武海江，張雅姣，袁舒妍，徐 華*，謝劍煒

（1．軍事醫(yī)學研究院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京 100850；2．沈陽藥科大學 無涯創(chuàng)新學院，遼寧 沈陽 110016）

生理條件下，DNA會自發(fā)斷裂N-糖苷鍵脫去堿基（Apurinic/apyrimidinic，AP）形成AP位點損傷［1-7］（圖1A），據(jù)報道，平均每天每個哺乳細胞至少會產(chǎn)生10 000個內(nèi)源性AP位點［2，8］。當DNA暴露于外源性物質(zhì)如酸、烷化劑、電離離子或紫外線后［9-12］均會使DNA脫去堿基并生成AP位點［13］（圖1B）。另外AP位點也是堿基切除修復（Base excision repair，BER）途徑的關(guān)鍵中間體［14］，如活性氧引起DNA氧化損傷的標志物8-羥基-2′-脫氧鳥嘌呤核苷（8-OHdG）經(jīng)BER中特殊糖基化酶的切除而形成AP位點［13，15］（圖1C）。若AP位點未有效修復，可能會導致DNA聚合酶停滯和DNA鏈斷裂，產(chǎn)生突變和細胞毒性［1-2，13，16］，因此對AP的檢測有助于細胞損傷程度評估和化合物毒性評價［17-19］。近年來，由于交聯(lián)損傷的嚴重性，AP位點形成的DNA鏈間交聯(lián)（Interstrand crosslink，ICL）［20-27］和蛋白質(zhì)交聯(lián)［28-32］（DNAprotein crosslink，DPC）亦引起人們的重點關(guān)注。本課題組在前期工作中建立了細胞、血液、尿液及臟器中DNA加合物的質(zhì)譜定量方法，實現(xiàn)了各臟器中DNA損傷的定量評價［33-35］；構(gòu)建了組蛋白H2AX和H3磷酸化生物標志物的穩(wěn)定同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法，實現(xiàn)對化合物基因毒性的快速發(fā)現(xiàn)和定量檢測，并初步證明了該方法具有體外評價化學品致癌性的應用潛力［36-37］。課題組近期還開展了脫堿基位點交聯(lián)加合物（AP-base）的高靈敏LC-MS/MS分析，在細胞中首次鑒定3種新型AP-base，對不同類型細胞中AP-base本底值進行了定量評價及相關(guān)毒物暴露研究［38］。

圖1 AP位點的形成機制：DNA自發(fā)脫堿基形成AP位點（A）；AP位點形成的潛在來源（B）；脫氧鳥苷（dG）與活性氧反應生成8-OHdG，隨后經(jīng)DNA糖基化酶將8-OHdG切除后生成AP位點（C）Fig．1 Mechanisms of AP site formation：spontaneous base loss of DNA leads to the AP site formation（A），potential sources of base damage destabilizing the N-glyosidic bond and generating AP site（B），and deoxyguanosine（dG）reacted with reactive oxygen species to generate 8-OHdG，which is subsequently cleaved by DNA glycosylase to generate AP sites（C）R：DNA

AP位點的檢測方法主要有14C［39-40］或32P［41-42］后標記法、含醛基反應探針（Aldehyde-reactive probe，ARP）的酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA-like）［43-46］、熒光法［17-18，47-49］和液相色譜-質(zhì)譜法［50-54］等。其中，含ARP的ELISA-like方法是檢測和定量分析AP位點的重要方法，但其除標記AP位點的開鏈醛外［48，55-56］還會標記其它含醛基的化合物，可能會導致假陽性結(jié)果。近些年，質(zhì)譜法以其高靈敏和高特異的技術(shù)優(yōu)勢逐漸應用于AP位點的分析檢測［50，57-58］。

