卒中后抑郁(Post-Stroke Depression, PSD)是腦卒中后最常見的并發(fā)癥之一[1]。卒中后抑郁可在缺血卒中后2周內(nèi)發(fā)生，即早發(fā)型PSD，可持續(xù)數(shù)月甚至數(shù)年。根據(jù)不同的研究對(duì)象、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和發(fā)病時(shí)間，PSD的患病率從25%到70%不等[2～4]。研究表明，PSD與腦卒中患者神經(jīng)功能恢復(fù)差、復(fù)發(fā)率高、病死率高有關(guān)[2, 3]，因此，及時(shí)診斷和治療PSD對(duì)其預(yù)后有重要意義。然而，PSD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。目前，有關(guān)PSD的假說主要有神經(jīng)解剖學(xué)、神經(jīng)生物化學(xué)和神經(jīng)遺傳學(xué)等。盡管學(xué)者認(rèn)為PSD的發(fā)病機(jī)制不同，推測(cè)PSD可能是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果，臨床因素和血液標(biāo)志物的結(jié)合可能是預(yù)測(cè)早發(fā)型PSD的潛在方法。microRNA(miRNA或miRs)是一類小的非編碼RNA，主要參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控表達(dá)，包括調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展、炎癥反應(yīng)等[5～7]，此外有研究發(fā)現(xiàn)miRNA在抑郁癥等精神疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用[8]。有研究報(bào)道，miR-140-5p是遲發(fā)型PSD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，miR-140-5p對(duì)遲發(fā)型PSD的預(yù)測(cè)具有較好的敏感性和特異性，miR-140-5p可能參與了遲發(fā)型PSD的發(fā)病機(jī)制，有望作為一種新的早期預(yù)警生物標(biāo)志物[9]。此外，重度抑郁癥患者體內(nèi)let-7b、let-7c、miR-1202、miR-124-3p表達(dá)水平顯著改變，PSD患者體內(nèi) miR-137、miR-92a-3p、miR-211和miR-300表達(dá)水平亦顯著改變[10～12]。越來越多的證據(jù)表明，循環(huán)miRNAs可以作為疾病狀態(tài)、特征的潛在生物標(biāo)志物，或者可以作為抑郁癥治療的潛在靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-23a和miR-378水平的升高主要參與腫瘤的生長侵襲、轉(zhuǎn)移與炎癥反應(yīng)調(diào)控[13～16]，但目前尚無有關(guān)miR-23a和miR-378水平變化與PSD的研究。本研究主要探討PSD患者血清中miR-23a和miR-378的表達(dá)水平，并分析其對(duì)PSD的診斷及預(yù)后評(píng)估的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2018年3月～2021年8月深圳市康寧醫(yī)院和湖南省腦科醫(yī)院收治的128例腦卒中患者。其中男72例，女56例；年齡37～82歲，平均(60.59±12.06)歲，中位數(shù)年齡62歲。依據(jù)住院及隨訪時(shí)間內(nèi)患者是否發(fā)生PSD癥狀分為PSD組(48例)和非PSD組(80例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18歲；(2)經(jīng)頭顱磁共振成像(MRI)診斷為腦卒中；(3)首次發(fā)病，12 h內(nèi)入院；(4)PSD診斷符合《ICD-10精神與行為障礙分類》診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)由2名受過量表評(píng)估培訓(xùn)的精神疾病?？漆t(yī)生對(duì)所有患者進(jìn)行17項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale-17，HAMD-17)評(píng)估，HAMD-17≥7分為抑郁癥；(5)能夠配合完成量表評(píng)估及臨床資料完整；(6)簽署患者知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)發(fā)病之前有抑郁癥等精神癥狀；(2)有認(rèn)知、意識(shí)障礙疾病；(3)服用精神藥物史；(4)合并心、腦、肝、腎等慢性病史；(5)病例失訪。

