王建衛(wèi) 王強(qiáng) 李鼎

前列腺癌是威脅中老年男性健康的常見(jiàn)惡性腫瘤，具有高發(fā)病率及致死率，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量，但其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全明確[1]。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究顯示，磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、炎癥反應(yīng)等多種生理過(guò)程，并在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[2]。前列腺癌治療手段多樣，然而對(duì)于晚期前列腺癌，大部分病人在治療1年后應(yīng)答水平逐漸降低，腫瘤進(jìn)展，進(jìn)入去勢(shì)抵抗性前列腺癌階段[3-4]。阿比特龍是一種新型內(nèi)分泌治療藥物。有研究顯示，阿比特龍聯(lián)合潑尼松治療未經(jīng)化療去勢(shì)抵抗性前列腺癌病人，可延長(zhǎng)病人影像學(xué)無(wú)進(jìn)展生存期[5]。本研究采用阿比特龍治療老年去勢(shì)抵抗性前列腺癌病人，觀察其對(duì)病人PI3K/AKT信號(hào)通路及腫瘤標(biāo)志物水平的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2018年6月至2020年6月我院收治的88例老年前列腺癌病人為研究對(duì)象，年齡60～78歲，平均(69.57±5.59)歲，按照隨機(jī)數(shù)表法分為觀察組和對(duì)照組，每組各44例。本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)病人均符合前列腺癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診；(2)病人均符合去勢(shì)抵抗性前列腺癌標(biāo)準(zhǔn)：血清睪酮濃度<1.7 nmol/L，達(dá)到去勢(shì)水平；每隔2周，連續(xù)3次前列腺特異性抗原(PSA)水平升高，且2次PSA均較最低值升高50%，絕對(duì)值>2 ng/mL；抗雄激素撤退治療無(wú)效或連續(xù)給予內(nèi)分泌治療仍然出現(xiàn)PSA進(jìn)展[7]；(3)入院前1個(gè)月內(nèi)未使用酮康唑、抗雄性激素等其他藥物治療；(4)TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期；(5)年齡≥60歲；(6)獲有效隨訪，臨床資料完整；(7)病人或其家屬知情同意，簽署知情同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)存在病毒性肝炎史、慢性肝臟疾病史或轉(zhuǎn)氨酶水平異常者；(2)對(duì)試驗(yàn)藥物過(guò)敏者；(3)垂體或腎上腺皮質(zhì)功能減退者；(4)既往接受細(xì)胞毒化療或生物療法治療者；(5)治療依從性差，未完成治療方案者；(6)中途退出或隨訪脫落者。

1.4 方法 對(duì)照組予以潑尼松(浙江仙琚制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H33021207)口服，5 mg/次，2次/d。觀察組予以醋酸阿比特龍(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20193207)口服，1000 mg/次，1次/d；聯(lián)合潑尼松口服，5 mg/次，2次/d。2組均以4周為1個(gè)治療周期，治療2個(gè)周期后觀察相關(guān)指標(biāo)。為保障病人順利完成治療及相關(guān)隨訪，治療期間加強(qiáng)與病人及家屬溝通，緩解病人不良情緒，加強(qiáng)出院及用藥指導(dǎo)，叮囑病人及時(shí)進(jìn)行復(fù)查。

1.5 觀察指標(biāo) (1)觀察2組治療后2個(gè)月PI3K和AKT的表達(dá)情況。經(jīng)穿刺手術(shù)取前列腺癌組織3 mg，于-80 ℃冰箱保存待檢，取組織剪碎，于勻漿器中加入400μL單去污劑裂解液，4 ℃下2400 r/min離心5 min，去上清分裝于Ep管中-20 ℃保存。BCA 工作液測(cè)定其中蛋白濃度。配12%分離膠和5%濃縮膠，泳道邊緣加1× Loading Buffer，接好電極80 V電壓濃縮膠，至分離膠時(shí)調(diào)整電壓至120 V，待染料達(dá)到分離膠底部時(shí)即可停止。電泳完畢后，根據(jù)目的蛋白分子量進(jìn)行切膠，使聚偏二氟乙烯膜、濾紙與膠匹配，進(jìn)行130 mA穩(wěn)流轉(zhuǎn)膜2 h；將轉(zhuǎn)好的聚偏二氟乙烯膜放入5%脫脂奶粉封閉液的小盒中，4 ℃搖床上封閉2 h；將雜交膜放入雜交袋中，加入稀釋好的一抗工作液37 ℃孵育2 h或者過(guò)夜，用洗滌緩沖液(TBST)洗膜3次，每次分別洗15、10、10 min。按1∶5000稀釋二抗，加入1 h后TBST洗膜3次，均5 min；顯影，定影，采用Quantity One軟件分析PI3K和AKT的相對(duì)表達(dá)量。(2)比較2組治療前1 d及治療后2個(gè)月腫瘤標(biāo)志物水平。采集病人空腹外周靜脈血5 mL，經(jīng)3000 r/min離心10 min，血清分離后置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)。采用羅氏Cobase 601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑盒檢測(cè)血清癌胚抗原(CEA)、腫瘤細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)及PSA水平。(3)比較2組治療前1 d及治療后2個(gè)月T淋巴細(xì)胞亞群分布及炎癥因子水平。采用美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)的Beckman型流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞收獲，并采用Simulset軟件進(jìn)行結(jié)果分析，檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+分布情況，試劑盒均由上海康朗生物科技有限公司提供；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)IL-8、TNF-α水平，試劑盒來(lái)自鄭州安塞生物科技有限公司。(4)所有病人均隨訪1年，前6個(gè)周期每8周行骨掃描、CT、MRI檢查，6個(gè)周期后每12周行骨掃描、CT、MRI檢查，通過(guò)主動(dòng)復(fù)診及電話方式對(duì)病人進(jìn)行隨訪，調(diào)查病人1年生存情況。

