張露露，劉興菊，馬源，余曉媛，吳彤，馬暉玲

（1. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室，甘肅省草業(yè)工程實驗室，中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070；2. 青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海 西寧 810016）

草坪是城市生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，草坪可降低噪音強度、凈化空氣、調(diào)節(jié)溫度、平衡生態(tài)環(huán)境，為城市居民提供潔凈、舒適的生活環(huán)境。草地早熟禾（Poa praterrsis）具有適應(yīng)性強、綠期長、耐踐踏等優(yōu)點，是草坪建植的主要草種之一，也是全世界種植最為廣泛的冷季型草坪草［1］。草地早熟禾在春秋季生長旺盛，夏季生長緩慢，且不耐高溫，易感病害［2］。草坪病害的發(fā)生會大大降低草坪草的經(jīng)濟價值和觀賞性能。

褐斑病（Brown spot）又稱為絲核菌褐斑病，是危害程度最為嚴重的草坪草病害之一［3］，具有發(fā)病率高，傳染范圍廣等特點。立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）是草坪草褐斑病最主要的病原菌，屬于土傳真菌，該病原菌常以菌絲或菌核的形態(tài)存在于土壤或寄主殘體上［4］。立枯絲核菌主要通過產(chǎn)生侵染墊、菌絲圈等侵染結(jié)構(gòu)直接穿透植物葉片、葉鞘和莖稈表皮［5］，吸取寄主養(yǎng)分，破壞原有組織細胞結(jié)構(gòu)，引起葉腐、鞘腐和莖基腐，出現(xiàn)橢圓形或不規(guī)則形黃褐色葉斑［2］，最終導(dǎo)致植物褪綠黃化、萎蔫，甚至死亡。

在草坪防治過程中使用大量的化學(xué)藥劑不僅降低植物本身抵抗病害的能力，還造成嚴重的土地污染、水污染和空氣污染。因此，草坪病害的研究對于生態(tài)環(huán)境可持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。目前國內(nèi)對于草地早熟禾的研究，主要集中在鹽脅迫［6］、溫度脅迫［7］、干旱脅迫［8］及重金屬脅迫［9］等非生物因素引起的生理生化變化方面。而對于草地早熟禾感染褐斑病的相關(guān)研究鮮見報道較少。本試驗以國內(nèi)草坪建植中常用的7 個草地早熟禾品種作為材料，通過研究不同草地早熟禾品種在褐斑病病原菌短時期脅迫下的基礎(chǔ)生理響應(yīng)，綜合評價不同材料的抗病性，以期為后期草坪草的抗性誘導(dǎo)研究奠定理論基礎(chǔ)，同時為草坪草病害防治工作及草坪建植時良種選擇提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

7 個草地早熟禾品種：巴潤（Baron）、公園（Park）、納蘇（Nassau）、藍寶石三代（Sapphire 3rd generation）、福臨門（Fulinmen）、優(yōu)美（Over glade）和橄欖球2 號（Rugby 2），均購自北京克勞沃草業(yè)技術(shù)開發(fā)中心。褐斑病病原菌：立枯絲核菌購自中國科學(xué)院菌種保存中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 植物材料制備和處理 種子清洗：將供試種子棄去雜質(zhì)和有蟲蝕及成熟度較低的種子，用無菌水侵泡5 h，乙醇（70%）浸泡1 min，次氯酸鈉（20%）浸泡15~20 min，用蒸餾水沖洗6~7 次，至刺鼻酸味消失為止，將其放置于室內(nèi)，自然陰干。

幼苗種植：將土壤、細沙、蛭石混合（體積比1∶1∶1）在180 ℃烘箱中滅菌3 h，以充分殺菌。冷卻后裝入直徑為10 cm，高度為8 cm 的育苗缽中，充分浸水。將不同草地早熟禾種子均勻撒播在育苗缽中，表面覆沙，放置于恒溫培養(yǎng)室。培養(yǎng)條件為光照16 h/d、23 ℃，黑暗8 h/d、20 ℃。

1.2.2 草地早熟禾褐斑病接菌方法及嚴重度分級PDA 培養(yǎng)基上接入立枯絲核菌，用石蠟封口膜封口。將其倒置于光照14 h/d、25 ℃，黑暗10 h/d、20 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)7 d。

