許相范 徐顯輝 葉承祖 林艷麗

（中國人民解放軍陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院病理科，廈門 361003）

器官移植術(shù)后免疫抑制治療是臨床上必不可少的措施，但移植免疫排斥反應(yīng)復(fù)雜多樣，難以達(dá)到長期療效。因此，挖掘精準(zhǔn)有效的分子免疫調(diào)節(jié)療法是保護(hù)移植器官長期存活、維持其功能的現(xiàn)代醫(yī)療模式。同種異體移植免疫排斥反應(yīng)是由受體T細(xì)胞通過自身抗原受體（TCR）直接、間接或半直接識(shí)別供體抗原而引起的。在這個(gè)過程中參與抗原遞呈細(xì)胞（APC）、細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性T/B（T/Breg）細(xì)胞，并決定受體排斥還是接受移植物的關(guān)鍵作用［1-2］。

本研究旨在探討CD1d 在小鼠皮膚移植排斥反應(yīng)中的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制。CD1d 是嚙齒類動(dòng)物特有的非多態(tài)性脂質(zhì)抗原遞呈分子，可為NKT 細(xì)胞提呈磷酸化和糖肽類脂質(zhì)抗原。皮膚的皮下組織主要由纖維脂肪組織所組成，因此在皮膚移植模型中自然富于脂類抗原適于CD1d分子功能研究［3］。Ⅰ型NKT（ⅠNKT）是CD1d 限制性T 細(xì)胞中研究最深入的亞群，可識(shí)別脂類抗原，活化后表現(xiàn)出直接細(xì)胞毒作用，且大量分泌多種細(xì)胞因子，在Th1 或Th2 為主導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起調(diào)節(jié)作用［4］。因此調(diào)節(jié)以CD1d-ⅠNKT 為軸的免疫反應(yīng)進(jìn)而誘導(dǎo)移植物的免疫耐受是有望實(shí)現(xiàn)的。

1 材料與方法

1.1 材 料 實(shí) 驗(yàn) 用 小 鼠 C57BL/6（B6，H-2b）、BALB. B（BALB/c，H-2b）、BALB/c（H-2d）以及相關(guān)背景的CD1d 缺失小鼠（標(biāo)為CD1d-/-），均購自Jackson實(shí)驗(yàn)室，并在SPF級(jí)別動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)并開展實(shí)驗(yàn)。用于實(shí)驗(yàn)的小鼠均為出生第6~8 周以及體質(zhì)量20~25 g 的雌性小鼠。檢測(cè)小鼠細(xì)胞因子的抗IL-4（11B11）、抗 IFN-γ（R46-A2）和抗 NK1.1（PK136）抗體；用于流式細(xì)胞儀（FACS）染色的抗體，如PE 或Cych-抗 CD4、FITC 或 PE-抗 CD8、PE-抗 NK1.1、FITC-抗CD1d，Cych-TCR；大鼠抗小鼠IL-10 阻斷單抗以及大鼠IgG1單抗，以上抗體均購自PharMingen。α-GalCer 溶解于含有 0.5% 吐溫-20 的 PBS 中，濃度為220 μg/ml，備用。

1.2 方法

1.2.1 小鼠皮膚移植模型的建立 如文獻(xiàn)［5］所述，供體小鼠尾部皮膚移植到受體小鼠左側(cè)胸背部。脫頸處死供體小鼠后切取鼠尾并剝離尾部全層皮膚，將其切成一片5 mm×6 mm 的皮片待用。供者小鼠用3-溴乙醇麻醉后在左側(cè)胸背部移植區(qū)常規(guī)脫毛、消毒后用皮膚剪切除皮膚做植皮床基；移植后7 d 取下植皮固定綁帶，并每天觀察移植皮片存活狀態(tài)，持續(xù)觀察60 d 以上；當(dāng)90%以上的移植皮膚組織壞死時(shí)，判定為完全排斥。

