王展強 楊華文 黃基偉 李亞紅 曹東林 雷達

廣東省第二人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)部（廣州 510317）

α 地中海貧血（α 地貧）是由于α 珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致的遺傳性溶血性貧血［1］。隨著α 珠蛋白基因缺陷數(shù)量的增加，相應(yīng)臨床癥狀逐漸加重［2-3］，其中中間型和重型地貧患者只能依賴輸血維持生命［4-5］。血紅蛋白A2（hemoglobin A2，HbA2）是產(chǎn)前診斷中α 地貧篩查的重要指標之一［6-8］，結(jié)合血常規(guī)可初步判斷患者是否攜帶地貧基因［9］，并能節(jié)約社會醫(yī)療資源［10］。近年來高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）和毛細管區(qū)帶電泳（capillary zone electrophoresis，CZE）廣泛應(yīng)用于HbA2 的檢測［11-12］，多項研究比較了HPLC 和CZE 對HbA2 的檢測性能［13-15］，但尚無研究比較這兩種方法檢測HbA2 對α 地貧的診斷性能及其截斷值，本研究擬收集2019-2021年期間到本單位進行α 地貧篩查患者的臨床信息，比較CZE（法國賽比亞公司的Sebia 全自動電泳儀）和HPLC（美國伯樂公司的血紅蛋白分析系統(tǒng)）兩種方法測定的HbA2 對輕型α 地貧的診斷性能及截斷值，為產(chǎn)前診斷中α 地貧篩查提供診斷依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例資料選取2019年1月至2021年12月在廣東省第二人民醫(yī)院進行α 地貧篩查的患者納入研究，收集患者臨床信息包括血常規(guī)、HbA2 和α 地貧基因結(jié)果等，根據(jù)α 地貧基因結(jié)果分為對照組和輕型α地貧組。

1.2 納入與排除標準輕型α 地貧組納入標準：（1）年齡在18～60 歲之間；（2）α 地貧基因結(jié)果為輕型。對照組納入標準：（1）年齡在18～60 歲之間；（2）α 地貧基因結(jié)果為陰性。排除標準：（1）攜帶β 地貧基因缺陷（突變/缺失）；（2）α 地貧基因結(jié)果為靜止型、中間型和重型；（3）合并有缺鐵性貧血或其他基礎(chǔ)性疾病如高血壓、糖尿病等。

1.3 研究方法

1.3.1 血常規(guī)檢測按照說明書使用Sysmex 全自動血球儀（型號：XN-3000，日本希思美康公司）及其配套試劑檢測全血樣本，獲取紅細胞的紅細胞平均體積（mean corpuscular volume，MCV）和紅細胞平均血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）。

1.3.2 HbA2 的檢測按照說明書使用血紅蛋白分析系統(tǒng)（型號：VariantⅡ，美國伯樂公司）和Sebia全自動電泳儀（型號：APILLARYS OCTA3，法國賽比亞公司）及其相應(yīng)配套試劑檢測全血樣本，獲取患者HbA2 的含量。

1.3.3 α地貧基因檢測按照說明書使用EZHighTMDNA Extraction Kit 提取全血樣本DNA；按照說明書使用α 地貧基因檢測試劑盒（中國亞能生物）對α 地貧基因進行分型測定，其中采用跨越斷裂點PCR 原理檢測α-地貧基因缺失位點（包括東南亞缺失型（--SEA/αα）、3.7缺失型（-α3.7/αα）、4.2缺失型（-α4.2/αα）），采用PCR-反向點雜交原理檢測α-地貧基因突變位點（包括Hb CS（CD142），TAA→CAA；Hb WS（CD122），CAC→CAG 和Hb QS（CD125），CTG→CCG）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS 19.0 進行統(tǒng)計分析。參數(shù)資料采用均數(shù)加減標準差進行描述并使用獨立樣本t檢驗進行統(tǒng)計分析。采用ROC 曲線分析HbA2 對輕型α 地貧的診斷性能及截斷值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人群特征本研究共納入1 887 例受檢者，其中共有1 176 例受檢者使用HPLC 檢測HbA2（含218例輕型α地貧患者，占18.54%，表1）；另有711 例受檢者使用CZE 檢測HbA2（含169 例輕型α 地貧患者，占23.77%，表1）。在使用HPLC 檢測HbA2的218 例輕型α 地貧患者中，共有214 例診斷為東南亞缺失型，其他雙重雜合突變的輕型α 地貧有4 例；而使用CZE 檢測HbA2 的169 例輕型α 地貧患者中，共有165 例診斷為東南亞缺失型，其他雙重雜合突變有3 例。

收集上述受檢者的臨床信息并分析，結(jié)果顯示與對照組相比，輕型α 地貧組的MCV、MCH 和HbA2 在HPLC 和CZE 檢測的人群中均降低（表1），這提示輕型α 地貧患者呈小細胞低色素性貧血，同時α 地貧基因的缺陷也導(dǎo)致HbA2 含量下降。2.2 CZE 的特異度和靈敏度均優(yōu)于HPLC根據(jù)α 地貧基因結(jié)果，計算不同HbA2 截斷值診斷輕型α 地貧的靈敏度和特異度，根據(jù)尤登指數(shù)選擇最佳的截斷值。結(jié)果顯示使用HPLC 檢測HbA2 時，當HbA2 為2.8%時，尤登指數(shù)最大，為0.383，對應(yīng)的靈敏度和特異度分別為82.6%和55.7%（表2）；使用CZE 檢測HbA2 時，當HbA2 為2.6%時，尤登指數(shù)最大，為0.485，對應(yīng)的靈敏度和特異度分別為91.1%和57.4%（表2），這提示當HbA2 分別取上述截斷值時，CZE 診斷輕型α 地貧的特異度和靈敏度均優(yōu)于HPLC。

