陳川河，劉嘉莉，張立蘭，趙 瑩，陶 聰，2

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193；2.嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)廣東實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642)

豬的脂肪沉積是復(fù)雜的經(jīng)濟(jì)性狀之一，可通過調(diào)節(jié)機(jī)體能量平衡而顯著影響豬的瘦肉率、飼料轉(zhuǎn)化率和肉品質(zhì)。傳統(tǒng)的育種方法、分子育種和DNA分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)對(duì)豬背膘厚和瘦肉率的遺傳改良均取得了很大進(jìn)展。目前雖已鑒定出一些與脂肪沉積相關(guān)的基因，如黑素皮質(zhì)素受體(MC4R)[1]、蘋果酸酶(ME1)[2]、瘦素受體(LEPR)[3]、胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)[4]、解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)[5]、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARγ)[6]、脂聯(lián)素(ADIPOQ)[7]、肌肉生長(zhǎng)抑制素(MSTN)[8]、UCP3[9]等，但對(duì)影響豬脂肪沉積的基因挖掘還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足。哺乳動(dòng)物的脂肪組織主要有存儲(chǔ)能量的白色脂肪組織(WAT)、與非戰(zhàn)栗產(chǎn)熱密切相關(guān)的棕色脂肪組織(BAT)以及由WAT在一定的刺激條件下生成的米色脂肪組織。棕色、米色脂肪能夠通過產(chǎn)熱消耗能量，已成為人類減肥相關(guān)研究的熱門靶點(diǎn)，也為降低豬的脂肪沉積提供了新的視角和思路。

血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)型激酶(SGKs)是絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶，包括SGK1、SGK2、SGK3 3個(gè)亞型。3種激酶均為離子通道活性、運(yùn)輸和轉(zhuǎn)錄的有效調(diào)節(jié)劑[10-12]。SGK1與SGK2均可調(diào)節(jié)膜蛋白的功能，如Na+/H+交換劑[13]，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[14-15]和腎臟近端腎小管細(xì)胞中的Na+通道[16-20]。SGK1或SGK3基因敲除小鼠均未觀察到明顯的表型[20-21]，表明SGK1和SGK3均不是生存所必需的。研究表明，SGK1在脂肪組織中表達(dá)，通過磷酸化影響其亞細(xì)胞定位，抑制轉(zhuǎn)錄因子叉頭框蛋白O1(FOXO1)的表達(dá)，激活脂肪細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)，從而促進(jìn)脂肪細(xì)胞的生成[22-24]。在小鼠體內(nèi)，Herms等[25]將SGK2基因鑒定為在BAT中選擇性表達(dá)的基因。SGK2基因在冷刺激的小鼠BAT中表達(dá)水平顯著升高，在WAT中無顯著差異[26]。在藏豬冷刺激后的腹股溝WAT中以及藏豬基質(zhì)血管成分細(xì)胞(SVF)體外分化得到的米色脂肪細(xì)胞中均檢測(cè)到SGK2基因高表達(dá)[27]。以上證據(jù)表明SGK2可能參與哺乳動(dòng)物BAT發(fā)育及其產(chǎn)熱功能，但是Park等[28]研究表明，SGK2基因全身性敲除小鼠體重?zé)o顯著變化，且小鼠在4 ℃冷刺激后體溫正常，β-3腎上腺素受體激動(dòng)劑刺激后能量代謝正常，表明SGK2不直接參與小鼠棕色/米色脂肪的產(chǎn)熱。目前，關(guān)于SGK2在米色脂肪發(fā)育及脂肪沉積中的功能意義還不清晰，尚沒有關(guān)于豬SGK家族基因序列信息和功能的研究報(bào)道，特別是在豬脂肪形成過程中SGK家族基因的表達(dá)分析鮮見報(bào)道。7日齡豬腹股溝脂肪處于早期發(fā)育階段，脂肪發(fā)育較旺盛；4月齡仔豬腹股溝脂肪趨于成熟，屬于發(fā)育的晚期階段。本研究以豬SVF細(xì)胞為試驗(yàn)材料，擴(kuò)增SGK家族基因序列，運(yùn)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)基因功能，并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究SGK家族基因在脂肪組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平，為研究SGK家族基因的調(diào)控功能、改善豬脂肪沉積提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 30日齡健康的巴馬豬和藏豬各10頭，分別購(gòu)自廣西瑤族自治縣豬場(chǎng)和西藏林芝地區(qū)豬場(chǎng)。屠宰30日齡巴馬豬，收集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、不同部位肌肉和脂肪組織；屠宰7日齡和4月齡巴馬豬，收集腹股溝脂肪組織，用液氮快速冷凍后―80 ℃保存?zhèn)溆?。?0日齡藏豬腹股溝脂肪分離獲得藏豬SVF細(xì)胞。