實(shí)驗(yàn)一般分組：供體雌性BALB.B CD1d-/-小鼠的皮膚移植到受體雌性B6 CD1d-/-小鼠的胸背部，作為基因缺失實(shí)驗(yàn)組；供受體均為雌性BALB. B CD1d-/-小鼠，作為基因缺失對(duì)照組；供體雌性BALB. B 小鼠的皮膚移植到受體雌性B6 小鼠的胸背部，作為野生型實(shí)驗(yàn)組；供受體均為雌性B6 或BALB.B小鼠，作為野生型對(duì)照組；每組5只小鼠。

在CD1d 對(duì)小鼠植皮存活時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)中具體分組：第一組，基因缺失實(shí)驗(yàn)組；第二組，基因缺失對(duì)照組；第三組，野生型實(shí)驗(yàn)組；第四組，野生型對(duì)照組。

在CD1d 與小鼠皮膚移植物壽命相關(guān)性實(shí)驗(yàn)中具體分組：第一組，未接受手術(shù)的野生型BALB.B小鼠尾部皮膚，作為陰性對(duì)照組；第二組，基因缺失實(shí)驗(yàn)組；第三組，基因缺失對(duì)照組；第四組，野生型實(shí)驗(yàn)組；第五組，野生型對(duì)照組。

在CD1d 對(duì)引流淋巴結(jié)NKT 細(xì)胞活化和增殖的影響實(shí)驗(yàn)中具體分組：第一組，CD1d 基因缺失對(duì)照組；第二組，CD1d 基因缺失實(shí)驗(yàn)組；第三組，野生型對(duì)照組；第四組，野生型實(shí)驗(yàn)組。

在CD1d 對(duì)受體細(xì)胞因子水平的影響實(shí)驗(yàn)中具體分組：第一組，基因缺失對(duì)照組；第二組，基因缺失實(shí)驗(yàn)組；第三組，野生型對(duì)照組；第四組，野生型實(shí)驗(yàn)組。

在分析CD1d 調(diào)節(jié)移植物排斥反應(yīng)的主要機(jī)制實(shí)驗(yàn)中具體分組：第一組，注射對(duì)受體小鼠無影響的抗體IgG1（對(duì)照組）；第二組，注射抗IL-10 單克隆抗體（IL-10 阻斷組）；第三組，給受體小鼠移植同種野生型脾淋巴細(xì)胞；第四組，α-GalCer 治療組（NKT細(xì)胞激活組）。

部分實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死，并采集相關(guān)組織或器官用于分析。α-GalCer受試的受體小鼠則在從移植前7 d 開始至移植后7 d 每隔3 d 腹腔注射2-Galter 6 μg/次。IL-10阻斷實(shí)驗(yàn)時(shí)給受體小鼠從移植前7 d開始至移植后7 d每隔3 d腹腔注射50 μg抗IL-10抗體懸液。

1.2.2 小鼠皮膚移植后NKT 細(xì)胞募集的檢測(cè) 移植后第7 天受試小鼠脫頸處死，切取引流淋巴結(jié)和/或移植皮片，并立即液氮冷凍。用Trizol 試劑（Invitrogen，Carlsbad，California）分離總RNA，用Nanodrop分光光度計(jì)測(cè)定濃度，取2 μg總RNA并按照試劑盒說明書進(jìn)行cDNA 的合成和PCR 擴(kuò)增。Vα14 基因相應(yīng)的引物：正向5′-CTAAGCACAGCACGCTGCACA-3' 和 反 向 5′-AGGTATGACAATCAGCTGAGTCCC-3'；GAPDH 基因相應(yīng)的引物：正向5′-CCCACTAACATCAAATGGGG-3' 和 反 向 5′-ATCCACAGTCTTCTGGGTGG-3'。PCR反應(yīng)設(shè)計(jì)為95 ℃下45 s，62 ℃下45 s，72 ℃下45 s；循環(huán)30次。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠引流淋巴結(jié)NKT 細(xì)胞受試小鼠脫頸處死，切取引流淋巴結(jié)并研磨和尼龍網(wǎng)過濾制備成單細(xì)胞懸液，用PBS 洗滌，用0.5%牛血清蛋白PBS 中重新洗滌后，根據(jù)說明對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記抗體染色（PE-抗NK1.1 和Cych-TCR），并用流式細(xì)胞儀（BD Biosciences）分析。

