羅浩成，楊詩雯，李 軍，張勇民，董登祥

(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550001；2巴黎第六大學(xué)法國國家科研中心，巴黎 75005)

厚樸酚(magnolol)為烯丙基連苯二酚類物質(zhì)，作為傳統(tǒng)中藥材中主要的有效活性成分，其具有多種藥理作用，如抗炎[1]、抗腫瘤[2-3]、促進(jìn)胃動力[4]、抗菌[5-6]、抗氧化[7]、降血糖[8]、降脂[9]、抗抑郁[10]、抗銀屑病[11]、抗齲齒[12]等，擁有良好的開發(fā)前途和廣闊應(yīng)用前景。然而受限于厚樸酚水溶解性不好，故難以形成合適的給藥劑型，生物利用度不高，生物活性并未得到充分的開發(fā)和利用，影響厚樸酚在臨床上的應(yīng)用，造成當(dāng)前厚樸酚并無成熟可靠的臨床應(yīng)用劑型。因此，制備其衍生物以期提高水溶性，提高藥理活性，為后續(xù)厚樸酚臨床運(yùn)用提供重要的基礎(chǔ)支撐。

此前已有許多學(xué)者對厚樸酚進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾與改造，如郭明鑫[13]等人通過對厚樸酚與和厚樸酚的酚羥基進(jìn)行修飾，引入酯基、酰肼、1，3，4-噁二唑等結(jié)構(gòu)，為天然產(chǎn)物的減毒增效衍生化設(shè)計提供了新的思路。莊文豪[14]在厚樸酚中酚羥基、苯基的基礎(chǔ)上，合成一系列烯丙基被氧化的厚樸酚衍生物，結(jié)果表明厚樸酚衍生物抑菌活性均有所增加。但目前對于厚樸酚糖基化改造及修飾的研究較少。糖類化合物作為維持生命進(jìn)程的重要物質(zhì)之一，不僅僅是能量供給的來源，也同樣參與許多生物識別過程，例如蛋白質(zhì)折疊、細(xì)胞間通訊、細(xì)菌粘附等。此外其還參與形成具有生物學(xué)意義的生物分子，如糖蛋白、肽聚糖[15]。由于天然糖類化合物異頭位置構(gòu)型有α、β的區(qū)別，往往混雜在一起難以分離，所以純天然糖類化合物的實(shí)用性仍然不足以應(yīng)對日益增長的治療需求。通過合成的方式，可獲得大量結(jié)構(gòu)明確及純度高的糖化合物。且通過合成糖片段再與天然藥物連接的手段，可為藥物研究者提供一種改善天然化合物的水溶性、藥物活性及藥代動力學(xué)的新思路[16-17]。因此，化學(xué)合成是獲取復(fù)雜的寡糖和糖類衍生物的重要來源。近年來，許多學(xué)者通過利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)將小分子化合物與系統(tǒng)生物學(xué)、計算機(jī)科學(xué)結(jié)合起來，采用生物信息學(xué)方法“藥物-靶點(diǎn)-疾病”的靶標(biāo)預(yù)測模型，能夠系統(tǒng)地闡述藥物與疾病的作用機(jī)制與作用靶點(diǎn)，為接下來的實(shí)驗(yàn)提供數(shù)據(jù)支持與道路指引[18-19]。

因此，本課題通過對mag結(jié)構(gòu)進(jìn)行糖基化修飾，引入多羥基水溶性基團(tuán)(如葡萄糖、半乳糖、麥芽糖等)及用糖化學(xué)保護(hù)基團(tuán)取代保護(hù)mag雙羥基，以期改善厚樸酚難溶于水以及易氧化的特性；提高生物利用度、水溶性和穩(wěn)定性；同時對3個糖苷衍生物進(jìn)行生物信息學(xué)分析，為接下來的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)提供道路指引。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

BSM220.4電子天平(上海卓精電子科技有限公司)、INOVA-500MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀(安捷倫科技有限公司)、OBS-2200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(倍捷科技(上海)有限公司)、FINNIGANLACQ-DECA質(zhì)譜儀(美國菲尼根質(zhì)譜公司)、721G-100紫外分光光度計(上海儀電分析儀器有限公司)、TL-200B電阻超純水機(jī)(深圳億利有限公司)、WTF-203B三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。