2 結(jié)果

2.1 2組治療后PI3K/AKT信號(hào)通路表達(dá)水平比較 觀察組治療后AKT、PI3K表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 2組治療后PI3K/AKT信號(hào)通路表達(dá)水平比較

2.2 2組治療前后腫瘤標(biāo)志物水平比較 2組治療后血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE水平均顯著低于治療前(P<0.05)；且觀察組低于對(duì)照組(P<0.01)，見(jiàn)表3。

表3 2組治療前后腫瘤標(biāo)志物水平比較

2.3 2組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群分布及炎癥因子水平比較 2組治療后CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于治療前(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平顯著低于治療前(P<0.05)；觀察組治療后CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，IL-8、TNF-α水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表4。

表4 2組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群分布及炎癥因子水平比較

2.4 2組病人1年生存情況比較 1年隨訪期內(nèi)，觀察組死亡2例，死亡率為4.55%；對(duì)照組死亡9例，死亡率為20.45%，觀察組1年總生存率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

3 討論

前列腺癌在老年男性群體中多發(fā)，晚期前列腺癌病人的手術(shù)、傳統(tǒng)內(nèi)分泌治療等手段可在一定程度上降低血清雄激素水平，延緩腫瘤進(jìn)展，延長(zhǎng)病人生存期，但多數(shù)病人在治療后期會(huì)出現(xiàn)應(yīng)答水平降低，PSA與血清睪酮水平逐漸升高，腫瘤進(jìn)展，進(jìn)入去勢(shì)抵抗性前列腺癌階段[8-10]。目前對(duì)于去勢(shì)抵抗性前列腺癌階段病人，常用的治療藥物有細(xì)胞毒類(lèi)化療藥物和內(nèi)分泌治療藥物[11]。阿比特龍是細(xì)胞色素P450 17A1酶抑制劑，作為臨床新型的內(nèi)分泌治療藥物，其對(duì)老年前列腺癌病人的作用效果尚不明確，故本文對(duì)此展開(kāi)相關(guān)分析，觀察阿比特龍對(duì)老年前列腺癌病人PI3K/AKT信號(hào)通路及腫瘤標(biāo)志物水平的影響。

本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE、IL-8、TNF-α水平均顯著低于治療前及對(duì)照組，CD4+、CD4+/CD8+水平顯著高于治療前及對(duì)照組，提示在潑尼松基礎(chǔ)上應(yīng)用阿比特龍可明顯改善病人的炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)免疫功能，降低腫瘤標(biāo)志物水平。血清腫瘤標(biāo)志物是鑒別診斷腫瘤的有效指標(biāo)，也與病人機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫功能密切相關(guān)[12]。研究顯示，前列腺癌病人血清PSA、CEA、CYFRA21-1、NSE均為異常升高狀態(tài)，且其水平與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)[13]。CD4+與免疫活性細(xì)胞呈正相關(guān)，抑制性T細(xì)胞CD8+在抗腫瘤效應(yīng)中發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，前列腺癌病人細(xì)胞免疫處于抑制狀態(tài)，免疫功能低下則會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[14]。雄激素持續(xù)刺激前列腺癌細(xì)胞內(nèi)的雄激素受體是前列腺癌進(jìn)展的主要原因，P450 17A1酶在體內(nèi)雄激素合成的途徑上起到關(guān)鍵作用，可促進(jìn)雄激素分泌，加重炎癥水平[15]。阿比特龍主要通過(guò)抑制P450 17A1酶而發(fā)揮作用，P450 17A1酶活性抑制后可明顯減少來(lái)源于腎上腺及前列腺癌細(xì)胞的雄激素合成，從而降低病人雄激素水平，遏制腫瘤發(fā)展，降低炎癥及腫瘤標(biāo)志物水平。

本研究結(jié)果顯示，觀察組治療后AKT、PI3K表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組，提示阿比特龍對(duì)老年去勢(shì)抵抗性前列腺癌階段病人的積極療效可能與其對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。P13Ks是一種異源二聚體，由催化亞單位P110與調(diào)節(jié)亞單位P85組成，是肌醇和磷脂酰肌醇的重要激酶，具有脂類(lèi)激酶活性和蛋白激酶活性[16]。AKT為P13K/AKT信號(hào)通路中的一個(gè)核心激酶，活化后可通過(guò)多種方式影響其下游的相關(guān)分子，是關(guān)鍵的抗凋亡調(diào)控分子[17]。雄激素和雄激素受體間的相互作用在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，雄激素通過(guò)與前列腺細(xì)胞內(nèi)雄激素受體結(jié)合調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡[18]。通過(guò)阻斷P13K/AKT信號(hào)通路可導(dǎo)致激活雄激素受體的通路失活，從而降低雄激素水平，阻礙前列腺癌進(jìn)展。阿比特龍聯(lián)合潑尼松治療可下調(diào)AKT、PI3K表達(dá)，調(diào)控P13K/AKT信號(hào)通路，控制前列腺癌的發(fā)展。此外，本研究顯示，觀察組1年總生存率顯著高于對(duì)照組，表明阿比特龍對(duì)延長(zhǎng)前列腺癌病人生存時(shí)間具有價(jià)值，李俊等[19]的研究也顯示，阿比特龍聯(lián)合潑尼松治療去勢(shì)抵抗性前列腺癌病人較單純潑尼松治療可顯著延長(zhǎng)病人影像學(xué)無(wú)進(jìn)展生存期及總體生存期。

綜上，阿比特龍治療老年前列腺癌病人可顯著降低腫瘤標(biāo)志物水平，改善炎癥及免疫功能，并調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路，對(duì)延長(zhǎng)病人生存期具有價(jià)值。