張 瑜，張叁保，申玉建，胡艷，黃艷娜，韋英明，陳少梅，宣澤義，蔣欽楊*

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530004；2.廣西大學(xué)農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究院，廣西南寧 530004；3.廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所，廣西家畜遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530005）

努比亞山羊原產(chǎn)于非洲，是世界著名的乳肉兼用型品種，具有體型大、適應(yīng)能力強(qiáng)、繁殖性能高和生長(zhǎng)速度快等優(yōu)勢(shì)，適用于雜交改良地方品種。隨著全球氣候變暖，熱應(yīng)激（Heat Stress,HS）已成為危害全球畜牧業(yè)的主要環(huán)境應(yīng)激。在高溫條件下，當(dāng)環(huán)境的有效溫度超過(guò)活畜的等熱區(qū)時(shí)，動(dòng)物的總熱負(fù)荷超過(guò)其散熱能力，機(jī)體發(fā)生HS 反應(yīng)。而現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)?；奶攸c(diǎn)更是加重了HS 對(duì)畜禽的傷害。據(jù)報(bào)道，山羊的等熱區(qū)為20～28℃，適宜的氣候環(huán)境溫度為5～25℃，相對(duì)濕度為30%～70%。雖然山羊具有較強(qiáng)的耐受力，但長(zhǎng)期處于HS 狀態(tài)，其生長(zhǎng)、繁殖性能和免疫功能也會(huì)受到損害。骨骼肌是負(fù)責(zé)機(jī)體運(yùn)動(dòng)和平衡的重要器官，在動(dòng)物的能量?jī)?chǔ)存和消耗過(guò)程中扮演著不可替代的角色。因此，揭示HS 對(duì)山羊肌肉生長(zhǎng)的影響及作用機(jī)制具有重要意義。研究表明，HS 通過(guò)降低畜禽采食量影響肌肉生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降。在妊娠母豬中，HS 不僅嚴(yán)重影響母豬的生長(zhǎng)性能，還會(huì)長(zhǎng)期影響后代的生長(zhǎng)。Li 等研究發(fā)現(xiàn)，孕晚期HS 通過(guò)激活MSTN 通路影響仔豬背最長(zhǎng)肌肌肉生長(zhǎng)，這可能與母豬的乳成分有關(guān)。Gao 等發(fā)現(xiàn)，HS 不僅能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，擾亂細(xì)胞周期分布，減少細(xì)胞數(shù)量；還可通過(guò)Akt/mTOR/S6K 信號(hào)通路降低骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)量。山羊作為在人類生產(chǎn)生活中發(fā)揮重要作用的一類反芻動(dòng)物，其肌肉組織的生長(zhǎng)和組成決定了產(chǎn)肉量和肉品質(zhì)量。因此，揭示HS 對(duì)山羊肌肉生長(zhǎng)的影響對(duì)于畜牧業(yè)具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。

近年來(lái)，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、畜牧等領(lǐng)域，是挖掘特定條件下差異表達(dá)基因、揭示分子機(jī)制的有效方法。Li 等共發(fā)現(xiàn)HS 湖羊肝臟組織中存在520 個(gè)差異表達(dá)mRNAs，顯著富集在PPAR 信號(hào)通路、維生素消化和吸收等信號(hào)通路。Jastrebski 等揭示了HS 通過(guò)調(diào)控家禽體內(nèi)負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、DNA 復(fù)制和DNA 修復(fù)以及免疫功能的基因的表達(dá)，從而影響糖代謝、脂肪沉積以及谷胱甘肽生成等過(guò)程。Srikanth 等發(fā)現(xiàn)HS 杜洛克豬體內(nèi)上調(diào)基因主要富集在凋亡、toll樣受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和氧化應(yīng)激等信號(hào)通路，下調(diào)基因主要富集在免疫應(yīng)答和ATP 合成等信號(hào)通路。以上研究均表明，HS 對(duì)畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要。目前，有關(guān)HS對(duì)畜禽影響的研究主要集中在生長(zhǎng)性能、繁殖性能和免疫等方面，但闡述HS 影響肌肉生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理方面的報(bào)道較少。本研究通過(guò)建立努比亞山羊HS 模型，采用轉(zhuǎn)錄組分析技術(shù)以期篩選差異表達(dá)基因，探究公羊在高溫環(huán)境中肌肉發(fā)育的信號(hào)通路，挖掘公羊耐熱相關(guān)的候選基因，為耐熱性公羊的育種提供理論基礎(chǔ)。