本文對AP位點的定性和定量分析方法進行了總結(jié)，對AP位點損傷在環(huán)境污染物及抗癌藥物的評價、細胞損傷和疾病相關(guān)的研究進展進行了評述。由于AP位點相關(guān)交聯(lián)（如ICL和DPC）存在潛在重要的生物學意義，本文亦重點對其進行了介紹。

1 脫堿基位點特點

每個細胞每天均可能產(chǎn)生成千上萬的AP位點，其作為一種常見的DNA損傷形式，能對細胞的功能、基因組穩(wěn)定性和疾病產(chǎn)生較大影響，能有效阻斷聚合酶并影響其對基因組信息的讀取和復制，是致突變的潛在源頭之一［13］。

AP位點的結(jié)構(gòu)以閉鏈縮醛形式（99%）和開鏈醛（1%）兩者的平衡形式存在（圖2）［4］。由于氫鍵及其他非共價相互作用的缺失，AP位點會使DNA雙鏈變得不穩(wěn)定。AP位點自身親電且具有化學不穩(wěn)定性，例如，DNA的AP位點在生理條件（pH 7．4，37℃）下的半衰期約為200 h［59］，在加熱處理或弱堿處理時會加速DNA鏈在AP位點的斷裂［60-62］，在酸性條件下也會通過脫嘌呤產(chǎn)生額外的AP位點。

圖2 AP位點在水溶液中的平衡態(tài)存在形式：閉鏈縮醛和開鏈醛［4］Fig．2 The equilibrating forms of AP site in aqueous solution：close-chain acetal and open-chain aldehyde［4］

除了產(chǎn)生鏈斷裂，由于AP位點的化學反應活性，AP位點的開鏈醛還會分別與蛋白質(zhì)或DNA互補鏈上的堿基發(fā)生共價反應形成DPCs和ICLs，從而形成更嚴重的損傷類型［2，19］。目前，細胞有多種修復和耐受機制以應對DNA損傷，雙鏈DNA中的AP位點大多數(shù)通過BER途徑進行修復，核苷酸切除修復（NER）則作為備用途徑［14］。近期，對AP位點的修復和耐受途徑研究已有評述報道［13］。

2 脫堿基位點作為中間體形成的交聯(lián)

相比于其它DNA損傷如DNA加合物、堿基錯配和堿基損傷等類型，DNA鏈間交聯(lián)和DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)的研究報道較少［28-29］。但由于DNA交聯(lián)以及DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)可導致嚴重的基因毒性，近年來其研究越來越受到重視［28］，AP位點作為最常見的DNA損傷類型之一，與其相關(guān)的ICL和DPC交聯(lián)現(xiàn)象已成為研究重點［29，31］。

2.1 AP位點形成的DNA交聯(lián)

DNA鏈間交聯(lián)是最嚴重的DNA損傷類型之一，其形成會影響DNA的復制和轉(zhuǎn)錄［2］。由于AP位點存在兩種互變平衡結(jié)構(gòu)（圖2），DNA中AP位點的開鏈醛可與互補鏈上的堿基發(fā)生共價加合形成ICL（圖3）。

圖3 由AP位點作為中間體形成ICL的形成機制及對應生成的交聯(lián)加合物Fig．3 The formation mechanisms of ICL derived from the AP site as intermediate and the corresponding crosslinked adducts

Dutta等［27］首次在無外源分子參與情況下清晰表征了DNA鏈間交聯(lián)情況，隨后運用質(zhì)譜技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)證明AP位點可分別與鳥嘌呤和腺嘌呤的環(huán)外氨基發(fā)生反應，形成AP-dG和AP-dA的ICL［20-21］（圖3A、3B），同時利用核磁共振技術(shù)表征了形成的ICL交聯(lián)加合物（圖3D）［63-64］。通過考察AP-dG和AP-dA交聯(lián)加合物的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)這兩類交聯(lián)加合物在pH 7．0、37℃時相當穩(wěn)定，意味著AP-dG ICL和AP-dA ICL可能是一種持久損傷，可能導致DNA的復制阻滯［63-64］。研究又通過可以耦合DNA合成和鏈置換的噬菌體φ29 DNA聚合酶作為模型系統(tǒng)測試了AP-dA交聯(lián)影響DNA加工酶的能力，證明AP位點形成的交聯(lián)能阻斷細胞中各種DNA加工酶的作用［65］。