接菌物制備：參考Cortes?Barco 等［10］的接菌物制備方法并改進。用無菌水完全浸泡500 g 麥粒，隔夜，晾干水分后放置于240 mL 組培瓶中，約占瓶體積1/2，加蓋封口膜，連續(xù)滅菌3 次，冷卻后用打孔器打取立枯絲核菌PDA 生長物，接入麥粒組培瓶中，混勻后于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14 d。每天搖晃使麥粒充分被病原菌侵染，待麥粒充分長滿菌絲后，顏色呈現(xiàn)深褐色時，將其倒入托盤中在通風(fēng)處陰干，完全干硬后粉碎成粉末狀，放置在4 ℃冰箱備用。

幼苗接菌：幼苗生長30 d 后，對其接種立枯絲核菌，每個育苗缽中施入0.3 g 接菌物。接菌時，先對幼苗噴水霧，使植物葉片濕潤，然后向葉片均勻撒播病原菌粉末，保溫罩遮蓋，放置于恒溫培養(yǎng)室。參考陳海波［11］對草坪草褐斑病的研究方法，在接菌后第3、9、15 天，觀察并統(tǒng)計病情。草地早熟禾褐斑病嚴重度分級標準如表1。

表1 草地早熟禾褐斑病嚴重度的分級標準Table 1 Classification criteria for severity of brown spot ofPoa pratensis

發(fā)病率（%）=發(fā)病葉數(shù)/調(diào)查葉片總數(shù)×100%

病情指數(shù)=100×∑（各級病葉數(shù)×各級代表值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級代表值）。

1.2.3 指標測定 接菌后第0，3，9，15 天分別采樣，每個樣0.2 g，每個指標3 個重復(fù)。用錫箔紙裝袋，封口，經(jīng)液氮冷凍后放置在-80 ℃下冷藏備用。用于測定生理生化指標。

生理指標測定：葉綠素（Chlorophyll，Chl）含量采用乙醇浸提法；相對電導(dǎo)率（Relative electrical conduc?tivity，REC）采用電導(dǎo)儀測定；丙二醛（Malondialde?hyde，MDA）含量采用硫代巴比妥酸法測定［12］；可溶性糖（Soluble sugar，SS）含量采用蒽酮比色法測定［12］；可溶性蛋白（Soluble protein，SP）含量采用考馬斯亮藍染色法測定［12］；游離脯氨酸（Proline，Pro）含量采用茚三酮 顯 色 法 測 定［12］；過 氧 化 氫（Hydrogen peroxide，H2O2）含量采用碘化鉀分光光度法測定［12］；超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性采用氮藍四唑法測定［12］；過氧化物酶（Peroxidase，POD）活性采用愈創(chuàng)木酚法測定［12］；過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性、抗壞血酸過氧化物酶（Ascorbate peroxidase，APX）活性和谷胱甘肽還原酶活性（Glutathione reductase，GR）均采用紫外分光光度法測定［12］。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 19.0 系統(tǒng)軟件分析數(shù)據(jù)，采用單因素Anova 對多組樣本進行分析處理，Duncan’s 新復(fù)極差法進行顯著性方差分析；采用Mi?crosoft Excel 2010 繪制圖表。

運用隸屬函數(shù)平均值（D值）法［13］，對各指標進行標準化處理。

式中，Xj為指標測定值；Xmin和Xmax分別為所有參試材料某一指標的最小值和最大值；若指標與抗病性呈正相關(guān)用公式（1），指標與抗病性呈負相關(guān)用公式（2）。

采用加權(quán)單因子法將各指標疊加，獲得每個品種抗病性的綜合評價D值：D=1/n∑=R（Xi）

抗性評定等級［14］：0.70≤D≤1.00，高抗（High re?sistance，HR）；0.50≤D<0.70，中 抗（Medium resis?tance，MR）；0.30≤D<0.50，感?。⊿usceptible，S）；0.1≤D<0.3，中 感（Medium susceptible，MS）；D<0.10，高感（Highsusceptible，HS）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同草地早熟禾品種接種立枯絲核菌后的病情統(tǒng)計

