李永昌

（濟(jì)南市第五人民醫(yī)院消化科，山東濟(jì)南 250011）

炎癥性腸炎（inflammatory bowel disease，IBD）是一種病因不明的慢性腸道炎癥性疾病。目前臨床認(rèn)為IBD發(fā)病機(jī)制主要是免疫系統(tǒng)受到外界刺激，或體內(nèi)平衡失調(diào)，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)劇烈的炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致腸道黏膜受累[1]。IBD主要分為潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩病（Crohn’s disease，CD），因腸道病變類型和病變部位不同，其臨床表現(xiàn)也不同[2]。UC以腹瀉、黏液膿血便為常見(jiàn)癥狀，偶有腹痛，內(nèi)鏡下腸道病變主要以潰瘍性病變?yōu)橹?，病灶部位黏膜可伴出血、糜爛，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自發(fā)性出血，深度糜爛，甚至出現(xiàn)穿孔性病變[3]。CD常以腹痛、腹部包塊等為首發(fā)癥狀，內(nèi)鏡下主要以增生性改變?yōu)橹?，病灶出可?jiàn)鋪路石樣改變，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致腸梗阻的發(fā)生[4]。本研究探究IBD患者治療期間的白細(xì)胞介素-6（IL-6）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子-3（STAT-3）信號(hào)通路和IBD患者疾病活動(dòng)度的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年7月至2021年7月濟(jì)南市第五人民醫(yī)院收治的60例IBD患者納入IBD組，根據(jù)疾病的不同分為UC亞組（30例，潰瘍性結(jié)腸炎）和CD亞組（30例，克羅恩?。?，另選取同期院內(nèi)30名健康體檢者為研究對(duì)象納入對(duì)照組，進(jìn)行回顧性分析。CD亞組患者中男性16例，女性14例；年齡23～62歲，平均年齡（42.26±17.42）歲；病程1～10年，平均病程（6.42±1.25）年；病程1～3年者20例，病程＞3年者10例；病變部位：回腸8例，回腸末8例，回結(jié)腸11例，上消化道3例；活動(dòng)度按簡(jiǎn)化疾病活動(dòng)指數(shù)（CDAI）[5]評(píng)估：緩解期（＜150分）7例，輕度活動(dòng)期（150～220分）9例，中度活動(dòng)期（221～450分）13例，重度活動(dòng)期（＞450分）1例；吸煙史18例。UC亞組患者中男性17例，女性13例；年齡23～62歲，平均年齡（42.74±17.86）歲；病程1～11年，平均病程（6.81±1.36）年；病程1～3年者20例，病程＞3年者10例；病變部位：回腸7例，回腸末9例，回結(jié)腸12例，上消化道2例；活動(dòng)度采用Sutherland疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）[6]評(píng)估：輕度活動(dòng)期（3～5分）8例，中度活動(dòng)期（6～9分）15例，重度活動(dòng)期（11～12分）7例；吸煙史17例。對(duì)照組研究對(duì)象中男性17名，女13名；年齡23～62歲，平均年齡（42.74±18.86）歲。3組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)濟(jì)南市第五人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。IBD組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)》[7]中IBD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②非細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性吸血蟲(chóng)病、腸結(jié)核等感染性結(jié)腸病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期婦女；②患有自身免疫系統(tǒng)疾病者；③患有血液系統(tǒng)疾病者；④患有惡性腫瘤；⑤患有慢性肝腎疾病者；⑥合并嚴(yán)重心腦肺疾病；⑦患有精神疾病者。