D-(+)-半乳糖(AR批號20160712國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、D-(+)-麥芽糖(BR批號20170410天津大茂化學(xué)試劑廠)、D-(+)葡萄糖(AR批號20161219國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、吡啶(AR批號20140511國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、醋酸酐(AR批號20140923國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、三氯乙腈(AR批號20160402國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、三氟化硼乙醚(AR批號20171113國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、乙硫醇(AR批號20160814國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-O-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酸酯(α)，2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-O-D-吡喃半乳糖三氯乙酰亞胺酸酯(β)，2，3，4，6-四-O-乙?；?β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-1，2，3，6-四-O-乙?；?D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亞胺酸酯(γ)，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 目標(biāo)化合物合成(圖1)

圖1 目標(biāo)化合物的合成路線Fig.1 Synthetic routes of the target compounds

(1)化合物2的合成

稱量100 mg(0.38 mmol)mag和280 mg(0.57 mmol)化合物α，加入50 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，加入100 mg活化過的4?MS和一個攪拌子，真空泵抽真空干燥0.5 h，通入惰性氣體N2保護(hù)反應(yīng)體系。加入約15 mLDCM作為溶劑溶解底物，在0 ℃的冰水混合浴中平衡反應(yīng)10 min，然后加入5 μL(0.026 mmol)催化劑TMSOTf。反應(yīng)用TLC跟蹤點(diǎn)板，展開劑Cy∶EtOAc=3∶2。約1 h后，監(jiān)測到反應(yīng)完成，Rf值為0.53。加入飽和碳酸氫鈉溶液中和體系中的三氟甲磺酸至pH中性，萃取過濾濃縮得粗產(chǎn)物，過硅膠柱純化粗產(chǎn)物，過柱用洗脫劑為Cy和EtOAc混合配置(體積比3∶1)。得到白色粉末狀固體物質(zhì)89 mg，即化合物a，產(chǎn)率為39.28%。

稱量500 mg金屬Na，用Cy洗去表面煤油，快速加入裝有50 mLMeOH的燒杯中，制得MeONa溶液。稱量60 mg(0.10 mmol)化合物a，加入25 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，放入攪拌子，加5 mL甲醇作溶劑溶解底物，然后緩慢倒入剛剛制備的MeONa溶液，直至反應(yīng)體系pH值到達(dá)11～13之間。在r.t.條件下攪拌進(jìn)行反應(yīng)，TLC監(jiān)測跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，展開劑Cy∶EtOAc=2∶3。約1 h后，監(jiān)測到反應(yīng)物消耗完畢，反應(yīng)完成，Rf值為0。反應(yīng)體系中加入強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂中和MeONa，使得體系pH中性，用MeOH作為溶劑，過濾除去樹脂，減壓旋蒸濃縮溶劑，粗產(chǎn)物用交聯(lián)右旋葡聚糖HL-20凝膠柱純化，得到淡黃色固體物質(zhì)38.05 mg，即化合物2，產(chǎn)率88.86%，m.p.131～134 ℃。

波譜解析：ESI-MSm/z：451.2{[M+Na]+}；

1H NMR(600 MHz，DMSO)δ：7.35 - 7.39(d，J =8.2Hz，3H，6-H，12-H，4- H)，7.29(s，1H，10-H)，7.20(s，1H，3-H)，7.12(s，1H，9-H)，7.06- 7.08(d，J =8.0Hz，2H，14-H，17-H)，5.41(s，1H，1′-H)，4.91(s，1H，OH)，4.25 - 4.27(d，J =13.9Hz，4H，15-H，18-H)，3.81(s，1H，2′-H)，3.67(s，1H，5′-H)，3.59(s，2H，6′-H)，3.46(s，1H，3′-H)，3.42(s，1H，4′-H)，3.04(s，4H，13-H，16-H)，2.51(s，1H，4H，OHGlu-H)

13C NMR(151 MHz，DMSO)δ：174.38(C2)，173.69(C8)，132.96(2C，C14，C17)，130.52(C11)，129.32(C12)，128.40(C7)，98.24(2C，C15，C18)，97.26(C9)，96.80(C3)，92.46(C1′)，75.56(C5′)，72.42(C2′)，71.23(C3′)，70.53(C4′)，61.58(C6′)，39.81(2C，C13，C16)