隨病原菌脅迫天數(shù)的延長，7 個草地早熟禾品種的發(fā)病率和病情指數(shù)都在逐漸增大，且差異顯著（P<0.05）（表2）。脅迫3 d 時，植株上部葉片或邊緣出現(xiàn)白色斑點。納蘇的發(fā)病率和病情指數(shù)最大，分別是17.52%和8.51，之后依次是公園、橄欖球2 號、巴潤和優(yōu)美，其發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著高于藍寶石三代和福臨門（P<0.05）。脅迫15 d 時，植株葉片上形成黃褐色病斑。公園、納蘇的發(fā)病率和病情指數(shù)分別達到69.36%、為48.14 和73.27%、52.65，顯著高于其他5 個品種（P<0.05）。巴潤、橄欖球2 號和優(yōu)美的發(fā)病率和病情指數(shù)均在45%~65% 和25~45，藍寶石三代、福臨門的發(fā)病率和病情指數(shù)最低，抗病能力最強。

表2 病原菌脅迫下7 個草地早熟禾品種的病情統(tǒng)計Table 2 Disease statistics of sevenPoa pratensismaterials under pathogen stress

2.2 不同草地早熟禾品種接種立枯絲核菌后的生理特性變化

2.2.1 病原菌脅迫下草地早熟禾葉綠素含量的變化 脅迫3 d 時，藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的Chl 含量無明顯變化（P>0.05），而巴潤、公園、納蘇和橄欖球2 號的Chl 含量均有下降，其中公園的Chl 含量降幅18.7%，差異顯著（P<0.05）。之后隨病原菌脅迫時間延長，7 個品種的Chl 含量整體呈現(xiàn)逐級遞減趨勢。脅迫15 d 時，藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的Chl 含量降幅較小，依次為27.2%、30.7%、31.9%，具有顯著差異（P<0.05），其 葉 片Chl 含 量 均 高 于 其 他4 個 品種（圖1）。

圖1 病原菌脅迫下草地早熟禾葉綠素含量Fig.1 Chlorophyll content ofPoa pratensisunder pathogen stress

2.2.2 病原菌脅迫下草地早熟禾相對電導(dǎo)率和丙二醛含量的變化 7 個草地早熟禾品種體內(nèi)的REC 和MDA 含量隨病菌脅迫時間的延長均呈逐漸升高的趨勢（圖2）。當(dāng)病原菌脅迫9 d 時，巴潤、藍寶石三代、福臨門、橄欖球2 號和優(yōu)美的REC 達到最大，與CK 相比差異顯著（P<0.05）。其中藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的細胞膜結(jié)構(gòu)自身恢復(fù)能力較強，故它們的REC 值在脅迫后期有所降低。而在脅迫15 d 時，公園和納蘇的REC 依然持續(xù)上升，電解質(zhì)外滲嚴重，與CK 相比上升幅度分別達到40.1%和42.9%，差異顯著（P<0.05）（圖2?A）。

圖2 病原菌脅迫下草地早熟禾相對電導(dǎo)率和丙二醛含量Fig.2 REC and MDA content ofPoa pratensisunder pathogen stress

2.2.3 病原菌脅迫下草地早熟禾滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的變化 藍寶石三代和福臨門品種在未受到外界環(huán)境脅迫時，葉片中含有的Pro 含量較高，自我調(diào)節(jié)能力強。在脅迫期間雖Pro 含量上升，但和CK 差異不顯著（P>0.05）。在脅迫15 d 時，橄欖球2 號和優(yōu)美的Pro 含量持續(xù)上升，增幅分別為32.1%和40.8%，和CK 差異顯著（P<0.05）。巴潤的Pro 含量在脅迫期間變化幅度小，后期下降與CK 差異顯著（P<0.05）。納蘇的Pro 含量幾乎無變化。公園的Pro 含量在脅迫3 d 時突增，增幅為67.3%，和CK 差異顯著（P<0.05），9 d 保持穩(wěn)定，15 d 時突降，與CK 含量一致，該品種的抗性極不穩(wěn)定（圖3?A）。

7 個草地早熟禾品種的SS 含量隨病原菌脅迫天數(shù)的增加而增加，并在脅迫后期呈現(xiàn)快速積累（圖3?B）。在脅迫3 d 時，納蘇和福臨門的SS 含量與CK 相比差異顯著（P<0.05），其他5 個品種的SS 含量變化不明顯。在脅迫9 d 時，巴潤、公園和福臨門的SS 含量在升高后保持相對穩(wěn)定，與CK 相比具有顯著差異（P<0.05）。其中，福臨門的SS 增幅最大，公園的SS增幅最小，分別為83.1%和49.7%。而其他4 個品種的SS 含量均呈梯度式增加，并在脅迫15 d 時，其葉片中SS 含量達到最高，與CK 差異顯著（P<0.05）。

