徐玲文 王華兵 王倩 揭鳳英 鄧淑萍 董芳（武漢市第三醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，武漢 430060）

膿毒癥是臨床危重患者的一種常見全身性炎癥反應(yīng)綜合征，累及體內(nèi)多種器官，可發(fā)展為多器官功能衰竭、膿毒性休克。急性肺損傷是膿毒癥最常見的并發(fā)癥，其在膿毒癥患者中發(fā)生率很高，是加速患者死亡的重要因素［1］。膿毒癥發(fā)生時(shí)，大量炎癥細(xì)胞在肺組織聚集、浸潤，活性氧、自由基過量產(chǎn)生，炎癥細(xì)胞因子表達(dá)增加，Th17/Treg平衡向Th17轉(zhuǎn)移，引發(fā)嚴(yán)重氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，造成肺組織損傷，因此，抑制炎癥，降低氧化應(yīng)激水平是治療膿毒癥急性肺損傷的有效手段［2-3］。TLR4/NF-κB信號通路參與介導(dǎo)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等生理病理過程，下調(diào)該信號表達(dá)可通過抑制Th17細(xì)胞分化，促使Treg細(xì)胞分化，改善Th17/Treg失衡來減輕結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸炎癥，還可通過抑制炎癥反應(yīng)，提高機(jī)體抗氧化作用來減輕急性肺損傷［4-6］，因此TLR4/NF-κB通路可能是膿毒癥急性肺損傷治療靶點(diǎn)之一。黃芩苷（Baicalin，BA）屬于黃酮類化合物，是中藥黃芩的主要有效成分，可降低炎癥因子表達(dá)，抑制炎癥，減輕關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病理損傷，并可改善LPS誘導(dǎo)的小鼠肺炎癥狀［7-8］；BA還能抑制Th17細(xì)胞分化，促進(jìn)Treg激活，減輕二氧化硅誘導(dǎo)的肺纖維化和肺組織炎癥損傷［9］，但BA對膿毒癥急性肺損傷小鼠TLR4/NF-κB通路及Treg/Th17平衡的影響目前還未有明確報(bào)道，本文通過誘導(dǎo)復(fù)制膿毒癥急性肺損傷小鼠模型，對此進(jìn)行初步研討。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物BALB/c小鼠購自武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2017-0013，清潔級，雄性，體質(zhì)量18～22 g。飼養(yǎng)于本院動物房，自然照明，溫度25℃，相對濕度50%，自由進(jìn)食、飲水，環(huán)境保持清潔、安靜，通風(fēng)良好。

1.1.2主要藥品及試劑BA（BR：90%，JK30647）由武漢瓊格生物科技有限公司提供；脂多糖（CD-07378-ML）由武漢純度生物科技有限公司提供；地塞米松（50-02-2）由武漢澤諾生物科技有限公司提供；SOD檢測試劑盒（A001-3-2）、MDA檢測試劑盒（A003-1-2）由南京建成生物工程研究所提供；總蛋白提取試劑盒（BB-3101）、核蛋白提取試劑盒（BB-3102）由上海貝博生物科技有限公司提供；紅細(xì)胞裂解液（R1010）由北京索萊寶科技有限公司提供；標(biāo)記藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）的抗小鼠IL-17抗體（12-9171-80）、標(biāo)記異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）的抗小鼠CD4抗體（11-0041-82）由美國Invitrogen公司提供；小鼠TNF-α ELISA試 劑 盒（ab212073）、小 鼠IL-6 ELISA試 劑 盒（ab203360）、小鼠IL-17 ELISA試劑盒（ab210898）、小鼠TGF-β ELISA試劑盒（ab119557）、HE染色試劑盒（ab245880）、兔源GAPDH一抗（ab9485）、BCA蛋白檢測試劑盒（ab102536）、兔源TLR4一抗（ab217274）、兔 源MyD88一 抗（ab219413）、兔 源PCNA一 抗（ab92552）、兔源NF-κB p65一抗（ab16502）、羊抗兔二抗（ab150077）由美國Abcam公司提供。