最近，Hu等［66］利用高分辨質(zhì)譜技術(shù)在小牛胸腺DNA（Calf thymus DNA，CT-DNA）酶解樣品中檢出了AP位點與胞嘧啶殘基反應形成的交聯(lián)加合物（AP-dC）［66-67］。Varela等［24］隨后也證明了AP位點的醛基可與互補鏈上已錯配胞嘧啶的環(huán)外氨基發(fā)生反應，形成AP-dC ICL（圖3C）。值得注意的是，研究表明，當胞嘧啶殘基與鳥嘌呤發(fā)生正常沃森-克里克配對時，這二者并不能形成交聯(lián)。

目前，AP-dG、AP-dA和AP-dC等3種ICLs的形成僅在溶液體系中被鑒定，但細胞中是否存在上述鏈間交聯(lián)及其結(jié)構(gòu)特性如何仍屬未知［19，24］。對不同寡核苷酸序列的研究表明AP-dA、AP-dG形成交 聯(lián)的 產(chǎn)率 分別 為15%~85%［21］和2%~3%［20，27］，經(jīng)NaCNBH3還原 后 的AP-dG交聯(lián) 產(chǎn)率 為20%左右［20，27］?？紤]到細胞在正常生理條件下會產(chǎn)生至少10 000個AP位點［2，8］，研究者們推斷在細胞中可能會檢測到AP位點交聯(lián)加合物，但對檢測方法的靈敏度和實驗設計提出了更高要求［19，66］。Huskova等［22］通過體外實驗研究了AP-ICL的形成速率、產(chǎn)量和穩(wěn)定性，揭示AP位點周圍富含腺嘌呤-胸腺嘧啶堿基對（AT）比富含鳥嘌呤-胞嘧啶堿基對（GC）的區(qū)域更易形成AP-ICL，并基于AP-ICL形成的生化實驗，推斷在人體細胞中存在或可形成1~5個ICLs。相比其它常見的DNA損傷類型，由AP位點作為中間體形成的DNA鏈間交聯(lián)是一種更為嚴重的DNA損傷，這種交聯(lián)在細胞中存在的可能性及其可能引起的生物學結(jié)局值得重點關(guān)注。

2.2 AP位點形成的蛋白質(zhì)交聯(lián)

DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)是蛋白質(zhì)和DNA中1條鏈發(fā)生共價加合形成的一種交聯(lián)，也是嚴重的DNA損傷類型之一，同樣會阻滯DNA復制和翻譯。受到檢測技術(shù)重復性、靈敏性和特異性等方面的限制，與其它的DNA損傷類型相比，DPC的研究相對較少［13，29］。AP位點可在細胞和組織中自發(fā)產(chǎn)生，是多種生理過程中形成的最普遍的DNA損傷之一。由于AP位點與核小體中的組蛋白非常接近，以AP為中間體形成的DPC已被重點研究報道，如AP-Lys和AP-Cys（圖4）［28，32，68］。Chan等［28］用同位素稀釋LC-MS/MS方法首次從細胞中檢出新型的由AP位點與蛋白質(zhì)的半胱氨酸（Cys）殘基發(fā)生反應形成的AP-Cys交聯(lián)，從HeLa細胞（Human cervix adenocarcinoma cell）中測得AP-Cys DPCs的本底含量為5．45個/107nts。近期，Chan等［32］再次利用LC-MS/MS方法首次定量分析了細胞內(nèi)AP位點與賴氨酸（Lys）殘基反應形成的DPCs，檢測到HeLa細胞中AP-Lys DPCs的本底含量為0．03個/107nts。結(jié)果表明，在HeLa細胞中AP-Cys DPCs的含量高于AP-Lys DPCs，且與近期文獻報道的細胞中本底AP位點數(shù)目接近。此外，Tang等［69］基于DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)測序技術(shù)，利用AP位點與Lys殘基共價結(jié)合的特點，應用于人類HEK293T細胞（Human embryonic kidney 293T cell）中胸苷乙二醇的全基因組圖譜繪制。表1列出了采用不同方法對細胞或哺乳動物組織中AP位點的檢測結(jié)果及特征分析比較。

