吳小敏,張雙翔*,朱二鵬,許厚強(qiáng),趙佳福,程振濤,代興紅,陳秀華,袁超
(1.貴州省草地技術(shù)試驗(yàn)推廣站,貴州貴陽(yáng) 550025;2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽(yáng) 550025;3.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,貴州貴陽(yáng) 550002)
脂肪細(xì)胞起源于胚胎中胚層,由前體脂肪細(xì)胞分化形成,過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor,PPAR)、脂肪酸合酶(Fatty Acid Synthase,F(xiàn)AS)和激素敏感性脂肪酶(Hormone-Sensitive Lipase,HSL)是其分化與沉積中最重要的轉(zhuǎn)錄因子和關(guān)鍵酶基因。近年來(lái)一系列研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)在脂肪沉積中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。大部分lncRNA 由RNA 聚合酶II 轉(zhuǎn)錄,具有與mRNA 相似的5帽子結(jié)構(gòu)和3polyA 尾巴,在胚胎發(fā)育、脂肪沉積和肌肉生長(zhǎng)中發(fā)揮重要調(diào)控作用。Liu 等通過(guò)lncRNA 微陣列分析發(fā)現(xiàn),lncRNA Gm15290 能促進(jìn)脂質(zhì)沉積增加,調(diào)控脂肪形成基因和等表達(dá)。過(guò)表達(dá)lncRNA AK043773 可顯著抑制小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞中脂肪細(xì)胞分化和脂滴的形成。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),AMP 活化蛋白激酶1(Protein Kinase,AMP Activated Alpha 1,)是影響從江香豬肉品質(zhì)的重要候選基因。根據(jù)PRKAA1 篩選的lncRNA NONSUST004358.1 在從江香豬皮下脂肪和背最長(zhǎng)肌組織中有較高表達(dá),提示lncRNA NONSUST004358.1可能在從江香豬脂肪沉積中發(fā)揮重要調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分離培養(yǎng)從江香豬皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞,分析lncRNA NONSUST004358.1 在前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律,構(gòu)建pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 過(guò)表達(dá)載體,分析轉(zhuǎn)染后前體脂肪細(xì)胞中PRKAA1、FAS、HSL、PPAR的表達(dá)變化,以及對(duì)前體脂肪細(xì)胞中甘油三酯和膽固醇含量的影響,探究lncRNA NONSUST004358.1 在前體脂肪細(xì)胞分化中的作用。
1.1 組織來(lái)源 5日齡從江香豬背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪組織。
1.2 實(shí)驗(yàn)材料 T4 DNA 連接酶、限制性內(nèi)切酶I、I 和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為美國(guó)Thermo Fisher 公司的產(chǎn)品;膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒和2×Taq PCR Master Mix 為美國(guó)AxyGen 公司產(chǎn)品;0.1% I 型膠原酶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞培養(yǎng)板、巴氏吸管為無(wú)錫耐斯生物科技有限公司產(chǎn)品;含0.25% EDTA 的胰蛋白酶為賽澳美細(xì)胞技術(shù)(北京)有限公司產(chǎn)品;胰島素、地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤為Sigma 公司產(chǎn)品;胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基和Opti-MEM 培養(yǎng)基為美國(guó)Gibco 公司產(chǎn)品;FuGENEHD Transfection Reagent 為Promega公司產(chǎn)品;細(xì)胞RNA 提取試劑盒為美國(guó)OMEGA 公司產(chǎn)品;SsoFast EvaGreen Supermix 為寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品;油紅O 染色試劑盒為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品;甘油三酯和膽固醇檢測(cè)試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定 參照屈長(zhǎng)青等研究方法,在無(wú)菌環(huán)境下分離從江香豬背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪組織,剪掉血管與筋膜后剪成1~2 mm,利用0.1% 的I型膠原酶在37℃條件對(duì)其進(jìn)行消化,皮下脂肪和背最長(zhǎng)肌組織分別消化1 h 和2 h,將消化混合液分別經(jīng)200目、400 目細(xì)胞篩進(jìn)行過(guò)濾,濾液在1 500 ×g 條件下離心5 min,棄上清,沉淀用DMEM/F-12(不含胎牛血清)培養(yǎng)基吹打清洗,重復(fù)3 次,最后用含10% 胎牛血清的DMEM/F-12 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀并接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),運(yùn)用差速貼壁法(4 h)對(duì)肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞進(jìn)一步純化,皮下前體脂肪細(xì)胞在24 h 后進(jìn)行換液。在皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞培生長(zhǎng)達(dá)到抑制后,加入含10% FBS+1 μmol/L 地塞米松+5 μg/mL 胰島素+
0.5 mmol/L 3-異丁基-1 甲基黃嘌呤的脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基,培養(yǎng)48 h 后,換成含10% FBS+1 μg/m L胰島素的脂肪細(xì)胞分化維持培養(yǎng)基,2 d 更換培養(yǎng)液1次,直到細(xì)胞脂滴達(dá)到80%時(shí)按照油紅O 染色說(shuō)明書對(duì)誘導(dǎo)分化的細(xì)胞進(jìn)行染色鑒定。
1.3.2 引物設(shè)計(jì) 根據(jù)前期篩選的豬lncRNA NONSUST 004358.1 序列及GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)登錄的豬(登錄號(hào):XM_021076521.1)、(登錄號(hào):NM_213839.1)、(登錄號(hào):NM_214315.3)和(登錄號(hào):NM_214379.1)基因序列,利用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)lncRNA NONSUST004358.1 擴(kuò)增引物與qRTPCR 引物(表1),引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
表1 qRT-PCR 引物信息
1.3.3 pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建 以前期構(gòu)建的T 克隆載體pMDlncRNA NONSUST004358.1 為模板,根據(jù)設(shè)計(jì)加了酶切位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系30 μL:Taq DNA 聚合酶15 μL,上游引物(10 pmol/L)1 μL,下游引物(10 pmol/L)1 μL,100 μg/μL cDNA模板1 μL,ddHO 12 μL。PCR 反應(yīng)條件:94℃變性4 min,94℃變性40 s,60℃退火50 s,72℃延伸10 min,共30 個(gè)循環(huán),4℃保存。PCR 產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),利用DNA 膠回收試劑盒對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行回收純化,并用限制性內(nèi)切酶I 和I 對(duì)回收產(chǎn)物和pEGFP-C1 進(jìn)行雙酶切,16℃條件下經(jīng)T4 DNA 連接酶連接過(guò)夜,將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5,37℃培養(yǎng)12 h 后,挑取單菌落并進(jìn)行菌液PCR 鑒定,對(duì)PCR 鑒定為陽(yáng)性的菌液用質(zhì)粒提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒提取,質(zhì)粒進(jìn)一步雙酶切鑒定,最后將酶切鑒定正確的重組質(zhì)粒裝樣送上海英濰捷基有限公司測(cè)序。
1.3.4 qRT-PCR 方法的建立 分別在肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的0、24、36、48、60、72、96 h和120 h 時(shí)提取細(xì)胞RNA 并逆轉(zhuǎn)錄。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 轉(zhuǎn)染前體脂肪細(xì)胞,36 h 后進(jìn)行RNA 的提取并逆轉(zhuǎn)錄。以逆轉(zhuǎn)錄的cDNA 為模板,利用qRT-PCR 方法檢測(cè)lncRNA NONSUST004358.1 和PRKAA1 在2 種前體脂肪細(xì)胞不同誘導(dǎo)時(shí)間中和細(xì)胞分化相關(guān)基因和的相對(duì)表達(dá)量。熒光定量PCR 體系(10 μL):2×SsoFast EvaGreen Supermix(High ROX)5 μL,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,100 μg/μL cDNA 模板1 μL,ddHO 3 μL。熒光定量PCR 反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性3 min、95℃變性30 s、56℃/60℃退火30 s、40 個(gè)循環(huán)后進(jìn)行熔解曲線分析、延伸30 s、95℃終延伸50 s,每個(gè)樣品3 個(gè)重復(fù)。
