張俊珍， 李亞莉， 張 蒙， 常強(qiáng)強(qiáng)， 陳亞萍， 黃昀巍

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，山西 太谷 030801)

貴妃雞是一種肉蛋兼用型家禽，主要分布于法國(guó)、英國(guó)和荷蘭等歐洲國(guó)家。近年來(lái)，貴妃雞作為我國(guó)一種新的肉雞品種，它具有胸肌發(fā)達(dá)、體型嬌小、結(jié)構(gòu)緊湊、骨骼細(xì)而堅(jiān)硬、皮薄和皮下脂肪少等特點(diǎn)[1]。肌內(nèi)脂肪沉積(intramuscular fat, IMF)量會(huì)影響肌肉的品質(zhì)及風(fēng)味[2]。雞IMF依賴于脂類合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、攝取和代謝的平衡，涉及到許多基因的表達(dá)和信號(hào)通路。IMF作為提高肉品質(zhì)的重要因素，其調(diào)控機(jī)制是近年來(lái)肉雞領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[3]。

共軛亞油酸(conjugated linoleic acids, CLA)是亞油酸的同分異構(gòu)體，是一種多不飽和脂肪酸。研究最多的2種CLA異構(gòu)體是c9, t11-CLA和t10, c12-CLA[4]。據(jù)研究表明，CLA具有廣泛的生物學(xué)功能，例如CLA具有改善糖尿病、增強(qiáng)免疫力、抗癌、減少機(jī)體脂肪沉積和增加肌內(nèi)脂肪，從而提高肉品質(zhì)，改善肉的風(fēng)味等作用[5～6]。Zhong等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在肥育豬的基礎(chǔ)日糧中添加12.5和25 g CLA/kg可增加肌肉內(nèi)脂肪含量，顯著影響與能量代謝、脂肪酸氧化與合成和氨基酸代謝等相關(guān)的蛋白質(zhì)含量。Wang等[8]在豬基礎(chǔ)日糧中添加1.5% CLA，通過(guò)轉(zhuǎn)錄物組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，283個(gè)已知的miRNAs，14個(gè)差異表達(dá)的miRNAs參與了Wnt信號(hào)通路，PPARγ、C/EBPα、FAS和FATP1在皮下和腹部脂肪組織中表達(dá)顯著下調(diào)。張廣民[9]研究發(fā)現(xiàn)，在AA肉雞日糧中添加t-10,c-12 CLA可降低腹脂率，增加IMF的含量可能與血清瘦蛋白(leptin)濃度、脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)、心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)mRNA表達(dá)以及肌肉和腹脂中蘋果酸脫氫酶(MDH)活性不同有關(guān)。Ramiah等[10]采用熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)日糧中添加5% CLA可以降低肉雞腹脂中的PPAR和脂肪細(xì)胞蛋白(ap2)基因的表達(dá)，導(dǎo)致脂肪細(xì)胞變小。Wang等[4]采用熒光定量發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)日糧中添加CLA可能通過(guò)上調(diào)肝中HMGR和CYP7A1表達(dá)，減少蛋雞肝和雞蛋中脂肪和膽固醇等脂質(zhì)的積累。Fu等[11]在種雞的飼料中添加CLA發(fā)現(xiàn)，CLA可以降低子代雛雞的脂肪酸生物合成相關(guān)基因(FAS、ACC和甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c)的mRNA表達(dá)，同時(shí)能誘導(dǎo)與β-氧化相關(guān)基因(CPT1、AMP活化蛋白質(zhì)激酶)的表達(dá)。

目前，研究者采用轉(zhuǎn)錄物組技術(shù)研究CLA對(duì)家禽肌內(nèi)脂肪代謝相關(guān)的報(bào)道較少，對(duì)貴妃雞肌內(nèi)脂肪代謝的研究未有報(bào)道。本研究以貴妃雞為研究對(duì)象，在基礎(chǔ)日糧中添加CLA，篩選對(duì)脂肪代謝相關(guān)差異表達(dá)基因，揭示CLA調(diào)控肌內(nèi)脂肪代謝的分子機(jī)制，為CLA對(duì)家禽脂肪代謝的影響提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與樣本采集