圖4 由AP位點作為中間體形成的DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)形成機制及對應生成的交聯(lián)加合物Fig．4 The formation mechanisms of DNA-protein crosslink derived from the AP site as intermediate and the corresponding crosslinked adducts

DPCs交聯(lián)的形成與修復機制亦值得深入研究，研究發(fā)現(xiàn)AP位點也可與多種修復酶如5′-脫氧核糖-5-磷酸/脫堿基裂解酶（KU）［70］、DNA聚合酶β（Pol β）［71］和多聚ADP核糖聚合酶1/2（PARP1/2）［72-73］等形成交聯(lián)，形成的DPC通常被認為是有害或短暫的中間體，且與AP位點的修復相關(guān)［31］。目前對AP位點作為中間體形成DPC的化學結(jié)構(gòu)或生物學結(jié)局的了解很有限，仍亟待開發(fā)相應的檢測方法并深入研究［29，31］。

3 DNA脫堿基位點的檢測方法

當前檢測AP位點主要基于以下兩種方式。一種是非共價方式，依靠試劑與DNA分子間的氫鍵、范德華力和靜電引力等弱相互作用力，使檢測分子能夠進入AP位點，通過改變檢測分子的物理信號（如熒光和電化學），進而實現(xiàn)對AP位點的標記檢測［74］。另一種是共價標記AP位點的方式，依靠不同含氨基基團的標記試劑分子與AP位點的開鏈醛發(fā)生反應形成相對穩(wěn)定的共價亞胺（通常稱為席夫堿）［75-77］（圖5），并進一步利用不同技術(shù)檢測標記分子實現(xiàn)對AP位點的分析。由于非共價標記方式基于弱相互作用力，其結(jié)合能力普遍低于共價反應探針，因此目前研究報道以共價標記方式居多，本文主要概述利用共價標記AP位點檢測方法的研究進展。

圖5 標記DNA脫堿基位點示意圖Fig．5 Schematic of labeling DNA abasic site

AP位點的重要檢測方法有14C或32P標記法、ELISA-like分析法、熒光分析法和LC-MS法等，其各具優(yōu)勢和不足。其中，ELISA-like分析法是用于檢測和定量分析AP位點的常用方法之一，近年來，隨著高特異和高靈敏質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，質(zhì)譜方法正逐漸成為AP位點檢測的主流方法。

3.1 14C或32P后標記法

14C標記法是利用同位素閃爍計數(shù)技術(shù)對AP位點的醛基基團和14C甲氧胺反應形成的肟類化合物進行檢測。該方法靈敏度和特異性均較低，無法實現(xiàn)對AP位點的準確定量［39-40，52］。Weinfeld等［42］使用32P后標記法可在fmol水平對DNA中的AP位點進行定量分析，方法靈敏度較高，但該方法需進行核酸凝膠電泳和色譜分離等前處理操作，費時耗力，且涉及放射性污染等問題［41］。因此，目前鮮有關(guān)于上述兩種標記方法的報道。

3.2 ELISA-like分析法

為應對上述14C或32P后標記法的不足，Kubo等［78］于1992年構(gòu)建了一種生物素標記的含醛反應性探針（ARP）的ELISA-like方法。其原理是利用生物素標記探針的羥胺基團與DNA中AP位點發(fā)生加合反應，然后使用偶聯(lián)辣根過氧化物酶的抗生物素蛋白作為指示酶，通過ELISA-like方法對生物素標記的AP位點進行比色測定［43，78］。