1.2 檢測(cè)方法 ①通過(guò)內(nèi)鏡（江蘇德朗電子設(shè)備有限公司，型號(hào)：wl-200）檢查，收集所有研究對(duì)象治療前和治療14周后的結(jié)腸鏡檢查結(jié)果，利用全自動(dòng)免疫分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司，型號(hào)：UniCel DxI800）、采用免疫組織化學(xué)Elivision二步法檢測(cè)被檢組織中的白細(xì)胞介素-6（IL-6）和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子-3（STAT-3）表達(dá)水平。檢測(cè)時(shí)嚴(yán)格按照試劑盒（上海艾博生物有限公司）操作說(shuō)明進(jìn)行，一抗抗體（abcam公司）分別采用鼠抗人IL-6和STAT-3，二抗采用即用型羊抗兔二抗抗體（abcam公司），用冷磷酸緩沖鹽溶液[PBS，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司]洗滌兩次，采用緩沖液（binding buffer，武漢普諾賽生命科技有限公司）重懸，并使其終濃度為1×106 cells/mL。接下來(lái)，加入膜聯(lián)蛋白-V-FITC（AnnexinV-FITC，北京百普賽斯生物科技股份）染色液和碘化丙啶（PI，上海士鋒生物科技有限公司）染色液在室溫下染色細(xì)胞15 min，顯微鏡（上海無(wú)陌光學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：WMS-1038）下觀察IL-6和STAT-3染色細(xì)胞計(jì)數(shù)情況。②治療前及治療14周后通過(guò)靜脈穿刺抽取所有研究對(duì)象清晨空腹血液2管（5 mL），以500 r/mim轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層血清，置于-70 ℃環(huán)境下保存待檢。采用全自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平，采用全自動(dòng)學(xué)成分析儀（奧地利格雷那公司，型號(hào)：Vaeuette）檢測(cè)紅細(xì)胞沉降率（ESR）水平，采用全血細(xì)胞分析儀（德國(guó)西門(mén)子公司，型號(hào)：Bayer Advia 2120）檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)（PLT）水平。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較各組IL-6、STAT-3水平及炎癥因子。②比較CD、UC亞組疾病不同活動(dòng)期IL-6、STAT-3水平及炎癥因子。③分析各指標(biāo)與CD亞組、UC亞組疾病活動(dòng)度之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示，多組間比較行方差分析，兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較 IBD組、CD亞組及UC亞組患者IL-6、STAT-3、hs-CRP、ESR、PLT水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；UC亞組與CD亞組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組患者IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

表1 各組患者IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

注：CD：克羅恩?。籌L-6：白細(xì)胞介素-6；STAT-3：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子-3；hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；PLT：血小板計(jì)數(shù)；ESR：紅細(xì)胞沉降率。

組別 例數(shù) IL-6(pg/mL) STAT-3 hs-CRP(mg/L) PLT(×109/L) ESR(mm/h)IBD組 60 28.34±1.53 2.64±0.22 22.43±3.42 349.23±83.54 17.42±5.54 UC亞組 30 29.54±1.35 2.72±0.25 20.32±3.24 323.24±84.54 16.75±5.63 CD亞組 30 28.42±1.53 2.59±0.20 21.33±3.23 315.42±102.23 16.35±4.23對(duì)照組 30 12.55±1.54 0.83±0.75 5.34±1.32 204.32±65.73 9.94±3.53 F值 929.857 174.834 233.721 20.123 16.395 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 CD、UC亞組疾病不同活動(dòng)期患者IL-6、STAT-3及炎癥因子比較 CD亞組中非中、重度 活 動(dòng) 組IL-6、STAT-3、hs-CRP、ESR、PLT水平均低于中、重度活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；UC亞組中非中、重度活動(dòng)組IL-6、STAT-3、hs-CRP、ESR水平均低于中、重度活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；UC亞組中兩組PLT水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2、表3。

表2 CD亞組疾病不同活動(dòng)期IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

表2 CD亞組疾病不同活動(dòng)期IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

注：IL-6：白細(xì)胞介素-6；STAT-3：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子-3；hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；PLT：血小板計(jì)數(shù)；ESR：紅細(xì)胞沉降率。

組別 例數(shù) IL-6(pg/mL) STAT-3 hs-CRP(mg/L) PLT(×109/L) ESR(mm/h)非中、重度活動(dòng)組 16 11.88±8.25 1.23±0.41 26.42±22.41 271.34±64.25 33.43±25.23中、重度活動(dòng)組 14 53.67±15.35 1.68±0.56 55.34±27.43 354.54±62.43 64.32±26.42 t值 9.089 3.029 3.132 3.593 3.262 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表3 UC亞組疾病不同活動(dòng)期IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

表3 UC亞組疾病不同活動(dòng)期IL-6、STAT-3水平及炎癥因子比較

注：UC：潰瘍性結(jié)腸炎；IL-6：白細(xì)胞介素-6；STAT-3：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子-3；hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；PLT：血小板計(jì)數(shù)；ESR：紅細(xì)胞沉降率。

組別 例數(shù) IL-6(pg/mL) STAT-3 hs-CRP(mg/L) PLT(×109/L) ESR(mm/h)非中、重度活動(dòng)組 12 7.35±7.14 0.98±0.12 7.34±9.44 274.23±65.34 18.32±13.42*中、重度活動(dòng)組 18 8.24±3.25 1.43±0.27 6.43±2.11 315.32±101.53 37.54±16.43 t值 3.455 5.404 3.058 1.238 3.367 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.3 各指標(biāo)與CD亞組、UC亞組疾病活動(dòng)度之間的相關(guān)性 經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，IL-6、STAT-3、hs-CRP、ESR與CD亞組、UC亞組疾病活動(dòng)度之間呈正相關(guān)（P＜0.05），PTL與CD亞組活動(dòng)度呈正相關(guān)（P＜0.05），PTL與UC亞組活動(dòng)度無(wú)相關(guān)性（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 各指標(biāo)與CD亞組、UC亞組疾病活動(dòng)度之間的相關(guān)性