本試驗(yàn)選取山西省養(yǎng)殖技術(shù)試驗(yàn)基地108只55日齡體重接近且健康的貴妃雞公雞為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只，在基礎(chǔ)日糧中添加CLA(購(gòu)買于青島澳海生物有限公司濰坊分公司，純度為80.6%)0%、1%和2%，對(duì)照組添加2%豆油。試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中以等量的CLA替換豆油，預(yù)飼期1周，正飼期6周。飼養(yǎng)結(jié)束，每組隨機(jī)選取6只，采用頸靜脈放血法處死。屠宰前禁食12 h，采集胸肌組織，立即放入液氮中備用。

1.2 RNA的提取與cDNA文庫(kù)構(gòu)建和測(cè)序

嚴(yán)格按照Trizol試劑盒(南京建成生物公司)說(shuō)明書，對(duì)貴妃雞胸肌組織樣本進(jìn)行RNA提取。采用Agilent 2 100生物分析儀，檢測(cè)RNA樣品的純度、濃度和完整性，以保障使用合格的樣品進(jìn)行轉(zhuǎn)錄物組測(cè)序。再進(jìn)行cDNA文庫(kù)的構(gòu)建。文庫(kù)構(gòu)建完成，使用PCR方法對(duì)cDNA文庫(kù)的有效濃度(文庫(kù)有效濃度>2 nmol/L)進(jìn)行準(zhǔn)確定量，以保證文庫(kù)質(zhì)量。由北京百邁客生物科技有限公司提供測(cè)序服務(wù)，使用 Illumina NovaSeq 6000 進(jìn)行文庫(kù)的測(cè)序。

1.3 測(cè)序數(shù)據(jù)處理

將得到的原始數(shù)據(jù)(Raw Data)進(jìn)行過(guò)濾，即去掉測(cè)序接頭序列、重復(fù)冗余序列和低質(zhì)量序列，獲得高質(zhì)量測(cè)序數(shù)據(jù)(Clean Data)，再用HISAT2[12](2.0.4,參數(shù)-dta-p 6-max-intronlen 5000000)比對(duì)系統(tǒng)與指定的參考基因組(GRCg6a)進(jìn)行序列比對(duì)，得到Mapped Data。使用StringTie軟件(1.3.4b,參數(shù)-p 6-merge -F 0.1 -T 0.1 -i -eB -p 6)與原有的基因組注釋進(jìn)行比較，挖掘新基因。

1.4 差異表達(dá)基因(DEGs)的篩選

使用RSEM軟件[13](v1.2.19)計(jì)算基因的表達(dá)量，差異表達(dá)基因的表達(dá)量以FPKM(fragments per kilobase of exon per million reads mapped)為單位。使用DESeq2軟件[14](1.6.3)對(duì)測(cè)序獲得的Clean Data進(jìn)行差異表達(dá)基因的分析，每組樣本有3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，在差異表達(dá)基因檢測(cè)過(guò)程中，將差異倍數(shù)(fold change)≥1.5且差異顯著性P值(Pvalue < 0.05)作為篩選標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 差異表達(dá)基因的GO功能富集和KEGG的通路分析

使用DIAMOND軟件[15](2.0.4)將發(fā)掘的差異表達(dá)基因與GO(gene ontology)數(shù)據(jù)庫(kù)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析，獲得差異表達(dá)基因的GO功能注釋和KEGG的通路富集，P<0.05為差異顯著。

1.6 q-PCR驗(yàn)證

為驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄物組測(cè)序的結(jié)果，從篩選出與脂肪代謝相關(guān)的候選基因中隨機(jī)選取6個(gè)基因，通過(guò)SYBR?PremixExTaqTMⅡ試劑盒(Code：DRR820A)進(jìn)行qPCR驗(yàn)證。用Oligo 7軟件設(shè)計(jì)引物，交由華大基因合成(Table 1)。反應(yīng)總體系10 μL：TB GreenPremixExTaqⅡ 5.0 μL，上下游引物各0.4 μL，cDNA 1.0 μL，ddH2O 3.2 μL。擴(kuò)增條件為：預(yù)變性95 ℃ 30 s；(變性95 ℃ 5 s、退火57 ℃ 30 s、延伸72 ℃ 10 s)×44循環(huán)；熔解過(guò)程(95 ℃ 60 s、55 ℃ 30 s、95 ℃ 30 s)。內(nèi)參基因GAPDH與目的基因的樣本要在同樣的條件下進(jìn)行qPCR，通過(guò)2-△△CT法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)錄物組測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量檢測(cè)和比對(duì)結(jié)果