1.3.5 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞分化相關(guān)基因蛋白的表達(dá)量將重組質(zhì)粒pEGFP-C1-LncRNA NONSUST004358.1 轉(zhuǎn)染48 h 的前體脂肪細(xì)胞,利用1×RIPA 細(xì)胞裂解液進(jìn)行蛋白提取,蛋白定量后加入適量的蛋白上樣緩沖液在100 ℃條件下進(jìn)行蛋白變性,-80℃保存?zhèn)溆?。加入按比例稀釋后的PRKAA1、FAS、HSL、PPAR一抗(山羊抗兔1:1 500)4℃過(guò)夜,TBST 洗3 次,加入二抗(山羊抗兔1:2 000)37℃孵育2 h,用-actin(鼠多抗1:1 500)作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)化,利用ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒進(jìn)行顯色。
1.3.6 甘油三酯和膽固醇含量的檢測(cè) 將重組質(zhì)粒pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 轉(zhuǎn)染前體脂肪細(xì)胞6 h 后,加入配制的細(xì)胞誘導(dǎo)分化液和細(xì)胞維持液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,待脂滴達(dá)到飽和后,棄細(xì)胞培養(yǎng)液,利用1×RIPA 細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞并離心,取上清。按照甘油三酯和膽固醇使用說(shuō)明書對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。
1.3.7 數(shù)據(jù)處理 與分析qRT-PCR 數(shù)據(jù)運(yùn)用2方法進(jìn)行計(jì)算分析,同時(shí)利用軟件SPSS 18.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析;Western blot 灰度值運(yùn)用Image Lab 軟件進(jìn)行計(jì)算,<0.01 表示差異極顯著,<0.05 表示差異顯著。
2.1 脂肪細(xì)胞的鑒定 待細(xì)胞長(zhǎng)至85%時(shí),利用分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基和維持培養(yǎng)基對(duì)2 種細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)。如圖1 所示,在肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,誘導(dǎo)培養(yǎng)2 d 時(shí)細(xì)胞形態(tài)由梭形開始向橢圓形變化;誘導(dǎo)培養(yǎng)4 d 時(shí)橢圓形細(xì)胞數(shù)量增多,出現(xiàn)少量脂滴;誘導(dǎo)培養(yǎng)6 d 后細(xì)胞脂滴趨于明顯;誘導(dǎo)培養(yǎng)8 d,細(xì)胞出現(xiàn)大量脂滴。待前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后按照油紅O 染色的說(shuō)明書進(jìn)行鑒定。皮下前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及油紅O 染色與肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞基本一致。
圖1 前體脂肪細(xì)胞油紅O 鑒定
2.2 lncRNA NONSUST004358.1 和PRKAA1 在前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律 qRT-PCR 結(jié)果顯示,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,lncRNA NONSUST004358.1在誘導(dǎo)72 h 表達(dá)量最高,其次是0、48、60 h 和108 h,24 h 表達(dá)量最低,PRKAA1 在60 h 表達(dá)量最高,其次是72、48、96 h 和36 h 表達(dá)較高,108 h 表達(dá)量最低;皮下前體脂肪細(xì)胞中,lncRNA NONSUST004358.1 在誘導(dǎo)0 h 表達(dá)量最高,其次是72 h,在36 h 表達(dá)最低,PRKAA1 在48 h 表量最高,其次是60 h,108 h 表達(dá)量最低(圖2)。兩基因在2 種前體脂肪細(xì)胞中的表達(dá)基本一致,在48~96 h 表達(dá)量較高。
圖2 lncRNA NONSUST004358.1 和PRKAA1 在前體脂肪細(xì)胞中的表達(dá)
2.3 重組質(zhì)粒pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1的鑒定 酶切結(jié)果顯示,在1 227 bp 和4 700 bp 左右出現(xiàn)單一亮帶(圖3),將鑒定的重組質(zhì)粒送上海英濰捷基有限公司進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)未發(fā)生基因突變(圖4),表明重組質(zhì)粒pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 構(gòu)建成功。
圖3 pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 重組質(zhì)粒雙酶切
圖4 pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 重組質(zhì)粒測(cè)序比對(duì)結(jié)果圖