3 討論

IBD是一種慢性腸道非特異性炎癥疾病，近幾十年來(lái)，其發(fā)病率逐漸增高，IBD逐漸受到人們的關(guān)注，目前為止，臨床公認(rèn)IBD的病因主要是包括自身免疫性因素及腸道菌群失調(diào)[8]。既往研究發(fā)現(xiàn)，依靠反應(yīng)炎癥進(jìn)展和程度的傳統(tǒng)指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)疾病的發(fā)生和進(jìn)展已無(wú)法滿足臨床診治的需求[9]。同其他免疫性疾病相似，IBD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，在IBD患者外周血中可見(jiàn)大量被激活的T淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞主要分泌IL-6、IL-10、IL-17、IL-24和TNF-α等，T淋巴細(xì)胞在機(jī)體中可分泌促炎因子，從而參與機(jī)體炎癥反應(yīng)；STAT-3是STAT蛋白家族的成員之一，受到細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子刺激后，STAT-3參與細(xì)胞的生長(zhǎng)于凋亡，它可參加細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活，且STAT-3是IL-6發(fā)揮促炎性反應(yīng)、促腫瘤血管新生的主要通路[10]。本研究結(jié)果顯示，IL-6、STAT-3、hs-CRP、ESR與CD亞組、UC亞組疾病活動(dòng)度之間呈正相關(guān)，即其值水平越高，患者病情越嚴(yán)重。與上述研究結(jié)果相似。

IL-6是研究最早、應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞因子，是由單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生，主要表達(dá)于炎癥反應(yīng)，它可參與機(jī)體的免疫和生理過(guò)程，并且與炎癥、抗原特異性免疫反應(yīng)、細(xì)胞代謝、腫瘤等過(guò)程密切相關(guān)[11]。STAT-3是一種多功能的轉(zhuǎn)錄因子，能夠誘導(dǎo)多種炎癥相關(guān)基因產(chǎn)生，在研究中，IL-6通過(guò)誘導(dǎo)STAT-3磷酸化，STAT-3可誘導(dǎo)抗凋亡因子，并阻止炎癥因子凋亡，促進(jìn)IL-6細(xì)胞增殖，最終導(dǎo)致炎性反應(yīng)發(fā)生[12]。相關(guān)研究提示，STAT-3水平在UC和CD患者炎癥腸黏膜中高表達(dá)，且STAT-3升高水平與這些組織炎癥損傷程度呈正相關(guān)[13]。在本研究發(fā)現(xiàn)，IL-6與STAT-3與UC和CD患者的疾病活動(dòng)程度顯著相關(guān)。與上述研究相似。

hs-CRP為常見(jiàn)的一種血清標(biāo)志物，是反映炎癥反應(yīng)劇烈程度變化的重要指標(biāo)，當(dāng)其指標(biāo)升高時(shí)，提示患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)處于活動(dòng)期。有研究顯示，血清中hs-CRP可作為CD疾病活動(dòng)性的評(píng)價(jià)指標(biāo)，ESR是指一定條件下紅細(xì)胞沉降速度，可作為炎癥急性反應(yīng)的標(biāo)志物[14]；活化的PLT可釋放多種炎性介質(zhì)，產(chǎn)生氧自由基，導(dǎo)致組織損傷，PLT在IBD中的變化可體現(xiàn)疾病的活動(dòng)程度，即PLT呈顯著上升狀態(tài)時(shí)，IBD處于活動(dòng)期[15]。本研究結(jié)果顯示，hs-CRP、ESR、PLT水平與IBD呈正相關(guān)，提示hs-CRP、ESR、PLT水平也可輔助了解患者疾病活動(dòng)情況。

綜上所述，IL-6、STAT-3信號(hào)通路及hs-CRP、ESR、PT可幫助診斷疾病并判斷疾病所處時(shí)期。隨著臨床對(duì)信號(hào)通路的深入研究，有望成為治療IBD的新方法。但本研究存在一定局限性，研究變量及納入患者例數(shù)較少，期望之后進(jìn)行更深入的研究，以更準(zhǔn)確地得出于疾病的相關(guān)性及其影響因素。