7 個草地早熟禾品種的SP 含量隨著病原菌脅迫天數(shù)的增加，最終都呈現(xiàn)下降趨勢（圖3?C）。其中藍寶石三代和福臨門品種本身含有的SP 高于其他5 個品種。在脅迫期間，公園、納蘇、福臨門和橄欖球2 號的葉片中SP 含量逐級下降。而其他3 個品種的SP 含量在脅迫3 d 時均有小幅上升，其中巴潤和優(yōu)美的SP含量與CK 相比增加8.8%和10.9%，差異顯著（P<0.05），之后逐漸下降。納蘇的SP 含量降幅最大，達到41.1%，和CK 差異顯著（P<0.05）。

圖3 病原菌病原菌脅迫下草地早熟禾游離脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量Fig.3 Pro、SSand SP content ofPoa pratensisunder pathogen stress

2.2.4 病原菌脅迫下草地早熟禾H2O2含量的變化7 個草地早熟禾品種葉片中的H2O2含量隨著病原菌脅迫天數(shù)的增加呈逐漸上升趨勢（圖4）。在脅迫初期，除公園外，其他6 個品種體內(nèi)的H2O2含量增加不明顯（P>0.05），7 個品種在后期H2O2含量都快速積累。在脅迫9 d 時，藍寶石三代、福臨門、橄欖球2 號和優(yōu)美的葉片中積累的H2O2含量，與CK 相比差異顯著（P<0.05），并在脅迫15 d 依然保持穩(wěn)定。而巴潤、公園和納蘇的H2O2含量在脅迫中后期大量積累，并呈現(xiàn)階梯式增加，脅迫15 d 時增幅分別達到78.4%、81.3%和65.5%，與CK 差異顯著（P<0.05）。

圖4 病原菌脅迫下草地早熟禾過氧化氫含量Fig.4 H2O2content ofPoa pratensisunder pathogen stress

2.2.5 病原菌脅迫下草地早熟禾抗氧化酶活性的變化 在病害較輕時，除優(yōu)美外，其他6 個草地早熟禾品種的SOD 活性變化不顯著（P>0.05），后期穩(wěn)定上升。（圖5?A）在脅迫9 d 時，藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的SOD 活性與CK 相比增幅依次為49.5%、38.4%和37.4%，差異顯著（P<0.05），之后保持穩(wěn)定。在脅迫15 d 時，巴潤、納蘇和橄欖球2 號的SOD 活性達到最大，增幅依次為47.9%、44.6%和42.0%，差異顯著（P<0.05）。而公園的SOD 活性在脅迫期間變化不明顯（P>0.05）。

7 個草地早熟禾品種的POD 活性隨病原菌脅迫天數(shù)的增加均呈現(xiàn)不同程度的上升（圖5?B）。當(dāng)沒有病原威脅時，藍寶石三代和福臨門葉片中含有的POD活性遠高于其他5個品種，差異顯著（P<0.05）。當(dāng)病原菌脅迫9 d時，藍寶石三代、福臨門、橄欖球2號和優(yōu)美的POD 活性上升到最大值，與CK 相比差異顯著（P<0.05），之后保持穩(wěn)定。而在脅迫15 d時，公園的POD 活性依然上升，增幅為25.0%，差異顯著（P<0.05）。巴潤和納蘇的POD活性在脅迫期間變化不明顯。

7 個草地早熟禾品種的CAT 活性隨病原菌脅迫天數(shù)的增加而下降（圖5?C）。在脅迫3 d 時，藍寶石三代和福臨門的CAT 活性小幅上升。而公園、納蘇和橄欖球2 號的CAT 活性下降明顯，降幅分別為19.1%、16.5% 和14.0%，與CK 差 異 顯 著（P<0.05）。在脅迫9 d 時，除納蘇外，其他6 個品種的CAT 活性均下降到穩(wěn)定值，后期無明顯變化。而納蘇CAT 活性在脅迫15 d 時下降到最低，降幅為35.8%，與CK 差異顯著（P<0.05）。