(2)化合物3的合成

稱量100 mg(0.38 mmol)mag和280 mg(0.57 mmol)化合物β，加入50 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，加入100 mg活化過的4?MS和一個攪拌子，真空泵抽真空干燥0.5 h，通入惰性氣體N2保護(hù)反應(yīng)體系。加入約15 mLDCM作為溶劑溶解底物，在0 ℃的冰水混合浴中平衡反應(yīng)10 min，然后加入5 μL(0.026 mmol)催化劑TMSOTf。反應(yīng)TLC跟蹤點(diǎn)板，展開劑Cy∶EtOAc=3∶2。約1 h后，監(jiān)測到反應(yīng)完成，Rf值為0.53。加入飽和碳酸氫鈉溶液中和體系中的三氟甲磺酸至pH中性，萃取過濾.濃縮得粗產(chǎn)物，過硅膠柱純化粗產(chǎn)物，過柱用洗脫劑為Cy和EtOAc混合配置(體積比3∶1)。得到白色粉末狀固體物質(zhì)96 mg，即化合物b，產(chǎn)率為42.37%。

稱量500 mg金屬Na，用Cy洗去表面煤油，快速加入裝有50 mL甲醇的燒杯中，制得NaOMe溶液。稱量60 mg(0.10 mmol)化合物b，加入25 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，放入攪拌子，加5 mL甲醇作溶劑溶解底物，然后緩慢倒入剛剛制備的NaOMe溶液，直至反應(yīng)體系pH值到達(dá)11～13之間。在r.t.條件下攪拌進(jìn)行反應(yīng)，TLC監(jiān)測跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，展開劑Cy∶EtOAc=2∶3。約1 h后，監(jiān)測到反應(yīng)物消耗完畢，反應(yīng)完成，Rf值為0。反應(yīng)體系中加入強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂中和甲醇鈉，使得體系pH中性，用MeOH作為溶劑，過濾除去樹脂，減壓旋蒸濃縮溶劑，粗產(chǎn)物用交聯(lián)右旋葡聚糖HL-20凝膠柱純化，得到淡黃色固體物質(zhì)36.69 mg，即化合物3，產(chǎn)率85.69%，m.p.133～139 ℃。

波譜解析：ESI-MSm/z：451.2{[M+Na]+}；

1H NMR(600 MHz，DMSO)δ：7.39(s，2H，6-H，12-H)，7.38(s，1H，10-H)，7.35(s，1H，4-H)，7.34(s，1H，9-H)，7.21(s，1H，3-H)，7.08-7.11(d，J=29.2Hz，2H，14-H，17-H)，5.43(s，1H，1′-H)，4.79(s，1H，OH)，4.53(s，4H，15-H，18-H)，3.82(s，1H，5′-H)，3.73(s，1H，2′-H)，3.23(s，2H，CH2Gal-H)，2.97(s，1H，3′-H)，2.73(s，1H，4′-H)，2.57(s，2H，13-H)，2.50(s，2H，16-H)，2.10-2.15(m，4H，OHGal-H)

13C NMR(151 MHz，DMSO)δ：174.24(C2)，173.49(C8)，138.17(2C，C14，C17)，134.26(C11)，129.68(C12)，129.35(C10)，127.91(2C，C4，C6)，126.80(C7)，123.32(C1)，102.44(2C，C15，C18)，98.89(C9)，97.85(C3)，92.84(C1′)，75.18(C2′)，70.28(C3′)，69.90(C5′)，68.49(C4′)，61.03(C6′)，39.80(2C，C13，C16)