1.1.2 主要試劑及儀器 TRIzol購(gòu)自Invitrogen公司；反轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒均購(gòu)自TaKaRa公司；KOD FX、2×PCR Buffer for KOD FX、dNTPs均購(gòu)自東洋紡(上海)生物科技有限公司；胎牛血清、DMEM高糖培養(yǎng)基均購(gòu)自Gibco公司。冷凍離心機(jī)(5810R)購(gòu)自Eppendorf公司；電泳儀(DYY-6B)購(gòu)自北京六一儀器廠；超微量紫外分光光度計(jì)(NanoDrop 2000)購(gòu)自Thermo Scientific公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI7500)購(gòu)自Applied Biosystems公司；梯度PCR儀(C1000)購(gòu)自Bio-Rad公司。

1.1.3 培養(yǎng)基的配制 生長(zhǎng)培養(yǎng)基：1% 青-鏈霉素+10%胎牛血清+DMEM高糖培養(yǎng)基；誘導(dǎo)培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基+5 μg/mL胰島素+33 μmol/L生物素+17 μmol/L泛酸+0.25 mmol/L IBMX+0.1 μmol/L地塞米松+1 μmol/L羅格列酮+20 mmol/L HEPES；成熟培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基+5 μg/mL胰島素+33 μmol/L生物素+17 μmol/L泛酸+0.1 μmol/L地塞米松+1 μmol/L羅格列酮+20 mmol/L HEPES。

1.2 方法

1.2.1 藏豬SVF細(xì)胞的分離及其誘導(dǎo)分化 將30日齡藏豬處死后用75%酒精消毒，取出腹股溝脂肪組織，用含有青-鏈霉素的DPBS洗3遍；將WAT剪至1 mm3大小用膠原酶Ⅰ(1.5 mg/mL)在37 ℃消化30 min；消化后用生長(zhǎng)培養(yǎng)基終止消化；用70 μm一次性細(xì)胞篩過濾，將濾液收集到15 mL離心管中，1 500 r/min離心5 min；棄上清，加入5 mL紅細(xì)胞裂解液將底部沉淀輕柔吹打混勻，室溫放置5 min，1 500 r/min離心5 min；棄上清，加入DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)基將底部細(xì)胞吹打混勻后接種于培養(yǎng)皿，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2 d換1次液。細(xì)胞100%匯合后，繼續(xù)培養(yǎng)2 d(這種未分化的細(xì)胞定義為0 d)；更換為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，第5天半量換液為成熟培養(yǎng)基；第6天換為DMEM生長(zhǎng)培養(yǎng)基，之后每2 d換1次液；第10天收集細(xì)胞，―80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 豬SGK家族基因PCR擴(kuò)增及測(cè)序 TRIzol法提取體外分化第10天的藏豬SVF細(xì)胞RNA并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)GenBank中公布的豬(Susscrofa)SGK1(NM_001244459.1)、SGK2(XM_021078159.1)和SGK3(XM_021089284.1)基因序列，使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，引物信息見表1。引物均由北京擎科生物科技有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25 μL：2× PCR Buffer for KOD FX 12.5 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA 2 μL，KOD FX 0.5 μL，dNTPs 5 μL，ddH2O 3 μL。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性2 min；98 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，68 ℃延伸2 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)正確后，送北京擎科生物科技有限公司測(cè)序。