圖5 病原菌脅迫下草地早熟禾SOD、POD 和CAT 活性Fig.5 SOD、POD and CA activities ofPoa pratensisunder pathogen stress

2.2.6 病原菌脅迫下草地早熟禾APX 和GR 活性的變化 7 個草地早熟禾品種的APX 活性隨著脅迫天數(shù)的延長呈先快速升高再下降的變化趨勢（6?A）。其中巴潤、藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的葉片在受到原菌侵染3 d 時，細胞中APX 活性增到最高，增幅依次為47.7%、37.7%、37.7%和39.2%，與CK 相比差異顯著（P<0.05）。之后活性下降，保持穩(wěn)定，并高于CK。而公園、納蘇和橄欖球2 號的葉片受侵染嚴重，其APX 活性在脅迫9 d 時依然保持上升，與CK 之間差異顯著（P<0.05），并在脅迫15 d 時APX 活性才有所下降。

第二是日用品的改變導(dǎo)致的謎語費解。從前的一些日用品已經(jīng)或者行將淘汰，以之為謎底的謎語就令年輕人費解，自然面臨著被淘汰的命運。如例11的謎底“火鉗”，例12的謎底“草鞋”，現(xiàn)在在城鎮(zhèn)甚至在一些鄉(xiāng)村都已經(jīng)很難覓其蹤跡了，其謎語的費解是顯而易見的：

在病原菌脅迫3 d 時，7 個草地早熟禾品種的GR活性都快速增加，與CK 相比差異顯著（P<0.05）（圖6?B）。之后隨著脅迫天數(shù)的延長，巴潤、公園和納蘇GR 活性又快速降低，并保持穩(wěn)定，與CK 之間無顯著差異。而藍寶石三代、福臨門、橄欖球2 號和優(yōu)美的GR 活性下降緩慢。其中福臨門的GR 活性保持最穩(wěn)定，能高效清除體內(nèi)積累的H2O2。

圖6 病原菌脅迫下草地早熟禾的APX 和GR 活性Fig.6 APX and GR activities ofPoa pratensis underpathogen stress

2.3 抗病性綜合評價

通過隸屬函數(shù)法對7 個草地早熟禾品種在15 d 內(nèi)的各抗性生理指標平均值進行綜合評價（表3）。D值為0.23~0.69。藍寶石三代、福臨門和優(yōu)美的D值為0.50~0.70，屬于中抗品種，其中藍寶石三代的D值為0.69，綜合抗病能力最強。巴潤、公園和橄欖球2 號的D值為0.30~0.50，為感病品種。納蘇的D值為0.23，為中感品種。因此，7 個草地早熟禾品種對褐斑病的抗性強弱依次為：藍寶石三代>福臨門>優(yōu)美>橄欖球2 號>巴潤>公園>納蘇。

表3 病原菌脅迫下7 個草地早熟禾品種的抗病性綜合評價（D值）Table 3 Comprehensive evaluation of disease resistance（D value）of sevenPoa pratensis materials under pathogen stress

3 討論

3.1 7 個草地早熟禾品種接種立枯絲核菌后的病情

本試驗對7 個草地早熟禾品種接種立枯絲核菌后的發(fā)病率和病情指數(shù)統(tǒng)計結(jié)果表明，在不同時間下，抗病品種和感病品種的發(fā)病率和病情指數(shù)都在逐漸增加，且差異顯著。在同一時間下，抗病品種和感病品種的發(fā)病率和病情指數(shù)差異顯著。7 個草地早熟禾品種在脅迫期間的病情指數(shù)大小依次為：納蘇>公園>巴潤>橄欖球2 號>優(yōu)美>福臨門>藍寶石三代。有研究表明藍寶石品系的幼苗色澤深綠，根系發(fā)達，具有極強的抗寒、抗旱和抗病能力，可作為草皮卷生產(chǎn)的專用品種［15］。王躍棟等［14］對北京地區(qū)生長的不同草地早熟禾品種感染褐斑病的病情進行比較，結(jié)果表明公園和橄欖球2 號的發(fā)病率低，屬于抗病品種。同一品種出現(xiàn)差異的原因可能是不同地區(qū)，不同時期及不同的培養(yǎng)方式的差異造成的。