對(duì)轉(zhuǎn)錄物組原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到有效數(shù)據(jù)、GC、Q20、Q30含量(Table 2)。結(jié)果顯示，GC含量都在53%左右，Q20均在98%以上，Q30均在94%以上。從比對(duì)測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示(Table 3)，各樣品的Reads與參考基因組的比對(duì)效率在83.26% ～ 87.66%之間，比對(duì)到唯一位置的比對(duì)率在78.50% ～ 83.32%，比對(duì)到多個(gè)位置比對(duì)率占3.72% ～ 4.76%。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄物組測(cè)序得到的數(shù)據(jù)可靠，可用于后續(xù)結(jié)果分析。

Table 2 The statistical results of sequencing data

Table 3 Statistics of comparison results between transcriptome sequencing data and reference genome

2.2 重復(fù)相關(guān)性分析

計(jì)算每2個(gè)樣本之間的皮爾遜(Pearson)[16]相關(guān)性，用熱圖方式表示兩兩樣品的相關(guān)性(Fig.1)。結(jié)果表明，0A、0B、0C三個(gè)生物學(xué)重復(fù)之間的兩兩相關(guān)系數(shù)分別為0.989、0.986和0.992；1A、1B、1C三個(gè)生物學(xué)重復(fù)之間的兩兩相關(guān)系數(shù)分別為0.993、0.993和0.992；2A、2B、2C三個(gè)生物學(xué)重復(fù)之間的兩兩相關(guān)系數(shù)分別為0.98、0.986和0.982，符合編碼(encode)計(jì)劃對(duì)試驗(yàn)中皮爾遜相關(guān)系數(shù)(R2)至少應(yīng)該不小于0.92的要求。每組3個(gè)重復(fù)之間的相關(guān)性都較強(qiáng)，表明生物學(xué)重復(fù)有效。

2.3 差異表達(dá)基因的篩選

以倍數(shù)變化(Fold Change) ≥ 1.5且P值 < 0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn)，0%CLAvs1%CLA試驗(yàn)組總共獲得406個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因281，下調(diào)基因125；0%CLAvs2%CLA試驗(yàn)組總共得到659個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因422，下調(diào)基因237；火山圖中的紅色表示上調(diào)的差異表達(dá)基因，綠色表示下調(diào)的差異表達(dá)基因，黑色表示無(wú)差異的基因(Fig.2A、2B、2C)，橫坐標(biāo)絕對(duì)值越大，表明表達(dá)量在兩樣品間的表達(dá)量倍數(shù)差異越大；縱坐標(biāo)值越大，表明差異表達(dá)越顯著，篩選得到的DEGs越可靠。

2.4 差異表達(dá)基因的GO功能分類

GO富集顯示，1%CLA試驗(yàn)組共有406個(gè)差異表達(dá)基因，其中有354個(gè)差異表達(dá)基因得到功能注釋；2%CLA試驗(yàn)組共有659個(gè)差異表達(dá)基因，其中有581個(gè)差異表達(dá)基因得到功能注釋。這些差異表達(dá)基因集中在生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能3大類(Fig.3)。DEGs主要富集在生物學(xué)過(guò)程的細(xì)胞過(guò)程、單一生物過(guò)程、生物調(diào)節(jié)和代謝過(guò)程；DEGs在生物學(xué)過(guò)程中的細(xì)胞聚集(cell aggregation)在1%CLA試驗(yàn)組無(wú)差異表達(dá)基因的富集；DEGs在細(xì)胞組分中的類核(nucleoid)、病毒(virion)和病毒部分(virion part)均不富集；DEGs在分子功能中的化學(xué)排斥物活性(chemorepellent activity)在1%CLA試驗(yàn)組無(wú)差異表達(dá)基因的富集，趨化活性(chemoattractant activity)在2%CLA試驗(yàn)組無(wú)差異表達(dá)基因的富集。