表1 引物信息

1.2.3 豬SGK家族基因生物信息學(xué)分析 采用ORF Finder工具進(jìn)行開放閱讀框預(yù)測(cè)分析；采用DNAMAN 7.0軟件比對(duì)GenBank中公布的豬SGK家族基因序列與測(cè)序得到的DNA序列，明確SGK家族基因的起始密碼子和終止密碼子及各基因的SNP位點(diǎn)；據(jù)測(cè)序結(jié)果得到推測(cè)的蛋白序列，使用在線軟件ExPASy(https:∥web.expasy.org/protparam/)分析豬SGK家族蛋白的理化性質(zhì)，包括其基因組序列的編碼序列、開放閱讀框、分子質(zhì)量、等電點(diǎn)、疏水性；利用在線軟件WOLF PSORT(https:∥wolfpsort.hgc.jp)進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)；利用在線軟件MapGen2Ch(http:∥mg2c.iask.in/ mg2c%5Fv2.0)繪制染色體定位圖譜；利用在線軟件GSDS 2.0(http:∥gsds.cbi.pku.edu.cn)分析SGK家族基因外顯子分布；從UniProt網(wǎng)站(https:∥www.uniprot.org)下載人、小鼠、大鼠、牛、雞和斑馬魚的SGK家族基因氨基酸序列以及上述擴(kuò)增的豬SGK家族基因完整ORF所編碼的氨基酸序列，用Mega X軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，校驗(yàn)參數(shù)Bootstrap值設(shè)置為1 000，其他為默認(rèn)值；SGK家族基因的結(jié)構(gòu)域信息(PF00069和PF00433)下載自Pfam數(shù)據(jù)庫(kù)(https:∥pfam.xfam.org)，利用在線軟件SMART(http:∥smart.emblhei-delberg.de)進(jìn)行確認(rèn)分析，將特征結(jié)構(gòu)域序列進(jìn)行序列比對(duì)及l(fā)ogo分析；使用在線軟件MEME(http:∥memesuite.org/tools/meme)對(duì)豬SGK蛋白的保守基序進(jìn)行分析，設(shè)置基序數(shù)量參數(shù)為5個(gè)，其余為默認(rèn)；采用DNAMAN 7.0軟件和在線軟件WebLogo(https:∥weblogo.berkeley.edu/logo.cgi)分析SGK家族基因的保守序列。

1.2.4 組織和細(xì)胞中基因表達(dá)分析 利用TRIzol法提取巴馬豬心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、背部肌肉、腿部肌肉、頸部脂肪、背部脂肪、腹股溝脂肪、腎周脂肪等組織及藏豬SVF和由SVF分化10 d的脂肪細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，檢測(cè)各組織中SGK家族基因的表達(dá)量，檢測(cè)細(xì)胞中SGK家族基因及成脂分化標(biāo)記基因PPARγ、C/EBPα的表達(dá)量。根據(jù)GenBank公布的豬SGK家族基因的mRNA序列(NM_001244459.1、XM_021078159.1、XM_021089284.1)，使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物，引物信息見表1。引物均由北京擎科生物科技有限公司合成。以18S rRNA為內(nèi)參，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)體系20 μL:SYBR Green Premix ExTaq10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL，DyeⅡ 0.4 μL，cDNA 0.8 μL，ddH2O 8 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火延伸34 s，共40個(gè)循環(huán)。用2-ΔΔCt法計(jì)算各基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異分析。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用GraphPad Prism 6.0軟件作圖。P<0.05表示差異顯著；P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 豬SGK家族基因擴(kuò)增及測(cè)序