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 分析 取實(shí)驗(yàn)小鼠腋下淋巴結(jié)并按方法1.2.2 提取總RNA，將1 μg 總RNA反向轉(zhuǎn)錄成cDNA。再按照試劑盒說明書各取cDNA，正反引物和靶探針制作PCR 反應(yīng)體系。使用序列檢測(cè)系統(tǒng)（Agilent Mx3005P qPCR System，USA）檢測(cè)。以 18S 核糖體 RNA 為內(nèi)參基因，并用 2-ΔΔCt×1010方法計(jì)算目標(biāo)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的相對(duì)水平［6］。IFN-γ基因相應(yīng)的引物及探針：正向5'-AGCAACAGCAAGGCGAAAA-3'，反向 5'-CTGGACCTGTGGGTTGTTGA-3'，探針FAM 5'-CCTCAAACTTGGCAATACTCATGAATGCATCC-3' TAMRA；IL-4：正向5'-CATCGGCATTTTGAA-3'，反 向 5'-CGTTTGGCACATCCATCTCC-3'，探針為 FAM 5'-CACAGGAGAAGGGACGCCATGCA-3' TAMRA；IL-10：正向5'-TTTGAATTCCCTGGGTGAGAA-3'，反向 5'-ACAGGGGAGAAATCGATGACA-3'，探針為 FAM 5'-TGAAGACCCTCAGGATGCGGCTG-3' TAMRA；TGF-β：正向5'-GCAACATGTGGAACTCTACCAGAA-3'，反向 5'-GACGTCAAAAGACAGCCACTCA-3'，探針為FAM 5'-ACCTTGGTAACCGGCTGCTGACCC-3'TAMRA；18S rRNA：正向5'-CGGCTACCACATCCAAGGAA-3'，反向5'-GCTGGAATTACCGCG-3'GCT，探針為VIC 5'-TGCTGGCACCAGACTTGCCCTC-3'TAMRA。

1.2.5 脾淋巴細(xì)胞的移植實(shí)驗(yàn) 無菌條件下切取野生型B6 小鼠的脾臟，并研磨和過篩獲取細(xì)胞懸液，利用Percoll 濃度梯度法提取單核淋巴細(xì)胞，并將細(xì)胞稀釋備用。小鼠皮膚移植前處理，即首先利用低劑量（600 rad）的輻射方法抑制受體B6 CD1d-/-小鼠體內(nèi)淋巴細(xì)胞活性后，第2 天靜脈注射野生型B6 小鼠的1.2×108個(gè)脾淋巴細(xì)胞用于植皮實(shí)驗(yàn)，在SPF條件下飼養(yǎng)6 d后開展皮膚移植實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS23.0處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以表示。當(dāng)兩組在同一時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比較時(shí)均采用Studentt檢驗(yàn)，在同一時(shí)間點(diǎn)多組比較時(shí)采用單因素方差分析（ANOVA）。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察CD1d 基因缺失對(duì)小鼠植皮存活時(shí)間的影響 為探討CD1d 分子在移植免疫排斥反應(yīng)作用，利用野生型或CD1d 基因缺失的BALB. B 和B6小鼠建立同種異體皮膚移植模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，基因缺失對(duì)照組和野生型對(duì)照組的移植皮片完全存活，且存活時(shí)間均超過60 d。野生型實(shí)驗(yàn)組在移植后第18天開始出現(xiàn)移植皮片皮膚皺褶消失、發(fā)白、失去光澤等免疫排斥反應(yīng)，其移植皮片平均存活時(shí)間為（24.4±1.1）d。而CD1d 基因缺失實(shí)驗(yàn)組的移植皮片平均存活時(shí)間為（39.2±4.8）d，與野生型相比顯著延長（P＜0.001）。另外，BALB/c 小鼠雄性Y抗原相關(guān)的皮膚移植模型實(shí)驗(yàn)中也得到同樣的結(jié)果，如圖2所示CD1d基因缺失時(shí)移植皮片的平均存活時(shí)間為（48.6±2.2）d，比野生型［（22.0±2.4）d］顯著延長（P＜0.001）。

