄂爾多斯盆地武家塔礦區(qū),焦油產(chǎn)率9.9%,屬富油煤;茫崖諾卡氏菌(N.mangyaensis),購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心,編號(hào)為:11046;甲苯、二氯甲烷、乙酸乙酯為色譜純;蛋白胨、酵母粉、NaCl、硝酸等均為分析純。

        XMB-70A型棒磨機(jī);SW-CJ-1FD型單人單面超凈工作臺(tái);BL-50A型立式壓力蒸汽滅菌器;HZQ-F100型恒溫振蕩培養(yǎng)箱;TU-1900型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);Agilent 7890A/5975 C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;Spectumn GX型傅里葉變換紅外光譜儀。

        1.2 培養(yǎng)基

        培養(yǎng)基組成以供貨商提供配比制取:蛋白胨10 g, 酵母粉5 g,NaCl 10 g,蒸餾水1 000 mL,pH值7.4~7.6。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        1.3.1 煤樣的預(yù)氧化處理 對(duì)煤樣進(jìn)行氧化預(yù)處理是促進(jìn)煤微生物降解的有效方式[12]。將煤樣粉碎、篩分,選取粒度100~150 mm。煤樣和8 mol/L硝酸按照1∶2.5 g/mL的比例浸泡氧化24 h。去離子水沖洗至pH>5.6,抽濾、烘干備用。

        1.3.2 微生物降解實(shí)驗(yàn) 茫崖諾卡氏菌以供貨方所提供的培養(yǎng)方法進(jìn)行活化,經(jīng)3代培養(yǎng)后留存?zhèn)溆?。?50 mL的錐形瓶中加入50 mL液體培養(yǎng)基、富油湈,錐形瓶用紙包好,用立式壓力蒸汽滅菌鍋滅菌。滅菌后接種復(fù)壯好的菌液,在恒溫振蕩培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),設(shè)置溫度30 ℃,振蕩轉(zhuǎn)速160 r/min。降解結(jié)束,煤樣烘干(剩煤)。利用差減法計(jì)算煤的微生物降解率。

        式中η——細(xì)菌溶煤率,%;

        m1——起始加入的煤樣質(zhì)量,g;

        m2——細(xì)菌作用后剩煤質(zhì)量,g。

        作為首農(nóng)食品的一員,如何讓“中華老字號(hào)”的金字招牌在新時(shí)代綻放新光彩?“王致和”在傳承的前提下不斷自主創(chuàng)新,逐步實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)的工業(yè)化、現(xiàn)代化、規(guī)?;蜆?biāo)準(zhǔn)化。同時(shí),面對(duì)市場(chǎng)挑戰(zhàn)、食品安全標(biāo)準(zhǔn)的持續(xù)提升,企業(yè)在管理方面不斷創(chuàng)新,提升企業(yè)核心競(jìng)爭(zhēng)力,實(shí)現(xiàn)了經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益雙增長(zhǎng)。

        1.4 分析方法

        利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定降解液450 nm吸光度(A450),A450與降解效果正相關(guān)[13-15]。利用傅里葉變換紅外光譜儀對(duì)原富油煤(原煤)、硝酸氧化富油煤(氧化煤)、剩煤進(jìn)行紅外光譜分析,采用KBr壓片法,測(cè)試范圍為4 000~400 cm-1,分辨率4 cm-1。將表面活性劑作用下最優(yōu)工藝得到的液相產(chǎn)物,使用不同極性的甲苯、二氯甲烷和乙酸乙酯進(jìn)行萃取。對(duì)萃取液的組成利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 煤的氧預(yù)化

        原煤和氧化煤的工業(yè)分析和元素分析見(jiàn)表1。

        表1 煤樣的工業(yè)分析和元素分析Table 1 Proximate and ultimate analysis of coal samples

        由表1可知,富油煤經(jīng)硝酸氧化處理后,灰分含量較原煤減少,可見(jiàn)硝酸預(yù)處理起到了脫灰作用;揮發(fā)分較原煤增加,可能是原煤中大分子結(jié)構(gòu)被硝酸氧化斷裂,氧化煤中易降解小分子化合物增多。另外,經(jīng)硝酸處理的富油煤中氧含量明顯增加,硫含量減少,可見(jiàn)氧化效果明顯。

        2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

        降解條件設(shè)置見(jiàn)表2。保持其它條件不變,考察降解時(shí)間、菌液用量和加煤量對(duì)煤樣降解效果的影響,見(jiàn)圖1。

        表2 單因素實(shí)驗(yàn)Table 2 Single factor experiment

        由圖1(a)可知,降解時(shí)間<15 d時(shí),對(duì)降解效果影響顯著,>15 d時(shí),影響較小,最佳降解時(shí)間為15 d。分析原因,微生物生長(zhǎng)15 d后,可從培養(yǎng)基和煤樣中攝取營(yíng)養(yǎng)成分已耗盡,細(xì)菌不能生存。