由圖1可知，SGK1、SGK2和SGK3擴(kuò)增產(chǎn)物條帶單一、清晰，片段大小分別為1 296、1 104和1 473 bp，均與預(yù)期相符。測(cè)序結(jié)果證實(shí)SGK1、SGK2、SGK3 CDS區(qū)序列長(zhǎng)度均與PCR結(jié)果一致。通過ORF Finder工具進(jìn)行開放閱讀框預(yù)測(cè)分析，結(jié)果表明，SGK1、SGK2和SGK3基因分別編碼431、367和490個(gè)氨基酸。DNAMAN 7.0軟件分析表明，SGK家族基因起始密碼子均為ATG，SGK1基因的終止密碼子為TAG，SGK2和SGK3基因的終止密碼子為TGA。經(jīng)過與GenBank收錄的豬SGK家族基因序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，SGK1基因無SNP；SGK2基因存在2個(gè)SNPs位點(diǎn)；SGK3基因存在1個(gè)SNP位點(diǎn)，編碼氨基酸均未發(fā)生變化。上傳SGK2和SGK3基因CDS區(qū)序列至NCBI獲得GenBank登錄號(hào)：OM212064、OM212065。

M,DL1500 DNA Marker;1-3,SGK1,SGK2,SGK3

2.2 豬SGK家族基因的生物信息學(xué)分析

2.2.1 理化性質(zhì) 通過ExPASy軟件包對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，豬SGK家族蛋白分子質(zhì)量為41 402.32～56 412.39 u，等電點(diǎn)為6.45～8.71，SGK家族蛋白均為親水性蛋白，SGK1蛋白的等電點(diǎn)>7.0，為堿性蛋白，SGK2和SGK3為酸性蛋白。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果表明，SGK1和SGK2定位于細(xì)胞質(zhì)，SGK3定位于細(xì)胞核(表2)。由圖2可知，SGK1基因位于1號(hào)染色體，SGK2基因位于17號(hào)染色體，SGK3基因位于4號(hào)染色體。

圖2 豬SGK家族基因在染色體上的分布

表2 豬SGK家族基因的序列特征

2.2.2SGK家族基因結(jié)構(gòu)及保守基序分析 GSDS 2.0工具分析表明，SGK1、SGK2基因均有12個(gè)外顯子，SGK3基因有16個(gè)外顯子。SGK家族基因組序列最長(zhǎng)的是SGK3基因，長(zhǎng)度超過1 400 bp。利用MEME對(duì)3個(gè)SGK蛋白進(jìn)行保守基序鑒定，3個(gè)蛋白均含有基序1～5(圖3)。

A，豬SGK家族保守基序分布；B，基序logo分析

2.2.3 SGK家族蛋白結(jié)構(gòu)域組成及進(jìn)化樹分析 Pfam數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明，豬SGK家族中所有成員都含有特征保守結(jié)構(gòu)域，且該結(jié)構(gòu)域由258個(gè)氨基酸殘基組成，包括6個(gè)高度保守的組氨酸殘基(X)44-His-(X)13-His-(X)30-His-(X)26-His-(X)20-His-(X)116-His-(X)3，保守性高(圖4)。進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示，SGK家族成員均與豬和牛先聚為一支，再與人聚為一支；小鼠和大鼠聚為一支；SGK1和SGK3首先聚為一支，再與SGK2聚為一支；豬SGK蛋白與牛、人的SGK蛋白遺傳距離較近，與斑馬魚SGK蛋白距離最遠(yuǎn)(圖5)。

A，縱坐標(biāo)為氨基酸序列堆疊的高度，表示該處的序列保守性；橫坐標(biāo)為氨基酸序列排列的順序，表示該位置的每個(gè)氨基酸的相對(duì)頻率；B，利用NovoPro在線多序列比對(duì)工具對(duì)保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行比對(duì)

