蔡 敏，彭小媚，程 銘

（賀州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 賀州 542800）

先兆流產(chǎn)是指女性在妊娠28 周前先出現(xiàn)少量陰道流血，后出現(xiàn)陣發(fā)性下腹痛或腰痛，盆腔檢查提示宮口未開、胎膜完整，無妊娠物排出，子宮大小與孕周相符的一種表現(xiàn)[1-2]。先兆流產(chǎn)孕婦若癥狀持續(xù)加重，可發(fā)展為難免流產(chǎn)。研究報道，染色體異常是引起先兆流產(chǎn)的主要原因，包括染色體數(shù)量異常和結(jié)構(gòu)異常，在早期自然流產(chǎn)中有50% ～60% 的妊娠物中有染色體異常，夫婦中有1 人染色體異常即可傳至后代，導(dǎo)致流產(chǎn)或反復(fù)流產(chǎn)[3-4]。因此，現(xiàn)階段對先兆流產(chǎn)孕婦進(jìn)行染色體核型分析逐漸引起研究者的關(guān)注。染色體核型分析是以分裂中期染色體為研究對象，根據(jù)染色體的長度、著絲點(diǎn)位置、長短臂比例和隨體的有無等特征，借助顯帶技術(shù)對染色體進(jìn)行分析、比較、排序與編號，根據(jù)染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目的變異情況進(jìn)行診斷，可為細(xì)胞遺傳分類、物種間親緣關(guān)系及染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)變異的研究提供理論依據(jù)[5-6]。外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)是染色體檢測的常用方法。據(jù)報道，外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)在不孕不育和生殖科的臨床診療中已取得諸多成效，但在先兆流產(chǎn)診療中應(yīng)用的報道還相對較少[7-8]。故本研究對先兆流產(chǎn)孕婦的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析結(jié)果進(jìn)行探討，旨在為臨床優(yōu)生優(yōu)育、保胎護(hù)胎提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015 年1 月至2021 年1 月在我院生殖中心就診的先兆流產(chǎn)孕婦514 例及同期進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢的健康孕婦514 例作為研究對象。將其中514 例先兆流產(chǎn)孕婦作為試驗(yàn)組，將其中514 例健康孕婦作為對照組。病例的納入標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)組孕婦的病情符合先兆流產(chǎn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，需要予以保胎等相關(guān)處理；對研究內(nèi)容知情，并簽署了知情同意書。病例的排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心、肝、腎等器官功能不全；合并有惡性腫瘤；既往有流產(chǎn)史。兩組孕婦的一般資料相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。本研究已通過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

表1 兩組孕婦一般資料的比較

1.2 方法

所有入組孕婦均行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，并于G顯帶后行外周染色體核型分析，具體的檢測流程是：在無菌條件下采集孕婦的肘正中靜脈血3mL，將血液標(biāo)本置于外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基中，并在37℃的環(huán)境下培養(yǎng)66 ～68h。之后在培養(yǎng)基中加入秋水仙素，繼續(xù)培養(yǎng)72h 后行離心處理（轉(zhuǎn)速為1500r/min，離心時間為10min）。收集培養(yǎng)物，用0.075% 的氯化鉀（KCL）低滲處理35min，加入固定液固定30min 后進(jìn)行制片和染色顯帶。于G 顯帶后行外周染色體核型分析，每個病例于油鏡下計數(shù)30 個中期分裂相，分析5 ～8 個核型，異常標(biāo)本加倍至50 個核型，根據(jù)細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制[10]進(jìn)行外周血染色體核型分析和命名。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組孕婦染色體核型異常的發(fā)生率。觀察試驗(yàn)組中染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦與染色體數(shù)目異常孕婦的具體情況。觀察試驗(yàn)組中多態(tài)性異常核型孕婦的具體情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對本研究中先兆流產(chǎn)孕婦的臨床資料進(jìn)行整理與分析，滿足正態(tài)分布且方差齊的計量資料采用±s表示，用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料用% 表示，用χ2 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組孕婦染色體核型異常發(fā)生率的比較