2.4 過(guò)表達(dá)對(duì)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)的影響 qRTPCR 研究結(jié)果如圖5 所示,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 轉(zhuǎn)染后和的相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(<0.01);皮下前體脂肪細(xì)胞中,pEGFP-C1-lncRNA NONSUST0 04358.1 轉(zhuǎn)染后表達(dá)量高于對(duì)照組(<0.05),低于對(duì)照組(<0.01),(<0.01)和(<0.05)高于對(duì)照組。對(duì)脂肪分化相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果顯示,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,和表達(dá)量均高于對(duì)照組(<0.01),表達(dá)量低于對(duì)照組(<0.01);皮下前體脂肪細(xì)胞中,和表達(dá)量均低于對(duì)照組(<0.01),表達(dá)量高于對(duì)照組(<0.01)。
圖5 pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 轉(zhuǎn)染后對(duì)脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)的影響
2.6 甘油三酯和膽固醇含量檢測(cè) 如圖6 所示,過(guò)表達(dá)lncRNA NONSUST004358.1 后,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,膽固醇含量高于對(duì)照組(<0.01),皮下前體脂肪細(xì)胞差異不顯著;在皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中甘油三酯含量差異不顯著。
圖6 甘油三酯(A)和膽固醇(B)含量檢測(cè)
脂肪是動(dòng)物體內(nèi)重要的儲(chǔ)能物質(zhì),與機(jī)體能量平衡密切相關(guān),在畜牧動(dòng)物體內(nèi),脂肪的分布和含量影響畜產(chǎn)品的肉品質(zhì)和風(fēng)味。脂肪是由中胚層的特化細(xì)胞群分化而來(lái),其分化是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程,伴隨著細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變,受到、等多種轉(zhuǎn)錄因子和PKA(Protein Kinase A System)和MAKP(Mitogen-Activated Protein Kinase)等 信號(hào)通路的調(diào)控。近年的研究發(fā)現(xiàn),lncRNA 可通過(guò)調(diào)控脂肪相關(guān)基因表達(dá)從而參與脂肪細(xì)胞的分化與形成。Chen 等研究發(fā)現(xiàn),lnc-U90926 過(guò)表達(dá)會(huì)抑制3T3-L1 脂肪細(xì)胞的分化,抑制脂質(zhì)蓄積,降低過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體2(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-2,PPAR2)、脂肪酸結(jié)合蛋白4(Fatty Acid Binding Protein,4FABP4)和脂聯(lián)素(Adiponectin,AdipoQ)的表達(dá)。Xiong 等研究發(fā)現(xiàn),敲除lncRNA AK079912 可抑制褐色前脂肪細(xì)胞的分化,導(dǎo)致脂肪沉積的減少和脂肪代謝相關(guān)基因(脂蛋白脂肪酶:;;甘油三酸酯脂肪酶:)的下調(diào);豬前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中,干擾lncRNA 00046716的表達(dá)導(dǎo)致FASN mRNA 和蛋白表達(dá)的下降,抑制了脂肪細(xì)胞分化,與miRNA-149 結(jié)合后會(huì)影響FASN 的表達(dá),調(diào)控豬前體脂肪細(xì)胞分化與甘油三酯在成熟脂肪細(xì)胞中的積累。
本課題組前期通過(guò)PRKAA1 篩選出了相關(guān)lncRNA NONSUST004358.1,其在從江香豬的肝臟、脂肪和背最長(zhǎng)肌組織中具有較高表達(dá)且高于大白豬,暗示其可能參與從江香豬的脂肪代謝與沉積。本實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)從江香豬原代皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞,利用qRT-PCR檢 測(cè)lncRNA NONSUST004358.1 和PRKAA1 在前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá),分析其表達(dá)規(guī)律。qRTPCR 結(jié)果顯示,在肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中,PRKAA1 與lncRNA NONSUST004358.1 均呈先上升后下降的表達(dá)模式,這與lncRNA 00046716 在豬前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)一致,通過(guò)與從江香豬前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中脂肪相關(guān)的基因的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),lncRNA NONSUST004358.1 與PPAR、FAS 和ACC等在肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中具有相同的表達(dá)趨勢(shì),暗示其可能在肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用;皮下前體脂肪細(xì)胞中,NONSUST004358.1 雖在分化前期(0~36 h)與和的表達(dá)不同,但在36 h 之后卻表現(xiàn)出相同的表達(dá)規(guī)律,表明lncRNA NONSUST0043 58.1 可能在皮下前體脂肪細(xì)胞分化后期對(duì)脂肪細(xì)胞的分化具有調(diào)控作用。