圖5 SGK蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.3 SGK家族基因在豬不同組織、不同生長(zhǎng)階段的表達(dá)

由圖6可知，SGK1和SGK3基因在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、多種肌肉及脂肪組織中廣泛表達(dá)，SGK2基因在不同組織中的表達(dá)量存在較大差異。SGK1和SGK3基因在豬肺臟中的表達(dá)量均顯著高于其他組織(P<0.05)；SGK3在背部肌肉和腿部肌肉中表達(dá)量最低；SGK2基因在頸部、背部、腹股溝、腎周脂肪中的表達(dá)量顯著高于其他組織(P<0.05)，在肝臟、腎臟中的表達(dá)量顯著高于脾臟、背部肌肉、腿部肌肉(P<0.05)，在心臟、肺臟中的表達(dá)量最低。相較于7日齡，SGK1和SGK2基因在4月齡豬腹股溝脂肪組織中極顯著下調(diào)(P<0.01)，SGK3基因無顯著差異(P>0.05)。

①A～C,SGK家族基因在豬不同組織中的表達(dá)；D,SGK家族基因在7日齡和4月齡豬腹股溝脂肪組織中的表達(dá)。②肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。③**，差異極顯著(P<0.01)；無*，差異不顯著(P>0.05)。下同

2.4 SGK家族基因在豬脂肪細(xì)胞分化前后的表達(dá)

與分化前的SVF細(xì)胞相比，在分化第10天的成熟脂肪細(xì)胞中C/EBPα和PPARγ基因的表達(dá)量極顯著上調(diào)(P<0.01)(圖7A)；SGK1和SGK2基因在成熟脂肪細(xì)胞中表達(dá)量極顯著上調(diào)(P<0.01)，而SGK3基因的表達(dá)量在分化前后無顯著差異(P>0.05)(圖7B)。

圖7 成脂分化標(biāo)記基因(A)和SGK家族基因(B)在分化前后脂肪細(xì)胞中的表達(dá)

3 討 論

為挖掘與豬脂肪沉積相關(guān)的基因，本研究對(duì)豬SGK家族基因進(jìn)行解析，成功獲得了SGK家族基因SGK1、SGK2和SGK3 CDS區(qū)序列，片段長(zhǎng)度分別為1 296、1 104和1 473 bp，分別編碼431、367和490個(gè)氨基酸，該結(jié)果與GenBank中預(yù)測(cè)的一致。對(duì)基因外顯子進(jìn)行研究，有助于了解該基因在結(jié)構(gòu)和功能上的差異，豬SGK1和SGK2基因的外顯子數(shù)量一致，說明SGK1和SGK2基因較為保守。對(duì)3個(gè)SGK蛋白進(jìn)行保守基序鑒定，發(fā)現(xiàn)3個(gè)蛋白均具有5個(gè)保守基序。豬SGK蛋白序列均含有一段由258個(gè)保守氨基酸構(gòu)成的序列(X)44-His-(X)13-His-o p(X)30-His-(X)26-His-(X)20-His-(X)116-His-(X)3，該結(jié)構(gòu)域是蛋白激酶的催化結(jié)構(gòu)域，具有共同的結(jié)構(gòu)特征，可參與ATP結(jié)合。系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果表明，豬SGK蛋白與牛和人的遺傳距離較近，與斑馬魚的遺傳距離最遠(yuǎn)，表明SGK家族在哺乳動(dòng)物中高度保守，可能具有相似的生理功能。通過以上對(duì)SGK家族蛋白信息和基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)地分析，發(fā)現(xiàn)SGK家族蛋白保守性高，穩(wěn)定性好。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，SGK1和SGK3基因在豬各組織中均有表達(dá)，SGK2基因在肝臟、腎臟和不同脂肪組織中高表達(dá)，表明SGK2具有高度組織特異性，可能在特定器官及組織中發(fā)揮重要作用。相較于4月齡豬，7日齡仔豬的脂肪組織未發(fā)育成熟，含有大量的前脂肪細(xì)胞，成脂能力較強(qiáng)。本研究對(duì)不同日齡巴馬豬脂肪組織中SGK家族基因進(jìn)行表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)SGK1和SGK2在7日齡仔豬脂肪組織中表達(dá)量較高，在脂肪組織中SGK1和SGK2基因表達(dá)量高于SGK3基因，表明SGK1和SGK2可能參與豬早期脂肪發(fā)育，對(duì)脂肪組織的形成至關(guān)重要。豬SVF細(xì)胞成脂分化檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SGK1和SGK2基因在分化后的前脂肪細(xì)胞中表達(dá)量顯著升高，而SGK3基因沒有變化，表明SGK1和SGK2可能參與了豬前體脂肪細(xì)胞的分化，在體外脂肪細(xì)胞形成過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，SGK3未參與脂肪細(xì)胞的分化。除此之外，在腹股溝脂肪組織中SGK2基因表達(dá)量高于SGK1基因，在分化成熟的脂肪細(xì)胞中SGK1基因的表達(dá)量高于SGK2基因，這可能是因?yàn)橹窘M織除脂肪細(xì)胞外還包含成纖維細(xì)胞、前脂肪細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管基質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞[29]，成熟的細(xì)胞僅由SVF細(xì)胞分化而來，SGK2基因可能在除脂肪細(xì)胞外的其他細(xì)胞中也有較高表達(dá)，故SGK2基因在組織中表達(dá)量高于SGK1基因。有報(bào)道稱，在脂肪細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化過程中地塞米松可誘導(dǎo)SGK1基因表達(dá)上調(diào)[30]，這可能也是在誘導(dǎo)分化的細(xì)胞中SGK1基因表達(dá)量較高的原因之一。