1 材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 將6 只體況良好、體重相近的努比亞山羊公羊（6 月齡，32.8±3.4 kg）隨機(jī)分成對(duì)照組（C 組）和熱應(yīng)激組（HS 組），分別飼養(yǎng)于2 個(gè)空調(diào)房?jī)?nèi)。每日于08:00 和17:00 飼喂2 次，確保山羊自由采食、自由飲水，飼糧營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。定時(shí)觀察每只羊的健康及采食狀況。

表1 基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 主要試劑及儀器 Trizol、PCR 擴(kuò)增試劑盒均購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司；超微量紫外分光光度計(jì)購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司；PCR 儀（BIO-RAD）購(gòu)自美國(guó)Applide Biosystems 公司；Apresys 179-TH 溫濕度記錄儀購(gòu)自艾普瑞（上海）精密光電有限公司。

1.3 HS 模型建立 實(shí)驗(yàn)山羊分別飼養(yǎng)于2 個(gè)空調(diào)房?jī)?nèi)，HS 組空調(diào)房另配有加熱裝置，保證其能控制環(huán)境溫度和相對(duì)濕度。預(yù)飼期為7 d，2 個(gè)空調(diào)房的初始溫度為23℃，相對(duì)濕度為50%。正式實(shí)驗(yàn)為30 d，C 組保持23℃不變，HS 組9:00—17:59 逐漸升溫至35℃，18:00至次日8:59 降溫至30℃。在空調(diào)房中部距離地面1.7 m處掛置Apresys 179-TH 溫濕度記錄儀，設(shè)10 min 為間隔，記錄實(shí)驗(yàn)期間溫度和濕度，利用Tucker 等提出的THI 公式測(cè)定環(huán)境溫濕度指數(shù)（THI）：THI=（1.8×T+32）-［（0.55-0.0055×RH）×（1.8×T-26）］，T 為溫度（℃），RH 為相對(duì)濕度。

正式實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別采集2 組山羊腿臀肌肉樣品，用于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析。

1.4 努比亞山羊總RNA 提取 采用Trizol 法提取努比亞山羊腿臀肌肉組織總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度和純度，留用濃度>500 ng/μL，且1.6

1.5 轉(zhuǎn)錄組（RNA-Seq）測(cè)序分析 提取6 只努比亞山羊肌肉組織總RNA，送至上海歐易生物科技有限公司進(jìn)行高通量測(cè)序?？俁NA 經(jīng)純化后對(duì)其完整性和濃度進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)合格的樣品經(jīng)純化后，構(gòu)建mRNA 文庫(kù)?；贗llumina HiSeq 測(cè)序平臺(tái)，對(duì)質(zhì)檢合格的文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序，回收測(cè)序數(shù)據(jù)。經(jīng)FastQC 軟件質(zhì)控獲得純凈序列（Clean reads），然后將得到的Reads 比對(duì)到參考基因組上，使用FPKM 標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)HS 組及C 組樣本進(jìn)行基因表達(dá)量分析。

1.6 差異表達(dá)基因的分析及篩選 采用檢驗(yàn)對(duì)2 個(gè)樣品的基因表達(dá)進(jìn)行差異分析，根據(jù)基因表達(dá)量對(duì)各樣品進(jìn)行主成分分析（PCA），對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行富集分析，通過(guò)BLAST 比對(duì)GO 與KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得注釋信息，結(jié)合FoldChange>2、<0.05 及基因在通路中的功能等條件篩選出HS 組山羊和C 組山羊肌肉組織的差異表達(dá)基因。