(3)化合物4的合成

稱量100 mg(0.38 mmol)mag和462 mg(0.57 mmol)化合物γ，加入50 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，加入100 mg活化過的4?MS和一個攪拌子，真空泵抽真空干燥0.5 h，通入惰性氣體N2保護(hù)反應(yīng)體系。加入約15 mLDCM作為溶劑溶解底物，在0 ℃的冰水混合浴中平衡反應(yīng)10 min，然后加入5 μL(0.026 mmol)催化劑TMSOTf。反應(yīng)TLC跟蹤點(diǎn)板，展開劑Cy∶EtOAc=3∶2。約1 h后，監(jiān)測到反應(yīng)完成，Rf值為0.57。加入飽和碳酸氫鈉溶液中和反應(yīng)體系中的三氟甲磺酸至pH中性，萃取過濾濃縮得粗產(chǎn)物，過硅膠柱純化粗產(chǎn)物，過柱用洗脫劑為Cy和EtOAc混合配置(體積比3∶1)。得到白色粉末狀固體物質(zhì)127 mg，即化合物c，產(chǎn)率為37.79%。

稱量500 mg金屬Na，用Cy洗去表面煤油，快速加入裝有50 mL甲醇的燒杯中，制得NaOMe溶液。稱量120 mg(0.14 mmol)化合物c，加入50 mL反應(yīng)瓶內(nèi)，放入攪拌子，加10 mL甲醇作溶劑溶解底物，然后緩慢倒入剛剛制備的NaOMe溶液，直至反應(yīng)體系pH值到達(dá)11～13之間。在r.t.條件下攪拌進(jìn)行反應(yīng)，TLC監(jiān)測跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，展開劑Cy∶EtOAc=2∶3。約0.5 h后，監(jiān)測到反應(yīng)物消耗完畢，反應(yīng)完成，Rf值為0。反應(yīng)體系中加入強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂中和甲醇鈉，使得體系pH中性，用MeOH作為溶劑，過濾除去樹脂，減壓旋蒸濃縮溶劑，粗產(chǎn)物用交聯(lián)右旋葡聚糖HL-20凝膠柱純化，得到淡黃色固體物質(zhì)73.38 mg，即化合物4，產(chǎn)率91.62%，m.p.103～107 ℃。

波譜解析：ESI-MSm/z：613.2 {[M+Na]+}；

1H NMR(600 MHz，DMSO)δ：7.40(s，2H，6-H，12-H)，7.20(s，1H，4-H)，7.07(s，1H，10-H)，6.68-6.70(d，J18.1Hz，2H，3-H，9-H)，6.35(s，2H，14-H，17-H)，5.46(s，1H，1′-H)，5.31(s，1H，1″-H)，5.01(s，1H，OH)，4.92-4.95(dd，J=35.4，6.9Hz，4H，15-H，18-H)，4.53(s，1H，5′-H)，4.39(s，1H，2′-H)，3.68(s，1H，5″-H)，3.61(s，1H，2″-H)，3.48(s，1H，3′-H)，3.37(s，4H，6″-H，6′-H)，3.35(s，1H，3″-H)，3.32(s，1H，4″-H)，3.29(s，2H，13-H)，3.21-3.25(dd，J=17.7，10.6Hz，2H，16-H)，3.07(s，1H，4′-H)，2.51-2.58(d，J=1.7Hz，7H，7OHMal-H)

13C NMR(151 MHz，DMSO)δ：150.57(C2)，150.14(C8)，135.84(2C，C14，C17)，133.74(C11)，132.89(C5)，131.59(C12)，131.06(C10)，130.06(2C，C4，C6)，129.49(C7)，129.37(C1)，128.64(2C，C15，C18)，127.32(C9)，127.16(C3)，102.03(C1′)，101.60(C1″)，97.48(C2″)，92.70(C5′)，75.41(C2′)，74.69(C5″)，73.87(C3′)，73.31(C3″)，72.86(C4″)，72.00(C4′)，61.68(C6′)，60.68(C6″)，40.53(2C，C13，C16)

2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測厚樸酚衍生物抗中樞神經(jīng)損傷的作用機(jī)制

2.1 厚樸酚衍生物作用靶點(diǎn)的預(yù)測

使用TargetNet平臺，通過導(dǎo)入化合物的結(jié)構(gòu)，對厚樸酚糖苷化衍生物(化合物2，3，4)進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測，取prob>0.5，得到潛在靶點(diǎn)。

2.2 中樞神經(jīng)損傷靶點(diǎn)的建立

通過Genecardds在線數(shù)據(jù)庫和OMIM數(shù)據(jù)庫，搜索關(guān)鍵詞“中樞神經(jīng)損傷”，得到人類中樞神經(jīng)損傷相關(guān)靶點(diǎn)基因，取Relevance>1，兩者結(jié)果合并并刪除重復(fù)數(shù)據(jù)。