1.2 方法

1.2.1 試劑和材料 無水乙醇、氯仿和異丙醇等購自德源化工公司，TRIzol購自武漢谷歌生物公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑和熒光定量PCR試劑盒購自日本Takara公司，U6內(nèi)參、miR-23a和miR-378引物購自廣州銳博生物公司。

1.2.2 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)患者血清中miR-23a和miR-378的表達(dá) 所有患者均于入院次日清晨采集空腹靜脈血10 ml，3 000rpm離心10 min，取上層血清用于試驗(yàn)。向上述血清中先后加入TRIzol，氯仿和異丙醇等提取總的RNA。采用RT-qPCR檢測(cè)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件如下：加熱 95 ℃， 時(shí)間30 min，變性 94 ℃，時(shí)間15 s， 退火55 ℃，時(shí)間 30 s， 延伸70 ℃，時(shí)間30 s，共 40個(gè)循環(huán)。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，以U6為內(nèi)參， 采用2-△△Ct法計(jì)算miR-23a和miR-378相對(duì)表達(dá)量。miR-23a引物：上游：5’-GCCGATCACATTGCCAGGG-3’，下游：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3’；miR-378引物：上游：5’-GAGCGGAGAGTACTGGATCG-3’，下游：5’-GTTCGGGCTGATGTACCAGT-3’；U6 內(nèi)參：上游：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，下游：5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。

1.2.3 隨訪 由醫(yī)生采用電話回訪和門診復(fù)診相結(jié)合方式隨訪患者預(yù)后情況，隨訪開始診斷為腦卒中確診時(shí)間，隨訪截止時(shí)間為2021年8月發(fā)病后1年，發(fā)生PSD即為終點(diǎn)事件。隨訪內(nèi)容主要為參考《ICD-10精神與行為障礙分類》診斷標(biāo)準(zhǔn)和HAMD-17。

1.2.4 觀察指標(biāo) 患者的一般臨床資料包括性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓病史、糖尿病史、心臟病史及體質(zhì)量指數(shù)(BMI)等。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)包括患者入院次日清晨空腹血液送檢的白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及空腹血糖等實(shí)驗(yàn)室檢查。腦卒中患者TOAST病因分型、梗死灶位置及入院時(shí)美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS) 評(píng)分結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、心臟病史、吸煙史、飲酒史、BMI、實(shí)驗(yàn)室檢查、梗死灶位置、TOSAT分型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，PSD組NIHSS評(píng)分高于非PSD組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料及實(shí)驗(yàn)室檢查比較

2.2 兩組血清中miR-23a和miR-378相對(duì)表達(dá)量 PSD組血清miR-23a的相對(duì)表達(dá)量(2.15±0.97)高于非PSD組(1.18±0.64)(t=9.95，P<0.01)。PSD組血清miR-378的相對(duì)表達(dá)量(1.38±0.32)高于非PSD組(1.06±0.12)(t=3.06，P<0.05)。見圖1。

注：*P<0.05,**P<0.01

2.3 影響卒中患者發(fā)生抑郁的危險(xiǎn)因素 單因素分析結(jié)果顯示NIHSS評(píng)分增高、miR-23a和miR-378升高是影響卒中患者發(fā)生抑郁的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表1，圖1。多因素Logistic回歸分析顯示NIHSS評(píng)分增高、miR-23a和miR-378升高是影響卒中患者發(fā)生抑郁的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 卒中后發(fā)生抑郁的多因素Logistic回歸分析

2.4 PSD患者外周血miR-23a和miR-378對(duì)PSD患者發(fā)病診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，PSD患者血清中miR-23a的曲線下面積為0.907(95%CI：0.859～0.955，P<0.000 1)，最佳診斷為1.81，特異性為0.938，敏感性為0.725。PSD患者血清中miR-378的曲線下面積為0.835(95%CI：0.766～0.903，P<0.000 1)，最佳診斷為1.51，特異性為0.896，敏感性為0.600。見圖2。