1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 以努比亞山羊肌肉組織總RNA 為模板，篩選4 個(gè)熱休克蛋白家族的基因，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)其相對(duì)表達(dá)量以評(píng)判HS 模型的建立結(jié)果。為進(jìn)一步驗(yàn)證RNA-Seq 測(cè)序獲得HS 努比亞山羊差異表達(dá)基因的準(zhǔn)確性，隨機(jī)選擇9 個(gè)差異表達(dá)基因，對(duì)其進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 驗(yàn)證。根據(jù)GenBank 發(fā)布的山羊基因序列（登錄號(hào)見(jiàn)表2），利用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)特異性引物，引物序列見(jiàn)表2。以山羊-肌動(dòng)蛋白（-，登錄號(hào)：XM-018039831.1）為內(nèi)參基因。引物均由南寧捷尼斯生物科技有限公司合成。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 引物序列

PCR 反應(yīng)體系20 μL：上、下游引物（10 μmol/L）各0.5 μL，cDNA 2 μL，2×Taq PCR Master Mix 10 μL，ddHO 7 μL。PCR 擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性10 min；95℃變性10 s，60℃退火20 s，72℃延伸15 s，共35個(gè)循環(huán)。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 THI 數(shù)據(jù)使用Excel 2010 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理后，采用SPSS 17.0 軟件比較不同處理的均值與標(biāo)準(zhǔn)誤，并進(jìn)行One-Way ANOVA 方差分析。采用2方法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量，利用檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，并利用GraphPad 軟件進(jìn)行繪圖，以<0.05 表示差異顯著，<0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 HS模型 Tucker 等按THI 將山羊HS分為4個(gè)等級(jí)：THI<72 時(shí)表示無(wú)HS；72 ≤THI ≤79 時(shí)為輕度HS；7988 時(shí)為重度HS。如圖1 所示，實(shí)驗(yàn)期間HS 組空調(diào)房每日平均THI 均在81.18 以上，表明山羊處于高度HS 狀態(tài)，其中00:00—08:50 平均THI 為80.16，9:00—18:59 平均THI 為82.46，19:00 至23:50平均THI 為80.46；C 組空調(diào)房每日平均THI 均在70 以下，表明該條件下山羊沒(méi)有處于HS 狀態(tài)。

圖1 實(shí)驗(yàn)期間溫濕度指數(shù)

篩選4 個(gè)熱休克蛋白70 家族基因，實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)其相對(duì)表達(dá)量。如圖2 所示，HS 組基因相對(duì)表達(dá)量高于C 組（<0.01），HS 組基因相對(duì)表達(dá)量高于C 組（<0.05），表明HS模型建立成功。

圖2 熱休克蛋白家族基因的相對(duì)表達(dá)量

2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的過(guò)濾及質(zhì)量評(píng)估 將原始的測(cè)序數(shù)據(jù)中除去低質(zhì)量、帶接頭的序列后，每個(gè)樣品的測(cè)序所得數(shù)據(jù)組成見(jiàn)表3。由表3 可知，每個(gè)樣品的原始序列數(shù)都在40 M 以上，每個(gè)樣本獲得的純凈堿基數(shù)都超過(guò)了5 G，6 個(gè)樣品共獲得了39 G 的純凈堿基，Q30 均在94% 以上，表明測(cè)序質(zhì)量較好，完整性較高，可用于后續(xù)生物信息學(xué)分析。

表3 數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量情況表

2.3 表達(dá)差異分析結(jié)果 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共鑒定到20 587個(gè)基因，利用DESeq 軟件對(duì)各個(gè)樣本基因表達(dá)進(jìn)行差異分析，按照表達(dá)差異倍數(shù)log|FoldChange|>1、顯著性<0.05 選差異表達(dá)基因，結(jié)果顯示，共得到95 個(gè)差異基因，其中34 個(gè)上調(diào)基因，61 個(gè)下調(diào)基因（圖3A）。對(duì)所有基因和樣品進(jìn)行雙向聚類分析，結(jié)果表明，相關(guān)性較高，均一性較好（圖3B）。根據(jù)基因表達(dá)量對(duì)各樣品進(jìn)行主成分分析（PCA），距離越近說(shuō)明樣本間相似性越高。PCA 分析結(jié)果顯示，HS 山羊與對(duì)照組山羊樣品分離相對(duì)較明顯（圖3C），表明兩組樣本在基因表達(dá)的構(gòu)成上存在一定差異。