3.2 不同草地早熟禾品種接種立枯絲核菌后的生理特性變化

葉綠素為植物進行光合作用合成化合物提供基礎(chǔ)保障。病原菌入侵植物細胞內(nèi)，與葉綠體相互作用，使葉綠素合成受阻。徐秉良等［16］在研究南瓜與白粉病的相互作用中指出，葉片內(nèi)葉綠素含量高低與植株抗性強弱呈正相關(guān)性。Yang 等［17］通過對水稻紋枯病菌（立枯絲核菌）毒素的研究，發(fā)現(xiàn)該病菌會嚴重損傷水稻葉片組織，使葉片光合能力逐漸下降。本研究中，抗病品種的葉綠素含量在病害初期保持穩(wěn)定，有微弱升高變化。在病害后期含量下降明顯，并維持在一定水平范圍。在病原菌脅迫期間感病品種的葉綠素含量持續(xù)性下降，降幅普遍大于抗病品種，在病害后期植株葉片均出現(xiàn)不同程度的黃化，葉尖干枯等現(xiàn)象。

植物在遭受病害入侵時，細胞膜通透性增大，電解質(zhì)滲漏、膜脂過氧化是早期最顯著的生理變化。本研究中，抗病品種的REC 和MDA 含量先升后降，表明抗病品種的細胞膜自身恢復(fù)能力好，抗氧化能力強，毒害效應(yīng)低。感病品種的MDA 含量在病害后期突增，遠大于CK，REC 維持在較高水平。表明感病品種的機械防御能力弱，應(yīng)激反應(yīng)慢。張正禹等［18］的研究發(fā)現(xiàn)立枯絲核菌改變膜透性的主要機理是毒素與降解酶對植物細胞膜脂和膜蛋白的破壞。葛秀春等［19］研究水稻與稻瘟病菌的互作后發(fā)現(xiàn)，REC 和MDA 含量明顯增加，且與品種抗性呈負相關(guān)，這與本研究結(jié)果一致。

植物體內(nèi)，游離脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白作為滲透調(diào)節(jié)劑維持細胞水分平衡。研究表明細胞中脯氨酸的積累與抗?jié)B透脅迫之間有顯著的正相關(guān)［20］。本研究中，抗病品種與感病品種相比，本身含有的Pro 含量高，滲透調(diào)節(jié)能力強。感病品種巴潤和納蘇含有的Pro 含量低，在脅迫過程中該調(diào)節(jié)機制并未發(fā)揮作用，后期嚴重失調(diào)。公園的Pro 含量在初期突增，后期突降，抗病能力極不穩(wěn)定。感病品種脯氨酸滲透調(diào)節(jié)機制在病原菌大量入侵時被嚴重破壞。因此，可得出草地早熟禾本身脯氨酸含量的高低是評價其抗病能力的重要指標。

可溶性糖作為小分子溶質(zhì)，為植物提供碳能量，對細胞膜和原生質(zhì)膠體起到穩(wěn)定鞏固作用，有效抵御逆境傷害。本研究中，7 個草地早熟禾品種的SS 含量在病原菌脅迫后期快速積累用來加固細胞壁壘，抵抗菌絲的入侵和擴展，抗病品種福臨門的SS 積累量顯著高于感病品種公園?？扇苄缘鞍卓蔀橹参锛毎峁┗A(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)。李妮亞等［21］的研究表明植物在受到生物脅迫和非生物脅迫時，其體內(nèi)正常的蛋白質(zhì)合成常會受到抑制。本研究結(jié)果表明，7 個草地早熟禾品種在受到病原菌入侵后，SP 含量變化最終呈現(xiàn)下降趨勢?？共∑贩N的SP 含量下降幅度小于感病品種。這可能與ROS 濃度有關(guān)，高濃度ROS 會大批量進攻蛋白質(zhì)的疏基或氨基酸殘基，使蛋白質(zhì)的多肽鏈發(fā)生斷裂而失活，造成細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量迅速降解［22］。張笑宇［23］的研究認為馬鈴薯在感染黑痣病過程中，SS 含量與抗病無顯著相關(guān)性，SP 含量越低越抗病。這可能是立枯絲核菌侵染不同的受體后產(chǎn)生的不同抗性表現(xiàn)。