對兩組孕婦進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析的結(jié)果顯示，試驗(yàn)組中共檢出105 例染色體核型異常者，其中染色體結(jié)構(gòu)異常者有99 例，染色體數(shù)目異常者有6 例；對照組中共檢出5 例染色體核型異常者，均為多態(tài)性核型。試驗(yàn)組孕婦染色體核型異常的發(fā)生率為20.43%，顯著高于對照組孕婦的0.97%（P＜0.05）。詳見表2。

表2 兩組孕婦染色體核型異常發(fā)生率的比較[例（%）]

2.2 試驗(yàn)組中99 例染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦的具體情況分析

在試驗(yàn)組99 例染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦中，多態(tài)性異常核型孕婦最多，占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的65.71%，相互易位核型、羅伯遜易位核型、倒位核型孕婦分別占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的17.14%、9.52%、1.90%。詳見表3。

表3 試驗(yàn)組中99 例染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦的具體情況分析（%）

2.3 試驗(yàn)組中6 例染色體數(shù)目異常孕婦的具體情況分析

在試驗(yàn)組6 例染色體數(shù)目異常孕婦中，三體型異常核型、單體型異常核型、嵌合體型異常核型孕婦分別有3 例、2 例、1 例，分別占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的2.86%、1.90%、0.95。詳見表4。

表4 試驗(yàn)組中6 例染色體數(shù)目異常孕婦的具體情況分析（%）

2.4 試驗(yàn)組中69 例多態(tài)性異常核型孕婦的具體情況分析

在試驗(yàn)組69 例多態(tài)性異常核型孕婦中，D/G 組染色體隨體區(qū)變異孕婦共有32 例（其中13、14、15、21、22 號染色體變異孕婦分別有12 例、3 例、9例、4 例、4 例），占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的30.48%；1、5、9、16 號染色體變異孕婦共有24 例（其中次縊痕增加包括1qh+、5qh+、9qh+、16qh+ 孕婦分別有5 例、5 例、8 例、6 例），占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的22.86%；Y 染色體異染色質(zhì)變異孕婦共有13 例（其中Yqh+、Yqh-孕婦分別有7 例、6 例），占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的12.38%。詳見表5。