Fig.3 GO function classification statistics map of DEGs (A) GO function classification statistics map of 0%CLA vs 1% CLA, (B) 0% CLA vs 2% CLA. The abscissa is the GO function classification. The left side of the ordinate is the percentage of the number of genes. The number of genes was shown on the right

共篩選到7個(gè)與脂肪酸代謝相關(guān)的顯著富集GO條目，其中1%CLA試驗(yàn)組有6個(gè)顯著富集的GO條目，2%CLA試驗(yàn)組有2個(gè)顯著富集的GO條目。發(fā)現(xiàn)3個(gè)與KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中脂肪代謝相關(guān)的相同基因，分別是ENSGALG00000005043、ENSGALG00000048882和ELOVL5(Table 4)。

Table 4 Significantly enriched GO entries related to fatty acid metabolism

2.5 差異表達(dá)基因的KEGG通路分析

對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG通路分析，可以進(jìn)一步了解差異表達(dá)基因的生物學(xué)功能。1%CLA試驗(yàn)組共有406個(gè)差異表達(dá)基因，在122條通路中得到注釋，其中有14條通路顯著富集(P< 0.05)，富集在細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)、黏著斑(focal adhesion)、細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecules)、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)(regulation of actin cytoskeleton)和類固醇生物合成(steroid biosynthsis)等信號(hào)通路中；2%CLA試驗(yàn)組有659個(gè)差異表達(dá)基因，在152個(gè)通路中得到注釋，其中有11條通路顯著富集(P< 0.05)，富集在黏著斑(focal adhesion)、細(xì)胞黏附分子(cell adhesion molecules)、丙酮酸代謝(pyruvate metabolism)、不飽和脂肪酸的生物合成(biosynthesis of unsaturated fatty acids)和脂肪酸生物合成(fatty acids biosynthesis)等信號(hào)通路中(Fig.4)。

Fig.4 KEGG pathway bubble chart of enrichment of DEGs (A) Bubble chart of KEGG pathway enrichment of 0% CLA vs 1% CLA, (B) 0% CLA vs 2% CLA. The ordinate represents the name of the passage. The abscissa represents the Gene Ratio. The color of the circle represents the p value, The size of the circle indicates the number of genes enriched in the pathway

通過(guò)KEGG信號(hào)通路分析6個(gè)主要參與脂肪代謝通路中的11個(gè)差異表達(dá)基因(Table 5)。FADS2(脂肪酸脫氫酶)在1%CLA和2%CLA試驗(yàn)組均極顯著上調(diào)(P< 0.01)；在2%CLA試驗(yàn)組FADS1(脂肪酸去飽和酶1)、ELOVL5(極長(zhǎng)鏈脂肪酸延伸酶蛋白5)、LPL(脂蛋白脂肪酶)和FABP5(脂肪酸結(jié)合蛋白)顯著上調(diào)(P< 0.05)，ACOX2(脂酰輔酶A氧化酶2)、SLC27A1(脂肪酸運(yùn)輸?shù)鞍?、LOC107050163和ENSGALG00000030996顯著下調(diào)(P< 0.05)，在1%CLA試驗(yàn)組均無(wú)差異；差異表達(dá)基因ENSGALG00000005043和ENSGALG00000048882在1%CLA和2%CLA試驗(yàn)組均顯著下調(diào)(P< 0.05)。

2.6 qRT-PCR驗(yàn)證篩選得到的差異表達(dá)基因

從11個(gè)與脂肪酸代謝相關(guān)的候選基因中隨機(jī)選取6個(gè)基因進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)其表達(dá)水平。結(jié)果顯示，用qRT-PCR檢測(cè)的6個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)水平變化趨勢(shì)與RNA-seq的結(jié)果一致(Fig.5)。

Fig.5 DEGs sequencing results and qPCR validation The ordinate represents log2 fold change of mRNA of candidate gene. The consistent trend of qRT-PCR and RNA-seq indicates that transcriptome data are reliable

3 討論

肌內(nèi)脂肪沉積是影響肉品質(zhì)和風(fēng)味的重要因素。近年的研究表明，改變飼料營(yíng)養(yǎng)成分可以增加肌內(nèi)脂肪沉積，提高肉品質(zhì)[17～19]。本研究對(duì)貴妃雞基礎(chǔ)日糧中添加不同比例CLA的胸肌樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄物組分析，共挖掘新基因3 165個(gè)，篩選1 065個(gè)差異表達(dá)基因。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄物組數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控分析和差異表達(dá)基因相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)每組3個(gè)重復(fù)之間的相關(guān)性都較強(qiáng)，表明生物學(xué)重復(fù)有效，測(cè)序數(shù)據(jù)可靠。

