牙周炎是一種非特異性的炎性疾病，牙齦紅腫、牙齦出血及牙齒松動等是其常見的臨床表現(xiàn)，牙周炎的發(fā)生涉及氧化應(yīng)激、炎癥、信號傳導(dǎo)等多個過程，尋找有效藥物改善牙周炎是目前亟待解決的問題

。消退素可分成E類和D類，D類消退素主要來源于二十二六烯酸，消退素D1屬于D類消退素，具有消炎、鎮(zhèn)痛等作用

。已經(jīng)證明消退素D1對牙周炎有治療功效

。益生菌是一種微生態(tài)制劑，能夠調(diào)節(jié)免疫、降低膽固醇、改善消化系統(tǒng)

。臨床研究

顯示，益生菌可減輕慢性牙周炎患者出血、疼痛等癥狀，有美學修復(fù)效果。本次探討益生菌聯(lián)合消退素D1對牙周炎大鼠的影響及可能機制，為臨床上牙周炎的治療提供參考思路。

內(nèi)蒙古額仁高比一帶發(fā)育大量的早白堊世白音高老組的火山巖，分析地區(qū)白音高老組火山巖巖石地球化學特征，對揭示該時期巖漿作用具有重要地質(zhì)意義。通過1∶5萬區(qū)域地質(zhì)調(diào)查工作，探討其成因以及形成的大地構(gòu)造環(huán)境。

1 材料和方法

1.1 藥品和試劑：MDA檢測試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司；益生菌購自法國Lactibiane；IL-1β檢測試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所；兔抗MMP-2抗體、兔抗p-p38MAPK抗體購自美國Cell Signaling Technology；IL-6檢測試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；TNF-α檢測試劑盒購自深圳市拓普生物科技有限公司；兔抗PTX3抗體購自美國Invitrogen；兔抗NF-κBp65抗體購自美國Santa Cruz Biotechnology；GSH-Px檢測試劑盒、SOD檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所有限公司；兔抗MMP-9抗體購自美國Abcam；消退素D1購自美國Sigma。

(3)要對各種管道配件的外形、尺寸“心中有數(shù)”，尤其是大口徑的管道配件，不但安裝時占用的空間大，還需要一定的操作空間，因此布置時一定要核對尺寸，不能盲目布置。配件的外形、尺寸等參數(shù)可以從有關(guān)手冊、標準圖和廠家的技術(shù)資料中查到。

1.2 主要實驗儀器：UV7分光光度計購自瑞士梅特勒-托利多；318C+酶標儀購自上海沛歐分析儀器有限公司；DYCSCZ7電泳儀購自北京東方瑞利科技有限公司。

1.3 實驗動物：健康SD大鼠，8周齡，體重280～320 g，購自天津市中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，許可證號：SCXK(津)2020-0005。

1.4.2 牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度檢測：①牙齦出血指數(shù)。用探針輕觸牙周袋、齦溝，游離的齦緣沒有炎癥，不出血，記為0分；游離的齦緣沒有紅腫，但出血，記為1分；游離的齦緣紅腫、水腫，出血，記為2分；牙齦紅腫，出現(xiàn)潰瘍，記為3分；②探診深度。將有刻度的細探針探診牙周袋，選取中頰、遠中頰以及側(cè)頰共3個測量點，最后取均值；③菌斑指數(shù)。將菌斑染色溶液涂抹在選用牙上，孵育30 s，用自來水洗滌10 s，觀察牙面紫紅色，0分表示近齦緣區(qū)域沒有菌斑，1分表示近齦緣區(qū)域有薄菌斑，2分表示齦緣、鄰面存在菌斑，3分表示齦溝、鄰面、齦緣存在大量菌斑。

1.4.1 模型構(gòu)建和分組：結(jié)合相關(guān)文獻構(gòu)建牙周炎動物模型

。腹腔注射10%的水合氯醛麻醉大鼠，將牙齦剝離，用0.2 mm直徑的正畸結(jié)扎絲將大鼠左側(cè)上頜第一磨牙結(jié)扎，結(jié)扎的絲線置于齦溝內(nèi)。結(jié)扎后，大鼠飼喂高糖飼料（面粉6 g、脫脂奶粉28 g、蔗糖56 g、肝粉1 g、酵母粉4 g，少量食鹽以及蔬菜），飲用200 g/L的糖水。4周后，肉眼觀察大鼠牙齦紅腫，觸摸容易出血，牙齒松動，表明造模成功。