表5 試驗(yàn)組中69 例多態(tài)性異常核型孕婦的具體情況分析（%）

3 討論

導(dǎo)致先兆流產(chǎn)發(fā)生的原因較多，目前臨床上多認(rèn)為胚胎、母體、父親及環(huán)境因素與先兆流產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)，保胎治療是其常規(guī)的治療方案[11]。先兆流產(chǎn)孕婦若陰道流血增多或腹痛加劇，導(dǎo)致不可避免的流產(chǎn)時，多需要及時終止妊娠。早期進(jìn)行染色體檢測對促進(jìn)優(yōu)生優(yōu)育有重要的意義。本研究中進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析的結(jié)果顯示，試驗(yàn)組孕婦染色體核型異常的發(fā)生率為20.43%，顯著高于對照組孕婦的0.97%（P＜0.05）。故推測先兆流產(chǎn)的發(fā)生與母體染色體核型異常有關(guān)，尤其與多態(tài)性核型關(guān)系密切。染色體多態(tài)性是結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)中重復(fù)的DNA 序列，具有良好的密集型和固縮性，在穩(wěn)定姐妹染色單體的分離與結(jié)合、同源染色體的配對中有一定作用，其異常表現(xiàn)為同源染色體大小、形態(tài)或著色強(qiáng)度的差異，且有明顯的生物遺傳效應(yīng)。研究指出，先兆流產(chǎn)孕婦的染色體多態(tài)性常發(fā)生于9 號染色體，證實(shí)了多態(tài)性異常核型與先兆流產(chǎn)結(jié)局有關(guān)[12]。分析原因可能與染色體的生長、分裂過程有關(guān)，母體中多態(tài)性染色體會增加配子在減數(shù)分裂過程中的不穩(wěn)定性，直接影響受精及胎兒發(fā)育的過程，提升了先兆流產(chǎn)的發(fā)生風(fēng)險。相互易位與羅伯遜易位核型對先兆流產(chǎn)亦有重要影響。劉芳[13]、邱峰龍等[14]研究報道，約有4% 的先兆流產(chǎn)孕婦經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)有染色體核型改變，包括平衡易位、羅伯遜易位、染色體嵌合與倒位。其中染色體相互易位是指兩種不同染色體的片段發(fā)生重新排列，雖然在個體上進(jìn)行了重新排列，但基因數(shù)量未發(fā)生明顯變化，故而胚胎發(fā)育上相對正常。然而相互易位的染色體在減數(shù)分裂過程中經(jīng)分離、配對與互換后可產(chǎn)生18 種合子，除去其中1 種正常核型、1 種平衡易位外，余下的染色體均為部分三體或單體的不平衡易位，導(dǎo)致受精卵結(jié)合后由于遺傳物質(zhì)的不平衡難以完成胚胎發(fā)育的生命活動，故而發(fā)生流產(chǎn)。本研究中入組的514 例試驗(yàn)組孕婦染色體相互易位的發(fā)生率為3.50%，顯著高于正常孕婦。羅伯遜易位也是臨床上多見的染色體重排，是發(fā)生于近端著絲粒染色體的一種易位形式，指兩個近端著絲粒染色體在著絲粒部位發(fā)生斷裂后，二者的長臂于著絲粒處接合并形成一條由長臂構(gòu)成的衍生染色體，其斷臂在構(gòu)成小染色體后于第二次分裂時丟失[15]。小染色體的全部基因均表達(dá)在前者的長臂染色體中，因此羅伯遜易位中只有45 條染色體，其表型多為正常，但在形成配子時可發(fā)生異常，引起先兆流產(chǎn)或胎兒死亡。本研究中入組的514 例試驗(yàn)組孕婦染色體羅伯遜易位的發(fā)生率為1.95%，顯著高于正常孕婦。同源性羅伯遜易位孕婦產(chǎn)生的胚胎染色體多為單體或三體形式，其常于妊娠早期發(fā)生流產(chǎn)；在非同源性羅伯遜易位孕婦的胎兒中，僅有1/3 胎兒可發(fā)育為正常新生兒，余下2/3 胎兒多為畸形兒或發(fā)生流產(chǎn)。

