謝宇，鄧倩曦

作為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，食管癌已成為全球關注的疾病。有調(diào)查顯示，在所有惡性腫瘤中，食管癌占比約為2%，其5年生存率僅為20%左右［1］。另有資料表明，全球范圍內(nèi)每年約有30萬死于食管癌，其中我國死于食管癌的人群占比高達40%［2］，可知食管癌對我國居民的生命造成了極大的威脅。但是目前人們對食管癌的發(fā)病機制認識尚淺，且臨床仍缺乏高效的抗腫瘤方案。有報道指出，影響食管癌預后的因素多，其中臨床分期、分化程度是主要的危險因素［3-4］。但是影響食管癌臨床分期、分化程度的因素仍需要進一步探討。白細胞介素-6（IL-6）/信號轉導子與轉激活子3（STAT3）通路是惡性腫瘤細胞增殖、凋亡調(diào)控的重要途徑，與食管癌、胃癌、肝癌等均緊密相關［5-8］。實驗顯示，對乳腺癌細胞進行基因干擾，可通過調(diào)控STAT3信號通路，下調(diào)磷酸化信號轉導子與轉激活子3（p-STAT3）水平增加細胞凋亡率、降低細胞存活率［9］。另有報道表明，對人食管癌細胞進行干預抑制IL-6/STAT3通路的活性，可通過下調(diào)二者的表達，降低p-STAT3水平，抑制B淋巴細胞瘤相關死亡啟動子（Bcl-xl）、細胞周期蛋白D1（CyclinD1）的活性提高其增殖抑制率和細胞凋亡率［10］。據(jù)此推測，IL-6/STAT3信號通路及其下游Bcl-xl、CyclinD1的表達可能參與食管癌的發(fā)生和發(fā)展。但該通路相關蛋白表達與食管癌臨床分期、分化程度的關系尚未完全明確，仍需進一步探討，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取綿陽市第三人民醫(yī)院（四川省精神衛(wèi)生中心）2018年10月至2020年7月收治的109例食管癌病人，男70例、女39例，年齡范圍35～78歲，年齡（59.15±10.17）歲，臨床分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期39例、Ⅲ期44例、Ⅳ期14例，腫瘤長徑范圍1.5～10.5 cm，腫瘤長徑（5.52±1.05）cm，有淋巴結轉移62例，病理類型：鱗癌98例（高分化18例、中分化59例、低分化21例）、腺癌8例（中分化3例、低分化5例）、小細胞癌3例（未分化3例）。本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 入選標準納入標準：①均經(jīng)病理學檢查證實罹患食管癌；②均實施手術或活檢，且均有癌組織、癌旁正常組織標本存檔；③病人均對本研究知情同意。

排除標準：①手術或活檢前1個月內(nèi)接受相關抗腫瘤治療者，如新輔助放化療等；②復發(fā)性食管癌或轉移性食管癌病人；③合并其他類型消化系統(tǒng)疾病者，如反流性食管炎等；④臨床分期或分化程度等臨床病理特征不明確者；⑤有意識障礙或精神障礙者。

1.3 方法IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1表達檢測：采用免疫組化法檢測癌組織和癌旁正常組織上述蛋白表達。待檢測組織均有石蠟包埋，連續(xù)切片（層厚4 μm），脫蠟并利用梯度濃度酒精水化，然后采用壓力鍋進行抗原熱修復。滴加鼠抗人IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1單克隆一抗工作液，需稀釋200倍，盡可能覆蓋組織，4℃孵育一抗過夜；滴加兔抗鼠IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1多克隆二抗工作液（以過氧化物酶標記），室溫孵育二抗4 h。滴加顯色劑，靜置5～10 min后以蒸餾水終止反應。吹干并采用中性樹膠封片，晾干后在高倍顯微鏡下閱片。染色程度：將無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0分、1分、2分、3分；陽性細胞率：將＜5%、≥5%且＜25%、≥25%且＜50%、≥50%且＜75%、≥75%分別記為0分、1分、2分、3分、4分。計算染色程度與陽性細胞率乘積，將結果為0、1～4、5～8、9～12者分別記為陰性、弱陽性、中等陽性、強陽性表達［11］。

1.4 觀察指標（1）對比癌組織和癌旁正常組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達；（2）對比不同臨床病理特征病人癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達；（3）分析IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達與臨床分期、分化程度的關系。

1.5 統(tǒng)計學方法將SPSS 22.0軟件作為統(tǒng)計學工具，單一樣本計數(shù)資料例（%）對比采用配對資料χ2檢驗，兩樣本計數(shù)資料例（%）對比采用χ2檢驗，等級相關性采用Spearman分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 癌組織與癌旁正常組織IL-6/STAT3通路相關蛋白表達癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達率均高于癌旁正常組織，均差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。典型病例組織相關蛋白免疫組化檢測結果見圖1。