1.1.3主要儀器全自動血?dú)夥治鰴z測儀由德國MICROM公司提供；酶標(biāo)儀（Elx800）由美國Bio-Rad公司提供；流式細(xì)胞儀（BD LSRFortessaTM）由美國BD公司提供；光學(xué)顯微鏡（E200）由日本尼康公司提供；切片機(jī)（CM3050S）由德國Leica公司提供；凝膠成像儀（GelSMART）由北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司提供；垂直電泳儀及轉(zhuǎn)移系統(tǒng)由北京六一生物科技有限公司提供等。

1.2方法

1.2.1膿毒癥急性肺損傷小鼠模型建立及分組給藥將脂多糖溶于0.9%氯化鈉溶液中，配制為5 mg/ml的溶液，以10 mg/kg腹腔注射建立膿毒癥急性肺損傷小鼠模型［10］。共造模65只，成功60只，隨機(jī)分為模型組、地塞米松組、BA低、中、高劑量組，每組12只，另取12只小鼠腹腔注射等劑量0.9%氯化鈉溶液，設(shè)定為對照組。

參照文獻(xiàn)［11］，以0.9%氯化鈉溶液溶解BA、地塞米松后混勻，制得濃度為7.5、15、30 mg/ml的BA藥液和濃度為0.72 mg/ml的地塞米松藥液，BA低、中、高劑量組分別以10 ml/kg灌胃3種濃度的BA藥液，同時(shí)腹腔注射10 ml/kg劑量的0.9%氯化鈉溶液；地塞米松組腹腔注射7.2 mg/kg劑量的地塞米松藥液［12］，同時(shí)灌胃10 ml/kg劑量的0.9%氯化鈉溶液；模型組和對照組灌胃10 ml/kg劑量的0.9%氯化鈉溶液，同時(shí)腹腔注射10 ml/kg劑量的0.9%氯化鈉溶液，均1次/d，持續(xù)14 d。

1.2.2標(biāo)本采集及肺W/D檢測第14天給藥后24 h，以乙醚氣體麻醉小鼠，采用頸椎脫臼法處死后解剖，采集腹主動脈血3 ml，取1.0 ml進(jìn)行動脈血?dú)庵笜?biāo)檢測，再取1.0 ml適量紅細(xì)胞裂解液后檢測外周血Th17/Treg，剩余1 ml靜置15 min，4℃、3 000 r/min，離心15 min，收集上清液，獲得血清保存在-80℃中備用。分離雙肺，左右肺剪開，左肺稱量濕重，置于60℃烘烤箱中烘干，稱量干重，計(jì)算濕干比，即W/D；右肺剪取約1.0 g組織，剪碎，采用總蛋白提取試劑盒和核蛋白提取試劑盒分別提取0.5 g肺組織中總蛋白與核蛋白，通過BCA法分別測定兩者總濃度后煮沸變性，在-80℃保存?zhèn)溆茫皇Ｓ嘤曳谓M織經(jīng)0.9%氯化鈉溶液漂洗后，進(jìn)行固定、脫水、透明、包埋處理，最后將組織塊放入切片機(jī)中切片，得到厚度為4 μm的薄片備用。

1.2.3小鼠動脈血?dú)庵笜?biāo)檢測將1.2.2中動脈血置于全自動血?dú)夥治鰴z測儀，參照儀器說明書對動脈血二氧化碳分壓（arterial partial pressure of carbon dioxide，PaCO2）與動脈血氧分壓（arterial partial pressure of oxygen，PaO2）進(jìn)行檢測，計(jì)算氧合指數(shù)（oxygenation index，OI），OI=PaO2/0.21。