過氧化氫作為活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的一種類型，性質(zhì)活潑，存在于植物體的多個部位中。在病原物入侵時，機體產(chǎn)生的H2O2在低中等濃度條件下，可抑制真菌孢子萌發(fā)和菌絲生長，參與細胞壁木質(zhì)化，誘導(dǎo)植保素合成，引發(fā)細胞過敏性反應(yīng)等一系列防御措施［24］。若細胞中產(chǎn)生H2O2的速度大于或遠超于機體清除H2O2的速度，則會使H2O2濃度過高，產(chǎn)生氧化傷害［25］。本研究中，抗病品種在脅迫后期，H2O2含量在抗氧化酶的抑制作用下保持穩(wěn)定，體內(nèi)H2O2處于動態(tài)平衡狀態(tài)。感病品種的H2O2含量持續(xù)上升，在脅迫后期增加量較大?？赡苁歉胁∑贩N體內(nèi)產(chǎn)生的H2O2破壞了抗氧化酶的結(jié)構(gòu)，降低了酶活性，造成細胞內(nèi)H2O2過量積累。因此，在本次研究中H2O2變化可以作為草坪草病情評價的重要指標之一。

3.3 病原菌脅迫下草地早熟禾抗氧化酶類活性的變化

活性氧清除酶系統(tǒng)的存在，使得植物體內(nèi)活性氧代謝保持在低水平動態(tài)平衡之中。SOD 催化超氧陰離子自由基（O2·-）形 成H2O2，POD 和CAT 協(xié)調(diào)配合，清除過量的H2O2，減輕植物氧化傷害［26］。本研究中抗病品種在受病原菌脅迫后，SOD 活性增加速度快，穩(wěn)定性高，POD 活性增加幅度大，CAT 活性下降范圍小。感病品種的SOD 活性在病害后期明顯上升，POD 活性上升變化小，CAT 活性下降范圍大。這表明感病品種在病原菌入侵時，體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)的感應(yīng)能力弱，防御反應(yīng)發(fā)生遲緩，不能夠及時有效的清除ROS。后期ROS 濃度上升，破壞酶結(jié)構(gòu)，降低酶含量水平。李捷等［27］的研究表明對枸杞接種尖孢鐮孢菌后，野生品種的SOD 和POD 活性增加量高于栽培品種，CAT 活性持續(xù)時間長，并認為酶活性的增加是枸杞抗鐮孢菌根腐病能力的重要指標。這與本研究結(jié)果一致。

細胞內(nèi)過量的H2O2也可通過抗壞血酸-脫氫抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)系統(tǒng)清除，其中APX 和GR 是主要組成酶［28］。當(dāng)植物受到外界逆境脅迫時，APX 可將過量的H2O2脫氫還原為水分子，與CAT 相比APX清除更快速、更精確。GR 是一種黃素蛋白氧化還原酶，在脅迫條件下對清除H2O2起關(guān)鍵作用［29］。本研究中7 個草地早熟禾品種在接種立枯絲核菌后，APX 和GR 活性都表現(xiàn)為快速增加?？共∑贩N的APX 增加速度快，有效減少H2O2積累，后期下降維持穩(wěn)定。GR 活性在病害脅迫后期維持在高水平，在清除ROS 傷害中起到重要作用。感病品種的APX 活性維持在相對較高水平，持續(xù)性清除不斷升高的H2O2。GR 活性在病害后期與CK 相比變化不明顯，其中，公園和納蘇的GR 活性低于CK。這表明H2O2積累已嚴重破壞細胞結(jié)構(gòu)，使酶液中GR 活性降低。本研究結(jié)果表明抗病品種的酶系統(tǒng)在清除ROS 方面明顯強于感病品種。

4 結(jié)論

7 個草地早熟禾品種對立枯絲核菌抗病性強弱依次為：藍寶石三代>福臨門>優(yōu)美>橄欖球2 號>巴潤>公園>納蘇。在病原菌脅迫期間，抗病品種的葉片細胞膜質(zhì)過氧化程度低，滲透調(diào)節(jié)能力強，病原抑制效應(yīng)要明顯好于感病品種。同時植物細胞中滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的積累量以及抗氧化酶系統(tǒng)的應(yīng)激清除力，是評價植物抗病性強弱的關(guān)鍵，其共同作用調(diào)控著細胞結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性。