2.3 疾病-藥物網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

使用R軟件進(jìn)行“疾病-藥物”靶點(diǎn)分析，進(jìn)行交集操作，得到相同靶點(diǎn)，做出韋恩圖，將靶點(diǎn)輸入Uniprot數(shù)據(jù)庫，得到交集靶標(biāo)的gene symbol，以用于后續(xù)分析。

2.4 核心靶基因的篩選與PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

用String平臺處理交集靶點(diǎn)，選擇物種為“智人”，設(shè)置最小闕值為0.7，得到蛋白交叉作用，并構(gòu)建靶標(biāo)的PPI網(wǎng)絡(luò)。接著用R軟件篩選節(jié)點(diǎn)數(shù)最大(即交互關(guān)系最多)的幾種靶標(biāo)，并構(gòu)建柱形圖。

2.5 GO富集分析與KEGG信號通路富集分析

利用R軟件將交集gene symbol轉(zhuǎn)換為entrezID。使用DAVID數(shù)據(jù)庫對得到的entrezID進(jìn)行GO富集分析和KEGG信號通路富集分析，用R軟件對其可視化處理。

3 結(jié)果與討論

3.1 化學(xué)合成

本實(shí)驗(yàn)共合成厚樸酚糖苷衍生物3種，均未有文獻(xiàn)記載，均通過1H-NMR、13C-NMR和MS確定結(jié)構(gòu)，在酚類的糖基化反應(yīng)中，與其他糖基供體相比，三氯乙?；鶃啺匪猁}供體的合成更困難，但通常收率更高，尤其是使用更復(fù)雜的酚進(jìn)行糖基化反應(yīng)時，三氯乙酰基亞胺酸鹽供體明顯優(yōu)于其他供體。因此酚類糖基化反應(yīng)優(yōu)先三氯乙酰亞胺酸鹽方法進(jìn)行糖苷化反應(yīng)。

使用三氯乙酰亞氨基進(jìn)行的糖基化反應(yīng)，可能發(fā)生亞氨酸酯的酸催化重排，如葡萄糖與mag反應(yīng)時可能出現(xiàn)N-三氯乙?；拎咸烟前犯碑a(chǎn)物。在實(shí)驗(yàn)過程中，我們嘗試了改變?nèi)軇?，反?yīng)溫度或促進(jìn)劑等手段來避免這種副產(chǎn)物。最后發(fā)現(xiàn)，在使用三氯乙酰胺基吡喃葡萄糖供體的情況下，僅使用β-糖苷，不使用α-糖苷，可以明顯減少副產(chǎn)物的量，TLC檢識表明幾乎無副產(chǎn)物產(chǎn)生。

3.2 厚樸酚衍生物抗中樞神經(jīng)損傷的作用機(jī)制

3.2.1 化合物2，3，4的結(jié)果

預(yù)測得到化合物2靶標(biāo)74個，化合物3靶標(biāo)21個，化合物4靶標(biāo)25個，和“中樞神經(jīng)損傷”靶點(diǎn)7137個，結(jié)果用R軟件交集，化合物2得到62個交叉靶點(diǎn)，化合物3得到13個交叉靶點(diǎn)，化合物4得到17個交叉靶點(diǎn)，用生物信息學(xué)方法進(jìn)行交集，線條表示之間存在關(guān)系，白色圓形框表示藥物，黑色圓形框表示疾病，繪制韋恩圖如圖2。

圖2 化合物與中樞神經(jīng)損傷作用的靶點(diǎn)韋恩圖Fig.2 Venn diagram of the targets of the compounds and CNS injury

3.2.2 PPI的構(gòu)建

為了研究靶點(diǎn)之間在人體內(nèi)的相互作用關(guān)系，將藥物(化合物2，3，4)和疾病的交集靶點(diǎn)輸入STRING平臺中，設(shè)置闕值大于0.7，然后對潛在靶點(diǎn)進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析。化合物2共得到60個靶點(diǎn)之間存在相互關(guān)系，化合物3共得到12個靶點(diǎn)之間存在相互關(guān)系，化合物4共得到15個靶點(diǎn)之間存在相互關(guān)系。圖3清晰表明了基因靶點(diǎn)之間的相互關(guān)系。