1.2.4小鼠肺組織病理形態(tài)檢測取出1.2.2中肺組織薄片，浸入二甲苯中脫蠟處理，然后經(jīng)水化后以試劑盒進(jìn)行HE染色，具體步驟參照其說明書進(jìn)行，將染色后的肺組織薄片以蒸餾水快速漂洗后脫水、透明，最后小心鋪上載玻片后封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織染色情況并拍照。

1.2.5小鼠外周血Th17/Treg檢測1.2.2中加入適量紅細(xì)胞裂解液的外周血，冰水浴中30 min，4℃下1 000 g離心3 min獲得細(xì)胞沉淀，經(jīng)預(yù)冷的PBS洗滌后重懸，計(jì)數(shù)后將其細(xì)胞密度調(diào)至1×106個(gè)/ml，取1 ml細(xì)胞懸液，加入標(biāo)記PE的抗小鼠IL-17抗體（Th17細(xì)胞標(biāo)志）與標(biāo)記FITC的抗小鼠CD4抗體（Treg細(xì)胞標(biāo)志），混勻后4℃避光孵育20 min，4℃下1 000 g離心3 min獲得細(xì)胞沉淀，經(jīng)預(yù)冷的PBS洗滌、重懸并混勻，采用流式細(xì)胞儀測出Treg與Th17細(xì)胞比例，得到Th17/Treg。

1.2.6小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-17、TGF-β及肺組織SOD、MDA水平檢測1.2.2中蛋白樣品液和血清于4℃冰箱中解凍，各取400 μl以各自試劑盒測定其中TNF-α、IL-6、IL-17、TGF-β、SOD及MDA含量，參照說明書進(jìn)行具體操作，剩余肺組織蛋白樣品液保存在-80℃中，進(jìn)行后續(xù)蛋白表達(dá)檢測。

1.2.7小鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測1.2.5中剩余蛋白樣品液置于4℃冰箱中解凍，煮沸6 min后，分別取20 μg各組蛋白上樣，做電泳實(shí)驗(yàn)分離蛋白，然后馬上濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)移蛋白，以5%脫脂牛奶室溫封閉所得硝酸纖維膜上蛋白2 h，以薄刀片切下NF-κB p65、TLR4、MyD88、GAPDH、PCNA 5個(gè)目的蛋白條帶，以稀釋比例均為1∶2 000的相對應(yīng)兔源一抗溶液4℃孵育9 h，TBST緩沖液洗3次后以羊抗兔二抗溶液室溫孵育90 min（稀釋比例為1∶1 500），ECL顯影液顯色后拍照，采用Image J軟件分析獲得各蛋白圖像灰度值，以GAPDH作為總蛋白內(nèi)參，PCNA作為核蛋白內(nèi)參，定量后統(tǒng)計(jì)獲得各目的蛋白相對表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以±s表示計(jì)量資料，用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS20.0對上述數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間比較進(jìn)行單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1膿毒癥急性肺損傷小鼠模型的建立腹腔注射脂多糖24 h后，小鼠毛色干枯，食欲減退，呼吸困難，發(fā)生喘息，檢測小鼠動脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)顯示，與對照組相比，模型組小鼠PaCO2明顯升高（P＜0.05），PaO2、OI明顯降低（P＜0.05），表明模型建立成功。

2.2BA對小鼠肺W/D的影響與對照組相比，模型組小鼠肺W/D明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠肺W/D降低，且BA低、中、高劑量組三組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，小鼠肺W/D差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組小鼠肺W/D比較（±s，n=12）Tab.1 Comparison of lung W/D of mice in each group（±s，n=12）

表1 各組小鼠肺W/D比較（±s，n=12）Tab.1 Comparison of lung W/D of mice in each group（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone Lung W/D 4.12±0.23 6.65±0.511）5.74±0.252）5.03±0.222）3）4.17±0.282）3）4）4.18±0.262）3）4）

2.3BA對小鼠動脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)的影響與對照組相比，模型組小鼠PaCO2明顯升高（P＜0.05），PaO2、OI明顯降低（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠PaCO2降低，PaO2、OI升高，且BA低、中、高劑量組三組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，各指標(biāo)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組小鼠動脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)比較（±s，n=12，mmHg）Tab.2 Comparison of arterial blood gas related indexes of mice in each group（±s，n=12，mmHg）