研究表明，SGK1受脂肪細(xì)胞代謝相關(guān)因子調(diào)節(jié)，可通過FOXO1參與脂肪細(xì)胞分化[24]。SGK1在肥胖和糖尿病患者的脂肪組織中高表達(dá)，與肥胖相關(guān)的炎癥反應(yīng)相關(guān)[22]。SGK1基因敲除小鼠對(duì)胰島素、糖皮質(zhì)激素敏感性降低，誘導(dǎo)SGK1表達(dá)有助于改善葡萄糖代謝和胰島素敏感性[31]。SGK2對(duì)脂肪形成作用的研究尚未見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，在豬的脂肪組織中SGK1與SGK2基因均高表達(dá)，且SGK2與SGK1基因均在7日齡仔豬的脂肪組織中高表達(dá)，表明SGK2與SGK1可能在功能上一致，在脂肪組織中發(fā)揮重要功能。鑒于SGK2在腎上皮細(xì)胞細(xì)胞Na+通道中的重要作用[16]，推測(cè)SGK2可能通過調(diào)節(jié)離子通道參與脂質(zhì)代謝。本研究結(jié)果表明，SGK家族中SGK1和SGK2參與豬脂肪沉積及脂肪細(xì)胞分化，推測(cè)二者可能在豬脂肪發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。

4 結(jié) 論

SGK1、SGK2和SGK3基因CDS區(qū)序列全長(zhǎng)分別為1 296、1 104和1 473 bp，分別編碼431、367和490個(gè)氨基酸，它們編碼的蛋白具有相同的特征結(jié)構(gòu)域及保守基序。SGK1和SGK3基因廣泛表達(dá)于多種組織器官，SGK2基因在頸部、背膘、腹股溝、腎周的脂肪組織中表達(dá)量較高。SGK1和SGK2基因在成脂能力較強(qiáng)的早期脂肪組織中及在體外分化的脂肪細(xì)胞中高表達(dá)。表明SGK1和SGK2參與豬脂肪沉積及脂肪細(xì)胞分化，可作為研究豬脂肪沉積的重要候選基因。