圖3 差異表達(dá)基因分析圖

2.4 差異表達(dá)基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR 驗(yàn)證結(jié)果 為驗(yàn)證RNA-Seq 測(cè)序結(jié)果的可靠性，選擇9 個(gè)差異表達(dá)基因（和）進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)和基因在HS 努比亞山羊肌肉組織中的相對(duì)表達(dá)量低于C 組山羊（<0.01），而和基因在HS 努比亞山羊肌肉組織中的相對(duì)表達(dá)量高于C 組山羊（<0.01）（圖4），即實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)結(jié)果與RNA-Seq 測(cè)序結(jié)果趨勢(shì)一致。

圖4 差異表達(dá)基因RT-PCR 驗(yàn)證分析

2.5 差異表達(dá)基因的GO 功能富集分析 對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO 功能富集分析，結(jié)果顯示共涉及509 個(gè)GO 條目，分為3 個(gè)大類：細(xì)胞組分（Cellular Component，67個(gè)）、分子功能（Molecular Function，127 個(gè)）和生物學(xué)過(guò)程（Biological Process，315 個(gè)）。選取每個(gè)大類中富集最顯著的前10 個(gè)功能類別進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，差異上調(diào)基因主要富集在氧載體活性（Oxygen Carrier Activity）、氧結(jié)合（Oxygen Binding）、血紅素結(jié)合（Heme Binding）、血紅蛋白復(fù)合體（Hemoglobin Complex）和細(xì)胞質(zhì)核區(qū)（Perinuclear Region of Cytoplasm）等功能；差異下調(diào)基因主要富集在等離子膜（Plasma Membrane）、薄膜的整體組成部分（Integral Component of Membrane）、細(xì)胞外空間（Extracellular Space）和鈣離子結(jié)合（Calcium Ion Binding）等功能（圖5）。

圖5 差異表達(dá)基因的GO 功能富集分析

2.6 差異表達(dá)基因的KEGG 通路富集分析 KEGG 富集分析結(jié)果顯示，差異表達(dá)基因共涉及156 個(gè)通路。選取富集最顯著的前20 條KEGG 通路，其中，差異上調(diào)基因主要富集在瘧疾（Malaria）、非洲錐蟲(chóng)?。ˋfrican Trypanosomiasis）、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性（Natural Killer Cell Mediated Cytotoxicity）和人類免疫缺陷病毒1 感染（Human Immunodeficiency Virus 1 Infection）等通路；差異下調(diào)基因富集在MAPK 信號(hào)通路（MAPK Signaling Pathway）、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化（Fluid Shear Stress and Atherosclerosis）和Ras 信號(hào)通路（Ras Signaling Pathway）（圖6）；包含差異基因較多的通路與免疫反應(yīng)和能量代謝密切相關(guān)。

圖6 差異表達(dá)基因的KEGG 通路富集分析

挑選與肌肉發(fā)育相關(guān)且顯著差異基因富集較多的8個(gè)通路，包括細(xì)胞黏附分子（CAMs）、MAPK 信號(hào)通路（MAPK Signaling Pathway）、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（Natural Killer Cell Mediated Cytotoxicity）、GnRH 信號(hào)通路（GnRH Signaling Pathway）、Fc介導(dǎo)的吞噬作用（Fc Gamma R-Mediated Phagocytosis）、黏著斑（Focal Adhesion）、磷脂酶D 信號(hào)通路（Phosp holipase D Signaling Pathway）、mTOR 信號(hào)通路（mTOR Signaling Pathway），共包含16 個(gè)差異基因，其中等可能參與調(diào)控HS 山羊肌肉生長(zhǎng)發(fā)育（表4）。