表2 各組小鼠動脈血?dú)庀嚓P(guān)指標(biāo)比較（±s，n=12，mmHg）Tab.2 Comparison of arterial blood gas related indexes of mice in each group（±s，n=12，mmHg）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone PaO2 97.64±6.13 54.56±2.971）67.38±3.132）82.82±3.262）3）95.96±4.972）3）4）96.24±5.362）3）4）PaCO2 34.72±1.27 59.73±2.831）50.26±2.542）42.85±2.162）3）35.21±1.872）3）4）35.28±1.962）3）4）OI 464.95±16.45 259.81±9.141）320.86±13.242）394.38±15.352）3）456.95±15.892）3）4）458.29±17.132）3）4）

2.4BA對小鼠肺組織病理形態(tài)的影響對照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)完好，無損傷。模型組小鼠肺泡萎縮、肺泡壁變厚，肺間質(zhì)充血、水腫，并伴隨大量炎癥細(xì)胞浸潤，肺組織發(fā)生嚴(yán)重病理損傷。與模型組相比，各給藥組小鼠肺組織病理損傷均有減輕，且減輕程度隨BA劑量升高而增強(qiáng)。BA高劑量組與地塞米松組小鼠肺組織基本恢復(fù)正常，兩者相比，肺組織病理形態(tài)無明顯差異，見圖1。

圖1 HE染色檢測各組小鼠肺組織病理形態(tài)（×400）Fig.1 HE staining was used to detect pathological morphology of lung tissue of mice in each group（×400）

2.5BA對小鼠肺組織SOD、MDA水平的影響與對照組相比，模型組小鼠肺組織SOD水平明顯降低（P＜0.05），MDA水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠肺組織SOD水平升高，MDA水平降低，且BA不同劑量組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，各指標(biāo)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 各組小鼠肺組織SOD、MDA水平比較（±s，n=12）Tab.3 Comparison of SOD and MDA levels in lung tissue of mice in each group（±s，n=12）

表3 各組小鼠肺組織SOD、MDA水平比較（±s，n=12）Tab.3 Comparison of SOD and MDA levels in lung tissue of mice in each group（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone SOD/（U·mg-1）435.23±65.01 278.63±49.321）337.25±51.682）378.04±54.242）3）429.18±63.432）3）4）430.02±66.252）3）4）MDA/（nmol·mg-1）2.13±0.14 4.56±0.371）3.74±0.302）3.01±0.252）3）2.20±0.162）3）4）2.18±0.192）3）4）

2.6BA對小鼠外周血Th17/Treg免疫平衡的影響與對照組相比，模型組小鼠外周血Th17/Treg明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠外周血Th17/Treg降低，且BA不同劑量組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，外周血Th17/Treg差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2、表4。

圖2 流式細(xì)胞檢測各組小鼠外周血Th17、Treg亞群比例Fig.2 Flow cytometry was used to detect proportion of Th17 and Treg subsets in peripheral blood of mice in each group

表4 各組小鼠外周血Th17/Treg比較（±s，n=12）Tab.4 Comparison of Th17/Treg in peripheral blood of mice in each group（xˉ±s，n=12）

表4 各組小鼠外周血Th17/Treg比較（±s，n=12）Tab.4 Comparison of Th17/Treg in peripheral blood of mice in each group（xˉ±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone Th17/Treg 0.17±0.04 0.77±0.101）0.57±0.082）0.38±0.052）3）0.19±0.022）3）4）0.18±0.032）3）4）

2.7BA對小鼠血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-17及TGF-β水平的影響與對照組相比，模型組小鼠血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-17水平明顯升高（P＜0.05），TGF-β水平明顯降低（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-17水平降低，TGF-β水平升高，且BA低、中、高劑量組三組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，各指標(biāo)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表5。