表1 人群特征Tab.1 Characteristics of the study population ±s

表1 人群特征Tab.1 Characteristics of the study population ±s

HPLC CZE對照組（n=958）輕型α 地貧組（n=218）t 值P 值對照組（n=542）輕型α 地貧組（n=169）t 值P 值年齡（歲）29.68±5.13 29.00±4.68 1.80 0.070 29.61±4.84 30.18±5.27-1.30 0.200 HbA2（%）2.78±0.39 2.57±0.21 10.85＜0.001 2.62±0.46 2.34±0.31 9.10＜0.001 MCV（fl）85.00±6.46 67.87±3.39 55.22＜0.001 85.89±7.53 68.99±3.79 38.78＜0.001 MCH（pg）29.03±2.81 21.58±1.22 60.53＜0.001 28.98±3.38 21.75±1.30 41.02＜0.001

表2 HbA2 在輕型α 地貧診斷中的截斷值Tab.2 The cut-off point of HbA2 in the diagnosis of α-thalassemia trait

2.3 CZE的診斷性能優(yōu)于HPLC根據(jù)不同HbA2截斷值對應(yīng)的特異度和靈敏度，分別繪制HPLC 和CZE 的ROC 曲線，結(jié)果顯示使用HPLC 檢測HbA2時，HbA2 診斷輕型α 地貧ROC 曲線AUC 為0.715（95%CI：0.682～0.747，P＜0.001，圖1A）；而使用CZE 檢測HbA2 時，AUC 為0.786（95%CI：0.751～0.821，P＜0.001，圖1B），這提示CZE 的診斷性能優(yōu)于HPLC。

圖1 受試者工作曲線Fig.1 Receiver operating characteristic curve

3 討論

α 地貧好發(fā)于東南亞、地中海、南亞、中東和非洲等熱帶和亞熱帶地區(qū)［16-17］。在我國廣東、廣西地區(qū)α地貧攜帶率最高，分別為9.46%和14.13%［18］，此外，香港、臺灣、福建、江西、云南和貴州等地區(qū)的α 地貧發(fā)病情況也較為嚴峻［19］。在產(chǎn)前診斷中開展地貧篩查可降低地貧患兒的出生率，是阻止中間型和重型地貧患兒出生的有效措施，有利于提高人口質(zhì)量［20-21］。本文通過收集2019-2021年期間本單位地貧篩查患者的臨床信息，首次通過回顧性研究比較了這兩種方法檢測HbA2 對輕型α 地貧的診斷性能和截斷值。本研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，輕型α 地貧患者的MCV、MCH 和HbA2 含量降低，HPLC 和CZE 兩種方法檢測HbA2 對輕型α 地貧均有較好的診斷性能，其截斷值分別為2.8%和2.6%，同時本研究首次發(fā)現(xiàn)使用CZE 檢測HbA2 時，對輕型α 地貧的診斷性能優(yōu)于HPLC。

由于珠蛋白基因缺陷，珠蛋白合成障礙，α 地貧患者的紅細胞相關(guān)參數(shù)異常，本研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，輕型α 地貧組的MCV、MCH 和HbA2 均降低，這與前人的研究結(jié)果相一致［6，22-23］。然而有研究指出缺鐵性貧血患者的MCV、MCH 與地貧患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義［24］，因此使用上述指標進行地貧篩查時應(yīng)與缺鐵性貧血相鑒別。同時本研究發(fā)現(xiàn)使用HbA2 診斷輕型α 地貧時，CZE 的截斷值為2.6%，這與多項研究較為接近［6-7］；而HPLC 的截斷值為2.8%，遠遠低于前人的研究［25］，這可能是由于在該研究中沒有區(qū)分靜止型α 地貧和輕型α 地貧的緣故。此外，在本研究中CZE 的截斷值低于HPLC（2.6%vs.2.8%），這可能是由于其他血紅蛋白變異體對CZE 的影響小于HPLC 如HbE 等［26］，當使用HPLC 無法區(qū)分HbA2 與其他血紅蛋白變異體時，CZE 則能夠更好地區(qū)分，使得CZE 測得的HbA2 更接近真實值［15］。

本研究依然存在以下不足，首先，本研究納入的研究人群較大，無法同時使用兩種方法檢測同一患者的HbA2，無法比較兩種方法檢測結(jié)果的一致性；其次，本研究僅限于18～60 歲人群中輕型α地貧患者，未對其他年齡段和亞型進行研究分析；最后，本研究屬于回顧性研究，僅能收集到目前存在的數(shù)據(jù)，無法全面反映輕型α 地貧患者的狀態(tài)。因此，為了解決上述問題，還需要進行更深入的前瞻性臨床研究。此外，本研究發(fā)現(xiàn)CZE 的診斷性能優(yōu)于HPLC，如何將CZE 測得的HbA2 與血常規(guī)結(jié)合以建立一套低成本、低漏診率和高特異度的地貧篩查流程并向臨床推廣應(yīng)用還需要進一步研究。