表4 HS 山羊肌肉組織差異表達(dá)基因顯著性富集的8 條KEGG 信號(hào)通路

3 討 論

3.1 HS 對(duì)HSP70 家族基因表達(dá)的影響 HS 是指動(dòng)物受到熱環(huán)境的刺激后，溫度感受器發(fā)出神經(jīng)沖動(dòng)，刺激體溫調(diào)節(jié)中樞，而機(jī)體自身的體溫調(diào)節(jié)能力不足，引發(fā)的一系列非特異性反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體在受到應(yīng)激刺激時(shí)，組織細(xì)胞會(huì)快速產(chǎn)生熱休克蛋白來(lái)抵抗應(yīng)激帶來(lái)的損傷。研究表明，HSP70 是熱休克蛋白家族中最保守、含量最豐富的一種非特異性內(nèi)源保護(hù)蛋白，具有保護(hù)變性蛋白折疊、展開(kāi)和復(fù)性的伴侶活性。有研究表明，HSP70 在熱休克蛋白家族中，對(duì)溫度變化最為敏感。Nagayach 等和Banerjee 等通過(guò)研究 不同季節(jié)對(duì)動(dòng)物HSP70 家族基因的影響，發(fā)現(xiàn)夏季基因表達(dá)量明顯高于冬季。白丹丹研究發(fā)現(xiàn)，三河牛血淋巴細(xì)胞HSP70 家族基因（和）的表達(dá)量在冷熱應(yīng)激期均顯著升高，說(shuō)明動(dòng)物機(jī)體在應(yīng)激條件下，自主提高自我保護(hù)機(jī)制和對(duì)外界不良刺激的應(yīng)對(duì)能力。彭孝坤研究發(fā)現(xiàn)，HS 肉羊血淋巴細(xì)胞和mRNA 表達(dá)量都有不同程度的升高，這與本研究結(jié)論一致。眾多報(bào)道表明，HSP70 可作為動(dòng)物冷熱應(yīng)激的重要分子生物標(biāo)志物。因此，本研究選取HSP70 家族中具有代表性的4 個(gè)基因，結(jié)果表明，HS 山羊肌肉組織中基因相對(duì)表達(dá)量都有不同程度的升高，證明HS 模型建立成功。