表5 各組小鼠血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-17及TGF-β水平比較（±s，n=12，pg/ml）Tab.5 Comparison of serum levels of cytokines TNF-α，IL-6，IL-17 and TGF-β in each group（±s，n=12，pg/ml）

表5 各組小鼠血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-17及TGF-β水平比較（±s，n=12，pg/ml）Tab.5 Comparison of serum levels of cytokines TNF-α，IL-6，IL-17 and TGF-β in each group（±s，n=12，pg/ml）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone TNF-α 37.62±2.52 107.57±12.151）79.84±7.682）58.53±4.472）3）39.01±3.022）3）4）38.97±2.982）3）4）IL-6 34.07±5.12 87.58±10.361）70.23±7.522）46.35±6.042）3）35.02±5.022）3）4）34.87±5.032）3）4）IL-17 50.63±4.07 178.46±11.231）130.95±8.122）90.47±7.092）3）51.45±5.052）3）4）51.32±5.132）3）4）TGF-β 489.46±15.11 283.42±8.321）354.13±10.112）410.37±12.252）3）484.16±16.032）3）4）485.27±17.052）3）4）

2.8BA對小鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響與對照組相比，模型組小鼠肺組織TLR4、MyD88、核NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠肺組織TLR4、MyD88、核NF-κB p65蛋白表達(dá)水平降低，且BA低劑量組、BA中劑量組、BA高劑量組三組之間呈劑量依賴性（P＜0.05）。BA高劑量組與地塞米松組相比，各指標(biāo)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖3、表6。

圖3 免疫印跡檢測各組小鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白表達(dá)Fig.3 Expression of TLR4/NF-κB pathway related proteins in lung tissue of mice in each group was detected by Western blot

表6 各組小鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)水平比較（xˉ±s，n=12）Tab.6 Comparison of relative expression levels of TLR4/NF-κB pathway related proteins in lung tissues of mice in each group（±s，n=12）

表6 各組小鼠肺組織TLR4/NF-κB通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)水平比較（xˉ±s，n=12）Tab.6 Comparison of relative expression levels of TLR4/NF-κB pathway related proteins in lung tissues of mice in each group（±s，n=12）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with model group，2）P＜0.05；compared with BA low dose group，3）P＜0.05；compared with BA medium dose group，4）P＜0.05.

Groups Control Model BA low dose BA medium dose BA high dose Dexamethasone TLR4/GAPDH 0.20±0.04 1.97±0.341）1.18±0.252）0.71±0.122）3）0.21±0.052）3）4）0.22±0.042）3）4）MyD88/GAPDH 0.09±0.02 1.28±0.211）0.69±0.162）0.36±0.082）3）0.11±0.032）3）4）0.10±0.022）3）4）Nuclear NF-κB p65/PCNA 0.21±0.05 2.34±0.411）1.49±0.312）0.92±0.232）3）0.23±0.062）3）4）0.22±0.052）3）4）

3 討論

膿毒癥在臨床中屬于危急重癥，病情進(jìn)展迅速，患者死亡率高，合并急性肺損傷是膿毒癥患者最常見的并發(fā)癥，可導(dǎo)致患者肺功能衰竭，嚴(yán)重威脅其生命安全，因此防治急性肺損傷是臨床治療膿毒癥需解決的重點(diǎn)措施［1，13］。Th17/Treg平衡向Th17轉(zhuǎn)移失衡可造成免疫功能障礙，Th17合成分泌的促炎因子IL-17水平升高，Treg合成分泌的抑炎因子TGF-β水平降低，誘導(dǎo)劇烈的炎癥與氧化應(yīng)激，是引發(fā)急性肺損傷的關(guān)鍵致病基礎(chǔ)［2-3，14］。脂多糖屬于一種內(nèi)毒素，腹腔注射后會引發(fā)嚴(yán)重的炎癥及氧化應(yīng)激，導(dǎo)致休克、多器官功能衰竭等癥狀，與人類膿毒癥的病理過程相似，常用于制備膿毒癥動物模型［15］。