該方法靈敏度較高且操作簡單，因此基于其改進的方法相繼被用于檢測和定量分析AP位點或含其它醛基的潛在DNA損傷［46，53，79-81］。Kubo等［78］在熱解或酸解后的CT-DNA或噬菌體f1 DNA中檢測到fmol水平的AP位點，該方法無需使用一抗和二抗，通過指征指示劑酶偶聯(lián)的抗生物素蛋白/生物素復合物直接檢測生物素和DNA的含量即可測定AP位點。Kubo等［44］在HeLa RC355細胞（具輻射抗性的HeLa細胞株）中測得的AP位點為＜1個/105nts［43］，在HeLa細胞中為5個/106nts（0．1 fmol）。

ELISA-like方法雖有較多應用，但由于缺乏特異性［48，55-56］，尚存在諸多局限：①該方法所使用的生物素在細胞中也同樣存在［49］；②ARP的結(jié)構(gòu)空間體積較大［52］，因此ARP很可能因位阻導致未與AP位點充分反應；③DNA中存在的除AP位點之外的DNA氧化產(chǎn)物［82］、其它含醛基化合物如5-甲?；奏ぃ?fC）和5-甲?；蜞奏ぃ?fU）亦可能被錯誤標記［56，83-84］，存在假陽性風險。因此，近年來出現(xiàn)了基于其它原理的高特異性方法的報道和應用。

3.3 熒光分析法

相比于ELISA-like分析法，目前用于定量分析AP位點的熒光分析法應用仍較少，多數(shù)研究主要集中在如何提高檢測方法的靈敏度和特異性［48-49］。熒光分析法通過設計能與AP位點的開鏈醛反應的熒光探針分子，對熒光信號進行檢測并實現(xiàn)對AP位點的測定［18，48］。

使用常規(guī)含賴氨酸-羅丹明［18］和熒光素［85］標記的熒光分析方法分別能檢測到129 fmol和17 fmol水平的AP位點，其實驗操作所需時間雖比ELISA-like分析法少，但靈敏度較低，且所需DNA樣品量較大，洗滌后也難以避免痕量熒光探針的存在，從而影響分析結(jié)果。Fundador等［17］利用激光誘導熒光的毛細管電泳技術(shù)檢測熒光團-ARP標記的AP位點，靈敏度較前述熒光方法明顯提高，檢出限可達1．2個AP位點/106nts（0．02 fmol），但受限于必須采用合適的抗體，該方法的普適性較低。

最近，Liu等［48］測試了含萘二甲酰亞胺熒光標簽的羥胺探針分子與DNA中含醛基或酮基的化合物的反應能力，發(fā)現(xiàn)其均能與AP位點、5fU和5fC發(fā)生反應，三者反應效率并無較大差別。而以往研究報道中使用的羥胺或烷氧胺試劑僅標記了AP位點［18，47］、5fU［51，86］和5fC［87］中的一種化合物，推測其原因可能是實驗未考慮DNA中所有含醛基化合物或優(yōu)化特殊反應條件所致［48］。因此，利用熒光分析法準確檢測AP位點或其它含醛基化合物時，除考慮適當?shù)臒晒鈽撕炌猓仨毧紤]結(jié)合特殊的反應條件以評估和優(yōu)化熒光標記分子與目標物的反應效率［49，88］。

3.4 液相色譜-質(zhì)譜法

液相色譜-質(zhì)譜法是利用烷氧胺［50，52］或肼類［54］試劑對AP位點開鏈醛進行衍生標記形成穩(wěn)定的肟或腙類目標化合物，實現(xiàn)對AP位點的準確定量分析。