        由圖1(b)可知,當(dāng)菌液用量為160 mL/L時(shí),茫崖諾卡氏菌對(duì)煤降解效果最佳。分析原因,細(xì)菌與煤樣作用受傳質(zhì)作用影響,當(dāng)煤樣接觸面達(dá)到飽和時(shí),細(xì)菌數(shù)量的增加不能強(qiáng)化傳質(zhì);此外,細(xì)菌增加到一數(shù)量,煤樣中可降解物質(zhì)已耗盡,對(duì)降解效果影響不顯著。

        由圖1(c)可知,當(dāng)加煤量為18 g/L時(shí),降解效果最佳。原因可能是當(dāng)培養(yǎng)基和細(xì)菌數(shù)量不變時(shí),煤樣的增加會(huì)加大菌種與煤樣的可接觸面積,降解效果顯著增加。同時(shí),當(dāng)細(xì)菌可攝取營(yíng)養(yǎng)源耗盡后,不能僅以煤為營(yíng)養(yǎng)源生長(zhǎng)繁殖,加煤量達(dá)到一定值后,降解效果不再增強(qiáng)。

        2.3 正交實(shí)驗(yàn)

        保持其它實(shí)驗(yàn)條件不變,取降解時(shí)間、菌液用量和加煤量3個(gè)因素,進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),水平見(jiàn)表3,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

        表3 因素水平表Table 3 Factor and level table

        由表4可知,3個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的權(quán)重影響為C>A>B,即加煤量、降解時(shí)間、菌液用量對(duì)降解效果影響依次減弱。最佳工藝條件為A2B3C2,即降解時(shí)間為15 d,菌液用量為200 mL/L,加煤量分別為18 g/L, 此時(shí)降解效果最好,降解率為34.2%。

        表4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 4 Test results

        2.4 表面活性劑對(duì)降解影響

        2.4.1 不同表面活性劑對(duì)茫崖諾卡氏菌生長(zhǎng)的影響 實(shí)驗(yàn)不加煤樣,滅菌前加入50 mL濃度為400 mg/L 的表面活性劑,通過(guò)觀察茫崖諾卡氏菌菌液的A450和pH,研究表面活性劑對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響,結(jié)果見(jiàn)圖2。

        由圖2可知,加入LAS、Tw-80和TritonX-100后,菌液始終保持在堿性環(huán)境下,有利于菌種的生長(zhǎng),茫崖諾卡氏菌接種后生長(zhǎng)迅速,在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,茫崖諾卡氏菌以最快的速度生長(zhǎng)繁殖,穩(wěn)定期的細(xì)菌生長(zhǎng)速度開(kāi)始放緩。而加入SDS后,菌液顯酸性,不利于菌種的生長(zhǎng)。茫崖諾卡氏菌在培養(yǎng)的最初24 h內(nèi)未觀察到明顯的生長(zhǎng),這表明茫崖諾卡氏菌很難適應(yīng)SDS環(huán)境,SDS延緩了茫崖諾卡氏菌的生長(zhǎng),不利于茫崖諾卡氏菌快速繁殖。

        2.4.2 表面活性劑對(duì)煤樣微生物降解影響 在最佳工藝條件下,降解實(shí)驗(yàn)滅菌前加入50 mL LAS、Tw-80、Triton X-100的表面活性劑,測(cè)定經(jīng)離心處理后的液相降解產(chǎn)物的pH、表面張力和A450,結(jié)果見(jiàn)圖3~圖5。

        圖3 4種表面活性劑濃度對(duì)降解液pH的影響Fig.3 Effects of concentrations of four surfactants on pH of degradation liquids

        圖4 4種表面活性劑濃度對(duì)降解液表面張力的影響Fig.4 Effects of concentrations of four surfactants onsurface tension of degradation liquids

        圖5 4種表面活性劑濃度對(duì)降解液A450的影響Fig.5 Effects of concentrations of four surfactants on A450 of degradation liquids

        由圖3~圖5可知,隨著加入表面活性劑SDS濃度的增大,降解液pH變小,不利于菌種生長(zhǎng),茫崖諾卡氏菌對(duì)氧化煤的降解效果越差;而隨著加入表面活性劑LAS、Tw-80和Triton X-100濃度的增大,降解液始終保持堿性,液體表面張力變小,茫崖諾卡氏菌對(duì)氧化煤的降解效果先增強(qiáng)后減弱,最佳加入濃度分別為800,800,1 000 mg/L。其中Triton X-100增加效果最為明顯,降解效果見(jiàn)表5,降解率為57.8%。

        表5 Triton X-100作用下茫崖諾卡氏菌對(duì)煤樣降解率的提高Table 5 Improvement of degradation rate of coal samples by N.Mangyaensisunder Triton X-100