本研究采用腹腔注射脂多糖的方法誘導(dǎo)建立膿毒癥急性肺損傷小鼠模型，結(jié)果顯示，模型組小鼠肺泡萎縮，肺泡壁變厚，肺間質(zhì)充血、水腫，并伴隨大量炎癥細(xì)胞浸潤，肺組織呈現(xiàn)明顯的病理損傷，肺W/D、動脈血?dú)庵笜?biāo)PaCO2、Th17/Treg、血清促炎因子IL-6、IL-17與TNF-α、肺組織氧化應(yīng)激標(biāo)志物MDA含量明顯升高，SOD含量、血清抑炎因子TGF-β水平明顯降低，另外動脈血?dú)庵笜?biāo)PaO2、OI亦明顯降低，表明脂多糖可上調(diào)促炎因子表達(dá)，引發(fā)嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，提高氧化應(yīng)激水平，導(dǎo)致肺水腫和肺組織損傷，損害肺功能，提示模型建立成功。

BA是黃芩根部含有的活性成分，具有降血脂、消炎抗菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等廣泛的藥理功效，可抑制冠心病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者機(jī)體炎癥反應(yīng)，改善其臨床癥狀，BA還可顯著降低新生大鼠肺組織Akt和NF-κB P65蛋白磷酸化水平，減輕其低氧誘導(dǎo)的肺損傷［16-17］。本研究結(jié)果顯示，以BA處理膿毒癥急性肺損傷小鼠，可減輕其肺組織病理損傷，降低肺W/D、動脈血?dú)庵笜?biāo)PaCO2、Th17/Treg、血清TNF-α、IL-6及IL-17水平、肺組織MDA水平，升高動脈血?dú)庵笜?biāo)PaO2、OI、血清TGF-β水平、肺組織SOD水平，且呈劑量依賴性，表明BA可降低膿毒癥小鼠氧化應(yīng)激水平，抑制炎癥反應(yīng)，促使Treg/Th17平衡向Treg偏移，緩解肺水腫，減輕肺組織損傷，改善肺功能，并隨劑量升高而作用增強(qiáng)。

TLR4/NF-κB通路是調(diào)控氧化應(yīng)激、炎癥、免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵信號通路，下調(diào)TLR4表達(dá)可抑制NF-κB向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，調(diào)控Th17/Treg免疫平衡，修復(fù)結(jié)腸炎小鼠體內(nèi)其向Th17的偏移，還能阻止炎癥因子表達(dá)，進(jìn)而抑制炎癥，減輕急性肺損傷，并改善慢性阻塞性肺疾病癥狀，還可修復(fù)小鼠Th17/Treg平衡向Th17偏移，緩解結(jié)腸炎小鼠臨床癥狀［4-6，18］，由此推測調(diào)控TLR4/NF-κB信號傳導(dǎo)可能是BA減輕膿毒癥小鼠急性肺損傷的藥理機(jī)制，本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組小鼠肺組織MyD88、TLR4及核NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯升高，經(jīng)BA處理后，上述蛋白表達(dá)水平降低，且BA各組之間呈劑量依賴性，表明BA可抑制TLR4/NF-κB通路表達(dá)，減輕膿毒癥小鼠急性肺損傷，修復(fù)其肺功能。

綜上所述，BA可抑制TLR4表達(dá)，減弱NF-κB核轉(zhuǎn)移，降低氧化應(yīng)激水平，阻止炎癥發(fā)生及進(jìn)展，修復(fù)Treg/Th17平衡向Th17的偏移，緩解肺水腫及肺組織損傷，減輕肺功能衰竭癥狀，下調(diào)TLR4/NF-κB信號通路表達(dá)可能是其起效的分子機(jī)制之一，但本研究只做了初步研究，其更確切詳盡的作用機(jī)制還需后續(xù)進(jìn)行深入研究。