lncRNA NONSUST004358.1 在肌內(nèi)與皮下前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中表現(xiàn)出不同的表達(dá)規(guī)律,表明其在皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中具有不同的功能。通過(guò)檢測(cè)前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中l(wèi)ncRNA NONSUST004358.1 和的表達(dá)量,分析其表達(dá)規(guī)律,為后續(xù)研究其在脂肪分化過(guò)程中的作用機(jī)制提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
為探究lncRNA NONSUST004358.1 在前體脂肪細(xì)胞中對(duì)脂肪分化相關(guān)基因的影響,本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建重組真核表達(dá)載體pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1,轉(zhuǎn)染肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞,利用qRT-PCR 和Western blot 檢測(cè)脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá),qRT-PCR結(jié)果顯示,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,和的表達(dá)量均上調(diào);皮下前體脂肪細(xì)胞中,和表達(dá)量上調(diào),表達(dá)下調(diào)。表明肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞中l(wèi)ncRNA NONSUST00 4358.1 在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)和基因具有正向調(diào)控作用,對(duì)FAS 在皮下前體脂肪細(xì)胞中具有負(fù)調(diào)控。Western blot 結(jié)果顯示,肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)lncRNA NONSUST004358.1 上調(diào)了PRKAA1、FAS 和PPAR蛋白表達(dá) 量,HSL表達(dá)下調(diào);皮下前體脂肪細(xì)胞中,F(xiàn)AS 和PPAR蛋白表達(dá)量上調(diào),PRKAA1 和HSL 蛋白表達(dá)量下調(diào)。說(shuō)明lncRNA NONSUST004358.1 在肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞中對(duì)脂肪合成基因FAS 和PPAR的蛋白具有正向調(diào)控,暗示其參與脂肪細(xì)胞的分化與脂肪的形成。FAS和PPAR作為作為脂類代謝的重要調(diào)節(jié)因子,其活性的高低對(duì)動(dòng)物體脂沉積具有重要意義,過(guò)表達(dá)lncRNA NONSUST004358.1 均促進(jìn)肌內(nèi)與皮下前體脂肪細(xì)胞中FAS、PPARmRNA 與蛋白的表達(dá),表明lncRNA NONSUST004358.1 是影響豬體脂沉積的重要候選基因。甘油三酯和膽固醇作為脂肪細(xì)胞的主要代謝產(chǎn)物,脂肪細(xì)胞分化程度影響甘油三酯和膽固醇含量。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定轉(zhuǎn)染pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 后肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞中甘油三酯和膽固醇含量發(fā)現(xiàn),含量均上調(diào)。表明lncRNA NONSUST004358.1 在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平調(diào)控PRKAA1、FAS、PPAR和HSL 的表達(dá),促進(jìn)豬皮下和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞的分化與脂肪的形成。lncRNA 參與脂肪代謝的主要調(diào)控機(jī)制是直接與靶基因結(jié)合、招募轉(zhuǎn)錄物、作為輔助因子或通過(guò)與 miRNAs 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合調(diào)控靶基因的表達(dá),而lncRNA NONSUST004358.1對(duì)PRKAA1、FAS、PPAR和HSL 的具體調(diào)控機(jī)制還需進(jìn)一步研究。
本實(shí)驗(yàn)中,lncRNA NONSUST004358.1 在肌內(nèi)和皮下前體脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)均呈現(xiàn)下降、上升、再下降的表達(dá)模式,能調(diào)控脂肪沉積相關(guān)基因的表達(dá),影響脂肪細(xì)胞中油三酯和膽固醇含量,研究結(jié)果為后續(xù)探究lncRNA NONSUST004358.1 在脂肪細(xì)胞分化中的作用機(jī)制提供了理論支撐。