Zhou等［52］基于14C甲氧胺衍生化構(gòu)建了AP位點的加速器質(zhì)譜法，檢出限為1個AP位點/106nts。該方法雖提高了靈敏度，但能與14C甲氧胺反應的除AP位點外，還包括鏈斷裂位點及多種帶有醛和酮基的降解產(chǎn)物，故該方法僅適用于檢測造成多位點損傷的DNA。Li等［54］利用同位素稀釋的LC-MS/MS法定量分析基因組DNA中的AP位點，檢出限為4個AP位點/109nts（6．5 fmol），該方法靈敏度雖有提高，但對AP位點的衍生化標記發(fā)生于DNA酶解完成后，存在DNA酶解導致假陽性AP位點生成的可能性，從而導致定量結(jié)果不準確。Rahimoff等［51］亦利用LC-MS/MS方法在小鼠胚胎干細胞中測得0．9個AP位點/106nts。Turesky等［50］構(gòu)建基于利用O-［（3-吡啶基）甲基］羥胺（PMOA）試劑對AP位點進行衍生化標記的高靈敏和高特異性的LC-MS/MS定量方法，驗證了與提取DNA后對AP位點進行衍生化的流程相比，在細胞裂解時即直接對AP位點進行衍生化標記是減少假陽性結(jié)果的較好方式，并最終從小鼠肝組織中測得約0．9個AP位點/107nts。

質(zhì)譜法測定AP位點靈敏度的不斷提高有益于實現(xiàn)對AP位點的分析檢測，同時質(zhì)譜方法能提供精確質(zhì)量及特征碎片離子，可實現(xiàn)精確定性與準確定量。但構(gòu)建AP位點液質(zhì)定量方法時除需考慮衍生化試劑的衍生化效率外，更需要考慮的重要影響因素是AP位點自身結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性，由于在DNA裂解、消化或衍生化過程中均可造成AP位點的形成或丟失，易導致定量結(jié)果出現(xiàn)偏差，因而目前測定AP位點時需重點關(guān)注其化學穩(wěn)定性［4，29，50］。通常考慮以下樣品處理條件，以盡量避免假陽性或假陰性結(jié)果：①條件盡量溫和，如酶解溫度不能太高、樣品混勻時輕輕振蕩及選擇適宜pH值等［50，89-90］；②酶解時添加劑的選擇，如加入甲磺酸去鐵胺能有效防止樣品被氧化［66，89-91］；③衍生化時機的選擇，如衍生化試劑越早添加越能監(jiān)測到生物體本底水平的AP位點［50］。

如表1所示，在諸多測定AP位點的分析方法中，ELISA-like分析法和液相色譜-質(zhì)譜法最為常用和有效。前者在人類細胞系中最少可檢出超過6．7個AP位點/107nts，最高在人或哺乳動物組織中檢出100個AP位點/107nts；后者在人肺臟或白細胞中最少檢出2個AP位點/107nts，最高在小鼠胚胎干細胞中測得10個AP位點/107nts。兩組數(shù)據(jù)比較分析顯示，對于細胞系或組織的AP位點本底水平測定，ELISA-like分析法測得的含量較高，其主要原因可能與ELISA-like方法的非特異性有關(guān)［55］。因此，目前亦日趨采用更特異更靈敏的LC-MS方法用于AP位點的檢測和定量分析。

表1 不同方法對寡核苷酸、細胞或哺乳動物組織中DNA AP位點的檢測分析特征總結(jié)Table 1 Summary of the characteristics of determination of DNA AP sites in oligonucleotides，cell lines or mammalian tissues by a variety of techniques

4 毒性評價和癌癥治療相關(guān)應用研究

4.1 毒性評價

自從報道在細胞內(nèi)存在大量AP位點后，多數(shù)檢測方法的目的是測定AP位點在細胞或組織中的本底表達水平和經(jīng)毒物暴露后的AP位點變化情況及損傷修復趨勢，并進一步研究其作為生物標志物用于損傷評價、BER修復過程檢測和化合物毒性評價等的可能性。