圖3 化合物的PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 PPI network diagrams of the compounds

用R軟件處理得到PPI網(wǎng)絡(luò)的核心基因，如圖4。

圖4 化合物的PPI網(wǎng)絡(luò)核心基因圖Fig.4 PPI network core gene map of the compounds

3.2.3 藥物-疾病靶點(diǎn)的GO富集分析

將交互靶點(diǎn)映射入DAVID數(shù)據(jù)庫中，進(jìn)行GO生物過程富集分析，如圖5(以各通路p.adjust大小排序)。

圖5 化合物治療中樞神經(jīng)損傷作用的主要GO富集分析網(wǎng)絡(luò)圖Fig.5 Major GO enrichment analysis network of the treatment of CNS injury by the compounds

結(jié)果表現(xiàn)出，化合物2的交互靶點(diǎn)主要生物學(xué)功能有：蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶活性、葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性等?；衔?的交互靶點(diǎn)主要生物學(xué)功能有：碳酸鹽脫水酶活性、葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性、己糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性等?；衔?的交互靶點(diǎn)主要生物學(xué)功能有：嘌呤能受體活性、葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)活性等。

3.2.4 藥物-疾病靶點(diǎn)的KEGG分析

將交互靶點(diǎn)映射入DAVID數(shù)據(jù)庫中，進(jìn)行KEGG信號通路富集分析，如圖6(以各通路0p.adjust大小排序)。

圖6 化合物治療中樞神經(jīng)損傷作用的主要 KEGG信號通路網(wǎng)絡(luò)Fig.6 Major KEGG signaling pathway network of the treatment of CNS injury by the compounds

結(jié)果表現(xiàn)出，化合物2的交互靶點(diǎn)主要信號通路有：孕激素介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路、內(nèi)分泌抵抗通路、松弛素信號通路等。化合物3的交叉靶點(diǎn)信號通路有：孕激素介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟通路、氮代謝通路、四烯酸代謝通路?；衔?的交互靶點(diǎn)信號通路有：5-羥色胺能突觸通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路等。

以化合物4中p.adjust值最小的KEGG信號通路Neuroactive ligand-receptor interaction為例，作化合物4對中樞神經(jīng)損傷作用的通路圖，如圖7。

圖7 化合物4對中樞神經(jīng)損傷作用的通路圖Fig.7 Pathway diagram of the effect of compound 4 on CNS injury

3.3 評價分析

3種化合物治療中樞神經(jīng)損傷疾病的共同潛在靶點(diǎn)有6個，為花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)、碳酸酐酶9(CA9)、熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、前列腺素G/H合酶1(PTGS1/COX-1)、鈉葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(SLC2A1)和鈉葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體2(SLC5A2)。

綜合上述的生物信息學(xué)GO生物過程分析數(shù)據(jù)，可以得到治療作用的主要生物過程4條，即腎上腺素能受體活性、碳酸鹽脫水酶活性、鈉轉(zhuǎn)運(yùn)體活性和氧化還原酶活性。

根據(jù)之前3種糖苷化衍生物模擬出的KEGGPATHWAY數(shù)據(jù)，可以得出4條主要的信號通路，即氮素代謝、孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞形成代謝路徑、5-羥色胺能突觸和鞘脂信號通路。

4 結(jié)論

本研究合成了3種化合物，均為文獻(xiàn)未報道的糖苷衍生物，已通過1H-NMR、13C-NMR及MS確認(rèn)結(jié)構(gòu)，通過本方法改善了水溶性差等問題，豐富了厚樸酚衍生物的種類，繼而通過借助生物信息學(xué)的大數(shù)據(jù)方式，確定了mag糖苷化衍生物治療中樞神經(jīng)損傷的主要潛在靶點(diǎn)6個，主要潛在生物過程4條，主要潛在信號通路4條。為下一步WB和ELISA等藥理學(xué)手段驗(yàn)證提供了依據(jù)，進(jìn)而驗(yàn)證本研究所預(yù)測篩選出來的結(jié)果。以期對厚樸酚衍生物進(jìn)一步進(jìn)行藥效學(xué)研究利用。