1.4 實驗方法

1.4.3 ELISA法檢測IL-1β、IL-6、TNF-α水平：取牙齦組織，用ELISA法檢測IL-1β、IL-6、TNF-α含量，步驟分別根據(jù)IL-1β檢測試劑盒、IL-6檢測試劑盒、TNF-α檢測試劑盒操作說明進行。

1.4.4 Western blot檢測PTX3、NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達水平：取牙齦組織，添加含有PMSF的RIPA溶液，充分裂解，4℃，12 000 g離心10 min。取上清，與5×Loading Buffer混合，在100℃孵育5 min。每個泳道內(nèi)添加50 μg的蛋白樣品，首先設(shè)置90 V的電壓電泳30 min，然后設(shè)置120 V的電壓電泳1.5 h，肉眼觀察藍色染料進入分離膠的底部位置，停止電泳。NC膜根據(jù)分離膠的大小裁剪，設(shè)置100 V電壓轉(zhuǎn)膜2 h。NC膜浸泡在5%牛血清白蛋白溶液中，室溫結(jié)合2 h。然后把NC膜放在一抗溶液內(nèi)，4℃過夜反應(yīng)。NC膜浸泡在二抗內(nèi)，室溫結(jié)合2 h。按照ECL方法顯色。GAPDH作為參照，根據(jù)條帶的灰度值分析目的蛋白表達量變化。PTX3、p38MAPK一抗按照1:800稀釋，MMP-9、MMP-2、NF-κBp65一抗按照1:1 000稀釋，p-p38MAPK一抗按照1:600稀釋。二抗均按照1:4 000稀釋。

2.3 益生菌聯(lián)合消退素D1抑制牙周炎大鼠牙齦組織中PTX3表達：與對照組比較，模型組大鼠牙齦組織中PTX3蛋白表達量升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與模型組比較，益生菌組、消退素D1組、聯(lián)合組大鼠牙齦組織中PTX3蛋白表達量均降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與益生菌組、消退素D1組比較，聯(lián)合組大鼠牙齦組織中PTX3蛋白表達量降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）。見圖1、表3。

2.2 益生菌聯(lián)合消退素D1對牙周炎大鼠牙齦組織中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α的影響：與對照組比較，模型組大鼠牙齦組織中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與模型組比較，益生菌組、消退素D1組、聯(lián)合組大鼠牙齦組織中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與益生菌組、消退素D1組比較，聯(lián)合組大鼠牙齦組織中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）。見表2。

2.1 益生菌聯(lián)合消退素D1對牙周炎大鼠牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度的影響：與對照組比較，模型組大鼠牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度均升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與模型組比較，益生菌組、消退素D1組、聯(lián)合組大鼠牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度均降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與益生菌組、消退素D1組比較，聯(lián)合組大鼠牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度均降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）。見表1。

造模成功的大鼠分成模型組、益生菌組、消退素D1組及聯(lián)合組，每組11只。益生菌組從第5周開始，灌胃2 ml的益生菌液（5×10

CFU/ml）

；消退素D1組從第5周開始，尾靜脈注射2 μl的100 ng/ml的消退素D1

；聯(lián)合組從第5周開始，灌胃2 ml的益生菌液（5×10

CFU/ml），并尾靜脈注射2 μl的100 ng/ml消退素D1。各組大鼠每天用藥1次，連續(xù)用藥4周。模型組大鼠用生理鹽水代替藥物。選取11只對照組大鼠，按照同樣方法麻醉，但不結(jié)扎。各組大鼠檢測牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)、探診深度后，取大鼠牙齦組織，分別用于炎癥因子檢測、蛋白表達檢測和氧化應(yīng)激指標檢測。

2 結(jié)果

封建社會的傳統(tǒng)是民敬官，民不能與官斗，因為胳膊擰不過大腿；下級不能與上級斗，因為官大一級壓死人。封建社會里百姓稱官員為“官老爺”，官不畏民，幾乎沒有官員認為自己也是百姓，像高以永既承認自己是百姓，還寫成對聯(lián)掛在縣衙三堂自勉的官員更是鳳毛麟角。他們多數(shù)會擺足官架子，騎在老百姓的頭上作威作福；偶有良善一些，稍微替老百姓做點事兒的官員，老百姓就會感激涕零，山呼青天大老爺。

1.4.5 SOD、MDA、GSH-Px檢測：取牙齦組織，用比色法檢測SOD、GSH-Px含量，分光光度計法檢測MDA含量，步驟分別按照SOD檢測試劑盒、MDA檢測試劑盒、GSH-Px檢測試劑盒說明書進行。

漢字是不同與拼音文字的一種特殊的表義體系的文字，具有拼音文字所不具備的形音義關(guān)系，形聲字就是這種關(guān)系的最好的體現(xiàn)。如果留學生能夠提綱挈領(lǐng)地學習形聲字，了解和掌握形聲字的規(guī)律和特點，從而增強識字能力，減輕認字負擔。由此可見，形聲字教學在對外漢字教學中占有重要的地位，所以對外漢語教師應(yīng)該在漢字教學過程，充分利用形聲字自身所具有的音義理據(jù)，針對外國留學生的水平，制定出一套有效的形聲字教學方法。

2.4 益生菌聯(lián)合消退素D1對牙周炎大鼠牙齦組織中SOD、MDA、GSH-Px的影響：與對照組比較，模型組大鼠牙齦組織中SOD、GSH-Px含量降低，MDA含量升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與模型組比較，益生菌組、消退素D1組、聯(lián)合組大鼠牙齦組織中SOD、GSH-Px含量升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與益生菌組、消退素D1組比較，聯(lián)合組大鼠牙齦組織中SOD、GSH-Px含量升高，MDA含量降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）。見表4。