本研究的結(jié)果顯示，在試驗(yàn)組99 例染色體結(jié)構(gòu)異常孕婦中，多態(tài)性異常核型孕婦最多，占65.71%，而相互易位核型、羅伯遜易位核型、倒位核型孕婦分別占17.14%、9.52%、1.90%。染色體倒位（inversion）指同一條染色體發(fā)生兩處斷裂，其中間部分倒轉(zhuǎn)180°后重新連接，若斷裂處發(fā)生于染色體其中一條臂上則稱為臂內(nèi)倒位，若發(fā)生于長短臂之間的絲粒區(qū)則稱為臂間倒位[16]。臂內(nèi)倒位時兩條染色體的長度不發(fā)生變化，臂間倒位時兩條染色體的長臂與短臂均出現(xiàn)遞減。染色體倒位多見于9 號染色體，故而inv(9)具有基因多態(tài)性，但與遺傳物質(zhì)改變無關(guān)，因此不會產(chǎn)生遺傳效應(yīng)。既往的報道指出，inv(9) 在不孕不育、流產(chǎn)和出生畸形人群中的水平顯著升高，而染色體臂間倒位片段的長度與不良妊娠結(jié)局關(guān)系密切，臂間倒位的片段越長，形成交叉環(huán)的幾率越大，其產(chǎn)生不平衡配子的相對概率越小，故而活產(chǎn)率也更高[17]。本研究的結(jié)果顯示，在試驗(yàn)組6 例染色體數(shù)目異常孕婦中，三體型異常核型、單體型異常核型、嵌合體型異常核型孕婦分別有3 例、2 例、1 例，分別占2.86%、1.90%、0.95%。表明先兆流產(chǎn)中常染色體三體型與性染色體單體型均為先兆流產(chǎn)染色體數(shù)目異常核型的主要類型。既往的研究發(fā)現(xiàn)，染色體三體和單體型異常孕婦具有較高的自然流產(chǎn)率[18]。這與本研究中的部分觀點(diǎn)相似。分析其原因在于，父親或母親在配子形成時受精卵于分裂過程中出現(xiàn)了染色體的不分離現(xiàn)象，導(dǎo)致該染色體異常增多1 條或異常減少1 條，即出現(xiàn)三體型或單體型染色體。本研究的結(jié)果顯示，在試驗(yàn)組69 例多態(tài)性異常核型孕婦中，D/G 組染色體隨體區(qū)變異孕婦共有32 例，1、5、9、16 號染色體變異孕婦共有24 例，Y 染色體異染色質(zhì)變異孕婦共有13 例。染色體多態(tài)性又稱為異態(tài)性，指正常人群行染色體檢查中所發(fā)現(xiàn)的微小變異。既往有研究認(rèn)為，在流產(chǎn)人群中染色體多態(tài)性具有較高的發(fā)病率[19]。本研究中入組的514 例試驗(yàn)組孕婦中有69 例孕婦出現(xiàn)了染色體多態(tài)性，占組內(nèi)染色體核型異常孕婦總數(shù)的71.13%。故考慮染色體多態(tài)性與先兆流產(chǎn)關(guān)系密切。染色體多態(tài)性具有明顯的生物遺傳效應(yīng)，常僅涉及一對同源染色體中的一個。例如，染色體D/G 組的隨體增加、減少或重復(fù)、短臂的長短變異，1、9、16 號等染色體著絲粒區(qū)熒光強(qiáng)度變異、次縊痕區(qū)的加長或縮短等，以及Y 染色體長臂異染色質(zhì)部分長度的變異。染色體隨體變異與孕婦的不良孕產(chǎn)史關(guān)系密切，故而在本研究中參與先兆流產(chǎn)的發(fā)生。分析其原因可能與染色體隨體變異的生理機(jī)制有關(guān)。染色體在分裂的過程中阻礙了紡錘絲與著絲粒的緊密關(guān)系，使染色體發(fā)生分離，而Y 染色體多態(tài)性與長臂遠(yuǎn)端異染色質(zhì)部分（q12）的長度有關(guān)。具體而言，Y 染色體多態(tài)性與異染色部分DNA 序列的缺失、重復(fù)或螺旋化有關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為該多態(tài)性差異主要與孕婦及其配偶所在的種族與地區(qū)差異有關(guān)[20]。而Y 染色體長臂差異引起流產(chǎn)的臨床效應(yīng)近些年也逐漸引起人們的關(guān)注，分析其機(jī)制可能是DNA 序列因高度重復(fù)導(dǎo)致基因功能喪失，影響了精子的正常發(fā)育和基因表達(dá)，導(dǎo)致受精卵在母體妊娠期間發(fā)育不足，進(jìn)而導(dǎo)致先兆流產(chǎn)的發(fā)生。因此，在備孕期間不單應(yīng)關(guān)注母體的染色體水平，其配偶的Y 染色體基因檢測也應(yīng)引起足夠的重視。

綜上所述，先兆流產(chǎn)孕婦染色體核型異常的發(fā)生率較高。臨床醫(yī)師應(yīng)重視染色體異常的遺傳學(xué)因素對先兆流產(chǎn)造成的影響，及時對孕早期孕婦行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析，分辨染色體的結(jié)構(gòu)、數(shù)目和多態(tài)性變化，早期識別并干預(yù)先兆流產(chǎn)。