本研究對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO富集分析發(fā)現(xiàn)，DEGs主要集中在生物學(xué)過(guò)程的細(xì)胞過(guò)程、單一生物過(guò)程、生物調(diào)節(jié)和代謝過(guò)程，這些生物過(guò)程可能調(diào)控脂肪代謝。在與脂肪代謝相關(guān)顯著富集GO條目中，1%CLA試驗(yàn)組有6個(gè)顯著富集條目11個(gè)基因參與脂肪代謝，2%CLA試驗(yàn)組有2個(gè)顯著富集條目3個(gè)基因。其中，ENSGALG00000005043、ENSGALG00000048882和ELOVL5在KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中脂肪代謝相關(guān)的基因也有發(fā)現(xiàn)，表明這些GO條目中的基因?qū)LA影響脂肪酸代謝有著重要作用，為揭示CLA對(duì)貴妃雞脂肪代謝分子調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。

有研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、黏著斑和細(xì)胞黏附分子調(diào)節(jié)通路可能參與脂質(zhì)的沉積[20～21]。本研究通過(guò)KEGG分析發(fā)現(xiàn)，DEGs顯著富集在細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、黏著斑和細(xì)胞黏附分子信號(hào)等通路中，可能參與脂質(zhì)代謝；1%CLA和2%CLA試驗(yàn)組DEGs分別顯著富集在類固醇生物合成和脂肪酸生物合成通路中參與肌內(nèi)脂肪代謝。本文結(jié)果表明，貴妃雞基礎(chǔ)日糧中CLA可能影響這些信號(hào)通路中相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控肌內(nèi)脂肪代謝，具體調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

Table 5 Pathways and enriched genes related to fatty acid metabolism

脂肪酸脫氫酶(FADS)是一類催化脂肪酸酰基鏈特定位置C-C脫氫形成C=C的脫氫酶家族，能夠催化脂肪酸生成多不飽和脂肪酸[22]。FADS2是花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)等多不飽和脂肪酸(PUFAs)合成過(guò)程的限速酶，并在生物體內(nèi)具有調(diào)節(jié)脂肪酸代謝等重要作用[23～24]。有研究發(fā)現(xiàn)，干擾FADS2可顯著降低奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中AA和DHA比例，導(dǎo)致細(xì)胞中PUFAs含量降低；并且抑制二?；视娃D(zhuǎn)移酶基因1(diacylglycerol acyltransferase 1, DGAT1)及DGAT2表達(dá)，降低細(xì)胞中甘油三酯(TG)含量[25]。在新品種二郎雞胸肌組織中發(fā)現(xiàn)，膽固醇的含量與FADS2基因表達(dá)量呈顯著正相關(guān)，低密度脂蛋白與FADS2基因表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ADS2在1%CLA和2%CLA試驗(yàn)組均極顯著上調(diào)，表明貴妃雞基礎(chǔ)日糧中CLA可能促進(jìn)TG、膽固醇和PUFA在肌肉組織中形成，調(diào)節(jié)肌肉組織中的脂肪沉積。