早期，人們利用ELISA-like分析方法開展了致癌物暴露細胞后AP位點的含量測定［44，46］、細胞中AP位點的修復過程監(jiān)測［43］和老齡化過程中AP位點的變化程度［45］等研究，但由于該方法的特異性不強，導致上述研究可能存在較高的假陽性問題（見表1）。因此，近十五年來，陸續(xù)報道利用高靈敏和高特異的質(zhì)譜技術(shù)對AP位點進行定性定量分析，但大多均停留在方法構(gòu)建方面。近期Turesky課題組［50］構(gòu)建了能有效降低假陽性的定量分析AP位點的LC-MS/MS方法，基于該方法，Guo等［58］開展了動物暴露于煙草中特異性亞硝胺形成AP位點的研究，并評估了吸煙者和非吸煙者DNA中的AP位點，為理解煙草中亞硝胺誘發(fā)癌癥的可能機制提供了一個新的角度。

4.2 癌癥治療

數(shù)十年來，人們對DNA損傷反應（DNA damage response，DDR）的理解不斷加深，拓寬了腫瘤學的治療領域。DDR缺陷導致的細胞基因組不穩(wěn)定性誘發(fā)了癌癥的發(fā)生，但這些缺陷亦可被應用作為治療切入點，如選擇一些DDR途徑中成員的抑制劑進行癌癥靶向治療［92］。AP位點作為BER途徑中的修復中間體，是最常見的DNA損傷之一，基于AP位點的癌癥治療研究也逐步興起［93-94］。

Chen等［57］利用LC-MS方法測定了氮芥（NM）處理小鼠后各組織中NM-DNA加合物和AP位點含量，并繪制了二者之間的動力學曲線，發(fā)現(xiàn)AP位點的修復過程與NM-DNA加合物的清除有密切關(guān)聯(lián)，提示AP位點可作為用于新型化療方案設計和療效評估的生物標志物。近期，Mandi等［94］將AP位點作為抗癌藥物發(fā)現(xiàn)的靶標，發(fā)現(xiàn)熒光喹喔啉胺能增強特定雙功能烷基化藥物的反應，當含硝基的單喹喔啉DNA嵌入劑單獨或與熒光喹喔啉胺組合使用時可導致HCT-116細胞（Human colorectal carcinoma cell）凋亡，為后期靶向癌細胞中AP位點的治療應用提供了思路。Xue等［93］結(jié)合癌細胞中谷胱甘肽（GSH）的豐度，開發(fā)了具有靶向抗腫瘤活性和細胞光毒性的GSH響應性AP捕獲劑，為癌癥靶向化療提供了一種可能策略。

5 展望

AP位點損傷可由核苷酸自發(fā)水解產(chǎn)生，亦是DNA修復烷基化或氧化堿基過程中生成的中間體。若DNA中的AP位點未及時獲得修復，可能會導致DNA復制阻滯并影響轉(zhuǎn)錄過程，并進一步誘發(fā)細胞突變或細胞毒性。因此，通過體內(nèi)或體外實驗探討AP位點損傷數(shù)目與細胞或哺乳動物組織中DNA損傷程度的關(guān)聯(lián)，以及驗證AP位點數(shù)目超過某一閾值可否作為判斷基因毒性的標志，對于AP位點損傷的定量分析研究顯得尤為重要［17-18］。由于AP位點結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性，目前能準確定量分析AP位點的方法仍較少［29，50］。近年來，隨著利用LC-MS/MS技術(shù)定量分析AP位點損傷的研究逐漸增多［50］，已初步開展了人群受基因毒性物質(zhì)如亞硝胺的暴露研究［58］，相信LC-MS/MS技術(shù)將在定量分析AP位點中扮演重要角色。

盡管AP損傷仍被認為是易于修復的致突變損傷，但AP位點的親電性使其在生物學效應中扮演的角色（如ICL或DPC）仍需獲得更多關(guān)注［2，28］，相信與AP位點相關(guān)的毒性評價和癌癥治療相關(guān)應用研究亦會逐步興起。