表1 食管癌109例癌組織與癌旁正常組織IL-6/STAT3通路相關蛋白陽性表達率對比/例（%）

2.2 不同臨床病理特征病人癌組織IL-6/STAT3通路相關蛋白表達對比不同性別、老年與否、不同病理類型病人癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達率對比均差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤長徑≥5 cm、有淋巴結轉移、未/低分化病人癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達率均分別高于Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤長徑＜5 cm、無淋巴結轉移、中/高分化病人（P＜0.05），見表2。

表2 食管癌109例不同臨床病理特征病人癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達對比/例（%）

2.3 癌組織IL-6/STAT3通路相關蛋白表達與臨床分期、分化程度的關系癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達與臨床分期均呈正 相 關（r=0.81、0.83、0.79、0.72、0.71，P=0.010、0.007、0.005、0.018、0.023），與分化程度均呈負相關（r=-0.81、-0.79、-0.71、-0.70，P=0.011、0.019、0.023、0.038、0.040），“四格表”見表3。

表3 食管癌109例癌組織IL-6/STAT3通路相關蛋白表達與臨床分期、分化程度“四格表”/例

3 討論

食管癌的常見病因有遺傳易感性、化學致癌物質(zhì)接觸、微量元素缺乏、維生素缺乏、煙酒刺激、熱食熱飲、口腔不潔等［12-13］。在食管癌中，基因突變所致的細胞增殖與凋亡調(diào)控因子水平異常，可使得細胞增殖與凋亡被打破，引發(fā)疾病發(fā)生和預后不良［14-15］。

本研究中顯示癌組織IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達率均高于癌旁正常組織，提示食管癌的發(fā)生可能與IL-6/STAT3信號通路激活，使得二者蛋白表達及其下游的p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白表達水平升高有關。IL-6屬于一種多功能因子，在多種惡性腫瘤細胞中該因子有廣泛的生物學活性，如食管癌、肺癌、結直腸癌等。有研究顯示，IL-6可與其受體結合，其產(chǎn)物可激活胞質(zhì)細胞外信號激活因子，促進STAT3表達并增加該蛋白的磷酸化水平［16］。STAT3屬于信號傳導與轉錄因子蛋白家族成員，可以被不同的細胞因子受體激活。有報道發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中STAT3蛋白表達及p-STAT3水平均高于癌旁組織［17］，本研究與該報道相符，證實STAT3及其磷酸化水平很可能是食管癌發(fā)生的危險因素。Bcl-xl和CyclinD1均位于IL-6/STAT3通路的下游，前者屬于凋亡抑制蛋白，可通過維持內(nèi)環(huán)境、抑制細胞壞死等途徑減少細胞凋亡，且該蛋白還被證實可參與多種蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用進而抑制凋亡，如阻斷線粒體外膜破壞、干擾死亡誘導信號復合體的組裝、維持線粒體膜電位、控制活性氧自由基毒性發(fā)揮等［18］；后者是調(diào)控細胞周期G1期的特異性、關鍵性蛋白，而細胞周期是確保細胞進行生命活性的基本過程，CyclinD1蛋白表達可維持細胞生長和分裂，促進細胞增殖，相關研究表明CyclinD1蛋白對細胞增殖兼具內(nèi)源性和外源性作用，也是促進惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關鍵分子［19］。因此IL-6、STAT3、p-STAT3、Bclxl、CyclinD1蛋白陽性表達很可能均參與食管癌的發(fā)生。

本研究還發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達與臨床分期、腫瘤長徑、淋巴結轉移、分化程度均有關，且相關性分析也證實上述蛋白表達與臨床分期呈正相關，與分化程度呈負相關。IL-6/STAT3通路相關蛋白可通過多種途徑促進細胞增殖、抑制細胞凋亡，進而誘導細胞增殖與凋亡失衡，參與惡性腫瘤的發(fā)生。結合既往報道，推測IL-6/STAT3通路相關蛋白表達水平越高，促細胞增殖和抗細胞凋亡的作用越強烈，細胞的惡性潛能越高，因此可影響臨床分期和分化程度［20］。

綜上所述，食管癌組織中IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-xl、CyclinD1蛋白陽性表達率高，且上述蛋白表達與臨床分期呈正相關，與分化程度呈負相關，與腫瘤長徑、淋巴結轉移也均有關系。根據(jù)本研究結果與結論，推測可將抑制IL-6/STAT3通路的活性作為食管癌靶向治療的新思路，但如何開發(fā)新藥物并應用于臨床應作為后期研究的重點。