FADS1是參與PUFAs去飽和和伸長(zhǎng)級(jí)聯(lián)反應(yīng)生成長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸的限速酶之一[27]。FADS1下調(diào)可以抑制PPARα-FGF21(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21)信號(hào)通路，從而使脂肪在肝中沉積[28]。Fan等[29]首次證實(shí)，牛乳腺上皮細(xì)胞中TG、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量與FADS1表達(dá)呈顯著正相關(guān)。極長(zhǎng)鏈脂肪酸延伸酶蛋白家族(elongation of very-long-chain fatty acids,ELOVLs)是長(zhǎng)鏈脂肪酸和超長(zhǎng)鏈脂肪酸合成的起始酶和限速酶[30]。目前，在這個(gè)家族中共發(fā)現(xiàn)7個(gè)成員，其中ELOVL5在雞上被定位于3號(hào)染色體，主要催化合成多不飽和脂肪酸。Moon等[31]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)敲除小鼠體內(nèi)ELOVL5基因時(shí)，可以通過(guò)激活脂肪酸合成相關(guān)的靶基因的表達(dá)，進(jìn)而形成脂肪肝。ELOVL5和FASN可以調(diào)控綿羊脂肪沉積[32]。脂肪酸結(jié)合蛋白質(zhì)5(fatty acid binding protein 5,FABP5)參與脂肪酸的攝取、結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，對(duì)硬脂酸和亞油酸具有高度親和力，并通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)調(diào)控脂質(zhì)代謝[33～34]。FABP5可通過(guò)PPARγ和LPL影響血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力和脂質(zhì)代謝[35]。FABP5表達(dá)上調(diào)可能導(dǎo)致家鴨脂肪沉積過(guò)多[36]。脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是參與脂肪代謝的關(guān)鍵酶，王剛等[37]發(fā)現(xiàn)，豬肌肉組織LPL基因表達(dá)與脂肪沉積呈顯著正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ADS1、ELOVL5、FABP5和LPL在1%CLA試驗(yàn)組無(wú)差異表達(dá)，在2%CLA試驗(yàn)組顯著上調(diào)。表明貴妃雞基礎(chǔ)日糧中的2%CLA可能激活FADS1和ELOVL5參與PUFA合成，提高PUFA在肌肉中的富集。FABP5的上調(diào)表達(dá)，可能激活PPAR信號(hào)通路中的轉(zhuǎn)錄因子PPARG，PPARG被激活后可能引起LPL上調(diào)，以促進(jìn)TG的合成[2]，調(diào)控肌肉組織中的脂肪沉積，改善肉品質(zhì)。這與張廣民[9]在飼糧中添加t-10,c-12 CLA增加AA肉雞肌內(nèi)脂肪的研究結(jié)果一致。

ACOX2是脂酰輔酶A氧化酶2的編碼基因，主要負(fù)責(zé)支鏈脂肪酸的降解，影響脂肪酸的β-氧化，調(diào)控脂肪酸代謝，是唯一參與膽汁酸生物合成的?；o酶A氧化酶[38]。SLC27A1，又稱作FATP(fatty acid transport proteins)，是脂肪酸運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)家族成員之一，它可以調(diào)節(jié)長(zhǎng)鏈脂肪酸的代謝[39]。SLC27A1基因的下調(diào)，通過(guò)CPT1A介導(dǎo)的抑制脂肪酸的氧化從而增強(qiáng)雞肌肉內(nèi)脂肪沉積[40～41]。在過(guò)表達(dá)SLC27A1的小鼠骨骼肌中，觀察到肌內(nèi)TG的降低，促進(jìn)脂肪酸的氧化[42]。本研究發(fā)現(xiàn)，ACOX2和SLC27A1在1%CLA試驗(yàn)組無(wú)差異，在2%CLA試驗(yàn)組顯著下調(diào)。表明貴妃雞基礎(chǔ)日糧中，2%CLA可能影響脂肪酸的β-氧化，使TG在肌肉中沉積，增加肌肉脂肪的沉積，改善肉品質(zhì)。

基因LOC107050163和ENSGALG00000030996在1%CLA試驗(yàn)組表達(dá)無(wú)差異，在2%CLA試驗(yàn)組表達(dá)顯著下調(diào)。基因ENSGALG00000005043和ENSGALG00000048882在1%CLA試驗(yàn)組和2%CLA試驗(yàn)組均顯著下調(diào)。LOC107050163在多不飽和脂肪酸的合成和脂肪酸代謝通路中，ENSGALG00000030996、ENSGALG00000005043和ENSGALG00000048882在脂肪酸的生物合成通路中。表明貴妃雞基礎(chǔ)日糧中CLA抑制這4個(gè)基因表達(dá)，調(diào)控肌內(nèi)脂肪代謝，其功能和調(diào)控機(jī)制需進(jìn)一步研究?？傊?，本研究在貴妃雞基礎(chǔ)日糧中添加CLA，共篩選11個(gè)與脂肪代謝相關(guān)的候選基因，為揭示CLA影響肌內(nèi)脂肪代謝的分子機(jī)制提供理論依據(jù)，但CLA影響這些基因的具體調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。