本文通過選取適宜的分析譜線和儀器工作參數(shù)，不同的積分、觀測方式，實現(xiàn)了同時測定Cu、Fe、Ni、Cd、Zn、Mn、Ca、Mg、Na、Si、As、S，采用內(nèi)標法補償因鈷鹽基體對待測元素的影響，經(jīng)試驗驗證可用于鈷產(chǎn)品生產(chǎn)過程CoCl2凈化液和Co(NO3)2凈化液中Cu、Fe、Ni、Cd、Zn、Mn、Ca、Mg、Na、Si、As、S等12種元素的測定。也可用于金屬Co、Co3O4、Co(OH)2等鈷產(chǎn)品中上述元素的測定。

2.5 益生菌聯(lián)合消退素D1抑制牙周炎大鼠牙齦組織中NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達：與對照組比較，模型組大鼠牙齦組織中NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達量升高，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與模型組比較，益生菌組、消退素D1組、聯(lián)合組大鼠牙齦組織中NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達量降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）；與益生菌組、消退素D1組比較，聯(lián)合組大鼠牙齦組織中NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達量降低，差異有統(tǒng)計學意義（

＜0.05）。見圖2、表5。

2月20日，水利部直屬機關(guān)2012年黨的工作會議在京召開。水利部黨組書記、部長陳雷出席會議并作重要講話。中央國家機關(guān)工委副書記俞貴麟到會指導(dǎo)并講話。水利部黨組副書記、副部長矯勇主持會議。水利部黨組成員、中紀委駐部紀檢組組長董力傳達中央國家機關(guān)第二十六次黨的工作會議暨第二十四次紀檢工作會議精神。水利部黨組成員、副部長、直屬機關(guān)黨委書記周英作工作報告。水利部副部長胡四一，水利部黨組成員、副部長李國英，總工程師汪洪，總規(guī)劃師兼規(guī)劃計劃司司長周學文出席會議。

3 討論

牙周炎與慢性炎癥、氧化應(yīng)激等有關(guān)

。IL-1β、IL-6、TNF-α是常見的炎癥因子，其表達增多后可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，加快炎癥損傷

。PTX3屬于炎性反應(yīng)蛋白，PTX3表達改變與牙周炎慢性炎癥相關(guān)

。氧化應(yīng)激是由過量的氧自由基引起的，而氧自由基的積累與機體內(nèi)抗氧化酶SOD、GSHPx等的水平有關(guān)；過量的氧自由基能夠?qū)⒅|(zhì)過氧化，生成MDA，因此檢測MDA含量變化可間接反應(yīng)氧化應(yīng)激水平

。

益生菌能夠改善宿主免疫水平、改善腹瀉

。益生菌對牙周炎患者有治療作用

。益生菌還可降低牙周炎患者炎癥因子TNF-α、IL-1β水平

。消退素D1有抑制炎癥等作用

。消退素D1處理后的牙周炎大鼠IL-1β、IL-6水平降低，牙齦指數(shù)明顯改善

。本實驗顯示，益生菌、消退素D1治療后的牙周炎大鼠牙齦出血指數(shù)、菌斑指數(shù)及探診深度明顯降低，并且牙齦組織IL-1β、IL-6、TNF-α水平和PTX3蛋白表達量減少，提示益生菌、消退素D1可降低牙周炎炎癥，改善牙齦出血等癥狀，與之前的研究報道結(jié)果一致，均說明益生菌、消退素D1對牙周炎有治療功效。本實驗還顯示，益生菌、消退素D1治療后的牙周炎大鼠SOD、GSH-Px水平升高，MDA水平降低，并且兩者聯(lián)合后效果更佳，說明益生菌和消退素D1還可以降低牙周炎氧化應(yīng)激水平，益生菌聯(lián)合消退素D1對牙周炎治療效果更好。

進一步分析發(fā)現(xiàn)，益生菌、消退素D1降低牙周炎大鼠牙齦組織中NF-κBp65、p-p38MAPK、MMP-9、MMP-2蛋白表達量。牙周病原微生物可激活Toll受體，誘導(dǎo)p38MAPK信號活化，進而激活NF-κB信號通路，促進炎癥因子生成，誘導(dǎo)炎癥

。p38MAPK、NF-κB信號還可調(diào)控氧化應(yīng)激、細胞外基質(zhì)降解等過程，促進氧化損傷和牙齦損傷

。MMP-9、MMP-2能夠促進牙周炎癥過程中外基質(zhì)降解，加快牙齦損傷

。本次實驗說明，益生菌、消退素D1可能通過抑制p38MAPK、NF-κB信號改善牙周炎炎癥損傷、氧化應(yīng)激和牙齦損傷。益生菌聯(lián)合消退素D1可能是未來牙周炎治療的有效途徑。

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