圖2 PSD患者外周血miR-23a和miR-378表達(dá)水平診斷PSD的ROC曲線

3 討論

卒中目前是全球第三大死亡原因，也是老年人口的主要健康問題，不僅會(huì)導(dǎo)致殘疾等身體損傷，還會(huì)導(dǎo)致社交與心理疾病[1, 17]。其中，PSD是最常見的神經(jīng)精神損傷，常伴有冷漠、疲勞、自我感覺價(jià)值低、睡眠改變和快感缺失，PSD是導(dǎo)致卒中患者生活質(zhì)量低下的最重要因素[18, 19]。然而，迄今為止，PSD的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。研究表明PSD可能與解剖學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、遺傳因素和社會(huì)因素有關(guān)[1]。研究表明腦額皮層下回路(FSC)和腦邊緣-皮質(zhì)-紋狀體-蒼白球丘腦回路(LCSPTC)與腦卒中后抑郁的發(fā)生有關(guān)[20, 21]。腦卒中后，機(jī)體釋放大量炎癥因子進(jìn)而影響下丘腦-垂體-腎上腺軸功能。在細(xì)胞中，5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲腎上腺素的表達(dá)水平降低，從而導(dǎo)致抑郁的發(fā)生[22]。此外，有報(bào)道稱5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體編碼SLC6A4基因[23]和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)Val66Met基因多態(tài)性[24]與PSD相關(guān)。

早期識(shí)別PSD的相關(guān)危險(xiǎn)因素并對(duì)其進(jìn)行預(yù)測(cè)對(duì)PSD患者預(yù)后具有重要意義。一些生物學(xué)標(biāo)志物如DA、5-HT、炎癥因子等與抑郁癥相關(guān)。然而，仍缺乏PSD患者的臨床預(yù)測(cè)因素。近年來，研究發(fā)現(xiàn)miRNAs與腦卒中發(fā)病率之間存在密切關(guān)系。例如，miR-124、miR-140-5p、miR-210和其他miRNAs已被確定為潛在的重要角色。此外，先前的研究也表明，異常表達(dá)的miRNA可能促進(jìn)或誘導(dǎo)PSD的發(fā)生，并可能促進(jìn)PSD的進(jìn)展。研究者發(fā)現(xiàn)卒中患者的血清miR-223-3p 相對(duì)表達(dá)量降低及高遷移率族蛋白B1(HMGB1)水平升高是 PSD 發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，早期將兩指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可有效預(yù)測(cè)PSD的發(fā)病[25]。此外，研究結(jié)果表明，miR-140-5p在PSD中上調(diào)，受試者ROC曲線顯示，miR-140-5p預(yù)測(cè)遲發(fā)型PSD的發(fā)生，最高敏感性為83.3%，特異度為72.6%[9]。

本研究結(jié)果顯示，兩組性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、心臟病史、吸煙史、飲酒史、BMI、實(shí)驗(yàn)室檢查、梗死灶位置、TOSAT分型比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PSD組NIHSS評(píng)分高于非PSD組，這與其他研究結(jié)果一致[26]。PSD組血清中miR-23a和miR-378的相對(duì)表達(dá)量高于非PSD組，多因素Logistic回歸分析顯示NIHSS評(píng)分增高、miR-23a和miR-378升高是影響卒中患者發(fā)生抑郁的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示miR-23a和miR-378可能參與PSD的發(fā)病。本研究還采用ROC曲線分析了miR-23a和miR-378對(duì)卒中患者PSD發(fā)病的診斷價(jià)值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清miR-23a和miR-378診斷PSD時(shí)ROC的曲線下面積分別為0.907和 0.835，提示miR-23a和miR-378對(duì)PSD具有較高的診斷價(jià)值，可作為血清標(biāo)志物篩查PSD。

綜上所述，本研究結(jié)果提示PSD患者血清中miR-23a和miR-378表達(dá)升高是PSD發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)對(duì)PSD的診斷也具有一定的價(jià)值，有望作為PSD早期診斷的潛在分子標(biāo)志物。