3.2 HS 對(duì)肌肉發(fā)育的影響 肌肉發(fā)育在生物個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中必不可少，由多個(gè)基因和外界環(huán)境共同調(diào)控，是現(xiàn)代動(dòng)物科學(xué)的重要研究方向之一。目前，有關(guān)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于篩選HS 山羊肌肉發(fā)育相關(guān)候選基因的研究很少，所以利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)挖掘調(diào)控HS 山羊肌肉發(fā)育的潛在基因具有重要意義。HS 通過(guò)增加動(dòng)物體內(nèi)的熱負(fù)荷，擾亂正常的新陳代謝，除了引起生長(zhǎng)速度、采食量和繁殖能力下降外，還會(huì)影響肌肉的生理變化，進(jìn)而降低肌肉生長(zhǎng)，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。Ma 等研究發(fā)現(xiàn)，慢性HS 通過(guò)下調(diào)IGFs-mTOR 信號(hào)通路，導(dǎo)致胸肌質(zhì)量和產(chǎn)量降低，肌肉蛋白質(zhì)合成和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)減少，肉雞的生長(zhǎng)性能降低。Barnes 等研究發(fā)現(xiàn)，HS 羔羊的采食量、肌肉生長(zhǎng)和代謝效率降低，導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降。Gao 等發(fā)現(xiàn)，短期HS 通過(guò)激活A(yù)kt/mTOR/S6K 信號(hào)通路顯著促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖，長(zhǎng)期HS 通過(guò)抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡降低骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞數(shù)量。本研究發(fā)現(xiàn)，HS 山羊肌肉組織中有和等16 個(gè)與肌肉發(fā)育相關(guān)的差異表達(dá)基因，它們主要富集在8 個(gè)通路，包括細(xì)胞黏附分子、MAPK 信號(hào)通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、GnRH 信號(hào)通路、Fc介導(dǎo)的吞噬作用、黏著斑、磷脂酶D 信號(hào)通路、mTOR信號(hào)通路。一些與肌肉發(fā)育相關(guān)的通路已被確認(rèn)，包括GnRH 信號(hào)通路、mTOR 信號(hào)通路和MAPK 信號(hào)通路。有研究表明，MAPK 信號(hào)通路是骨骼肌中響應(yīng)氧化、能量和應(yīng)激的主調(diào)控因子，能夠?qū)⒐趋兰≈械募?xì)胞應(yīng)激與適應(yīng)性反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，其失調(diào)會(huì)阻礙骨骼肌的適應(yīng)潛能。另有研究表明，MAPK 信號(hào)通路參與骨骼肌生成、肌肉損傷和分化，是激活程序性細(xì)胞死亡所必需的，而本研究中MAPK 信號(hào)基因的富集可能提示骨骼肌細(xì)胞損傷和凋亡的觸發(fā)。Jaafar等研究發(fā)現(xiàn)，磷脂酶D 信號(hào)通路參與肌肉發(fā)育并決定肌肉細(xì)胞大小。MAPK、黏著斑和Fc介導(dǎo)的吞噬作用可影響衛(wèi)星成纖維細(xì)胞的增殖分化。此外，參考他人對(duì)骨骼肌發(fā)育的相關(guān)研究，本研究在參與肌肉生長(zhǎng)發(fā)育較為經(jīng)典的通路中篩選出5 個(gè)顯著差異表達(dá)基因：，其中基因調(diào)控肌肉發(fā)育已有相關(guān)報(bào)道，但是和基因的調(diào)控機(jī)制還需要更深一步的研究。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGFs）可調(diào)節(jié)肌原細(xì)胞的增殖和分化，而Fgf1 作為首次報(bào)道的肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子，在成肌細(xì)胞中具有有絲分裂作用。研究表明，F(xiàn)gf1 在體外和體內(nèi)都能刺激不同動(dòng)物成肌細(xì)胞的增殖和抑制分化。雙特異性蛋白磷酸酶1（DUSP1），這種磷酸酶可使絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）失活，由此推斷基因可能與HS條件下的肌肉發(fā)育相關(guān)。Zhou 等研究發(fā)現(xiàn)，MET是關(guān)節(jié)彎曲的致病基因，MET 突變可能導(dǎo)致人類骨骼肌發(fā)育不良；而在本研究HS 山羊中，基因差異表達(dá)且富集在多條與肌肉發(fā)育相關(guān)的通路上，由此推斷，基因可能參與調(diào)控肌肉發(fā)育。綜上，HS 可能通過(guò)MAPK 信號(hào)通路、磷脂酶D 信號(hào)通路、mTOR 信號(hào)通路、黏著斑等信號(hào)通路共同發(fā)揮作用，調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡和相關(guān)基因的差異表達(dá)，最終影響肌肉發(fā)育過(guò)程。

4 結(jié) 論

本研究對(duì)努比亞山羊肌肉組織HS 組和C 組進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，共檢測(cè)到20 587 個(gè)基因，95 個(gè)差異表達(dá)基因（34 個(gè)顯著上調(diào)，61 個(gè)顯著下調(diào)）。通過(guò)檢測(cè)差異表達(dá)基因及相關(guān)信號(hào)通路，篩選出和等5 個(gè)可能調(diào)控肌肉發(fā)育的潛在基因，并主要富集在細(xì)胞黏附分子、MAPK 信號(hào)通路、磷脂酶D 信號(hào)通路和黏著斑等信號(hào)通路。本研究結(jié)果為豐富努比亞山羊肌肉組織轉(zhuǎn)錄組信息提供數(shù)據(jù)，為耐熱性山羊的育種提供理論基礎(chǔ)。