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,低濃度的表面活性劑可以促進(jìn)煤炭的微生物降解,高濃度作用不明顯。分析原因,多環(huán)芳烴是煤中大分子結(jié)構(gòu)主要組成,隨著其環(huán)數(shù)增加、疏水性增強(qiáng),不利于菌種降解。低濃度的表面活性劑能改變煤炭的表面性質(zhì),增加煤炭的親水性,有利于細(xì)菌及其分泌物與煤炭接觸。在表面活性劑的膠束水溶液中,水相中煤樣能夠直接被微生物捕獲而降解,見(jiàn)圖6。

        圖6 表面活性劑膠束中煤樣向微生物和酶?jìng)髻|(zhì)過(guò)程Fig.6 Mass transfer of coal in surfactant micelles to microorganisms and enzymes

        添加的表面活性劑形成穩(wěn)定膠束,增溶的煤被運(yùn)送到微生物細(xì)胞附近,微生物和煤的傳質(zhì)作用得到增強(qiáng)。這一機(jī)理與圖4觀察到的結(jié)果一致,低濃度的表面活性劑可以有效降低降解后液體的表面張力,表面活性劑的加入對(duì)茫崖諾卡氏菌降解氧化煤的效果明顯。同時(shí),表面活性劑濃度過(guò)高時(shí),溶液滲透壓會(huì)破壞細(xì)胞完整性,影響微生物的生長(zhǎng)和代謝,降解效果降低[16]。

        2.5 原煤、氧化煤和剩煤的紅外光譜分析

        圖7為原煤、氧化煤和剩煤的紅外光譜。

        圖7 原煤、氧化煤和剩煤的紅外光譜圖Fig.7 FTIR of raw coal,oxidized coal,biodegradation residual coal

        2.6 富油煤降解液組成分析

        分別用甲苯、二氯甲烷和乙酸乙酯對(duì)降解液相產(chǎn)物進(jìn)行萃取,總離子色譜依次見(jiàn)圖8~圖10。

        圖8 甲苯萃取物的GC-MS圖Fig.8 GC-MS spectra of of toluene extract

        圖9 二氯甲烷萃取物的GC-MS圖Fig.9 GC-MS spectra of of dichloromethan extract

        圖10 乙酸乙酯萃取物的GC-MS圖Fig.10 GC-MS spectra of of ethyl acetate extract

        由圖8可知,甲苯萃取液含有40種化合物,分子量在92~493之間,其中烷烴類(lèi)物質(zhì)含量最高。

        由圖9可知,二氯甲烷萃取液含有27種化合物,分子量在134~647之間,其中烷烴類(lèi)含量為63.65%,醇、酯類(lèi)含量為16.45%,羧酸類(lèi)含量為1.93%,胺類(lèi)含量為3.01%。

        由圖10可知,乙酸乙酯萃取液含有3種化合物,分子量在278~338之間。

        綜上所述,茫崖諾卡氏菌對(duì)煤樣的降解產(chǎn)物中主要含有烷烴類(lèi)、酯類(lèi)、醇類(lèi)、羧酸類(lèi)、胺類(lèi)等小分子物質(zhì),降解液組成見(jiàn)表6,相對(duì)分子量在92~647之間。

        表6 煤樣的微生物降解液中有機(jī)化合物組成Table 6 Composition of organic compounds in microbial degradation solution of coal samples

        3 結(jié)論

        (1)在茫崖諾卡氏菌降解煤樣過(guò)程中,加煤量對(duì)降解效果影響最大,降解時(shí)間次之菌液用量影響最小。最佳降解條件:降解時(shí)間為15 d,菌液濃度為200 mL/L,煤樣濃度為18 g/L,此時(shí)降解效果最好,降解率為34.2%。

        (2)表面活性劑LAS、Tw-80和Triton X-100隨著濃度增加,降解效果先增大后降低,最佳加入濃度分別為800,800,1 000 mg/L,其中Triton X-100增加效果最為明顯,降解率為57.8%,提高了23.6個(gè)百分點(diǎn);SDS也增加煤炭表面的親水性,但對(duì)菌種生長(zhǎng)有抑制作用,不能促進(jìn)菌種對(duì)煤樣的降解。

        (3)原煤、氧化煤和剩煤的紅外光譜顯示,微生物作用后,氧化煤的部分芳香環(huán)和羧基被降解,煤中的有機(jī)大分子已很大程度被茫崖諾卡氏菌降解成小分子。

        (4)茫崖諾卡氏菌對(duì)氧化煤的降解產(chǎn)物中主要含有烷烴類(lèi)、酯類(lèi)、醇類(lèi)、羧酸類(lèi)、胺類(lèi)等小分子物質(zhì),相對(duì)分子量在92~647之間。

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