圖1 同種異體移植物存活曲線Fig.1 Allografts survival curve of skin

圖2 雄性Y抗原相關(guān)移植物的存活曲線Fig.2 Y-antigen related grafts survival curve

2.2 探討CD1d延長小鼠皮膚移植物壽命的機(jī)制各實(shí)驗(yàn)組小鼠接受皮膚移植手術(shù)后第7天切取其移植皮片，采用RT-PCR 方法檢測(cè)NKT 細(xì)胞所特異的Vα14 基因表達(dá)，結(jié)果如圖3 所示，陰性對(duì)照組正常皮膚中未檢測(cè)到NKT 細(xì)胞特異性Vα14 基因表達(dá)，而在基因缺失實(shí)驗(yàn)組、野生型實(shí)驗(yàn)組和野生型對(duì)照組中均能明顯檢測(cè)到?；蛉笔?duì)照組Vα14 基因表達(dá)明顯弱于其他3個(gè)移植實(shí)驗(yàn)組。

圖3 移植物中NKT細(xì)胞的募集情況Fig.3 Recruitment of NKT cells in grafts

2.3 探討皮膚移植術(shù)后CD1d 對(duì)引流淋巴結(jié)NKT細(xì)胞活化和增殖的影響 皮膚移植后第7天切取受體小鼠腋窩淋巴結(jié)，應(yīng)用流式細(xì)胞儀定量分析皮膚移植術(shù)后受體小鼠腋窩淋巴結(jié)NKT 細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果如圖4 所示，CD1d 基因缺失實(shí)驗(yàn)組的引流淋巴結(jié)內(nèi)NKT 細(xì)胞比例與野生型實(shí)驗(yàn)組相比顯著降低（P＜0.05）；另外，CD1d 基因缺失對(duì)照組的NKT細(xì)胞比例與野生型對(duì)照組相比顯著降低（P＜0.05）。

圖4 引流淋巴結(jié)NKT細(xì)胞增殖率Fig.4 Proliferation rate of NKT cells in draining lymph nodes

2.4 檢測(cè)CD1d 對(duì)受體細(xì)胞因子水平的影響 移植后第7 天，檢測(cè)受體小鼠腋窩引流淋巴結(jié)內(nèi)相關(guān)細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)，結(jié)果如圖 5 所示，CD1d 基因缺失實(shí)驗(yàn)組與野生型實(shí)驗(yàn)組相比，細(xì)胞因子IL-10和TGF-β 水平均顯著升高（P＜0.05 和P＜0.001）；反而，IFN-γ 和IL-4 水平則顯著降低（均為P＜0.05）。另外兩個(gè)對(duì)照組對(duì)細(xì)胞因子無明顯影響。

圖5 受體小鼠腋下淋巴結(jié)相關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)Fig.5 Relative mRNA expressions of cytokines in axillary lymph nodes of recipient mice

2.5 證實(shí)CD1d調(diào)節(jié)移植物排斥反應(yīng)的主要機(jī)制前面研究結(jié)果表明CD1d 基因缺失可抑制NKT 細(xì)胞活化，而增加 IL-10 和 TGF-β 表達(dá)，推測(cè)這些與移植物的延壽相關(guān)。為了證實(shí)上述觀點(diǎn)，建立小鼠基因缺失實(shí)驗(yàn)組模型：即供體均為BALB.B CD1d-/-小鼠，受體均為B6 CD1d-/-小鼠，每組5 只小鼠。受試的受體小鼠從移植前7 d至移植后7 d，每隔3 d腹腔注射相應(yīng)試劑或抗體懸液，結(jié)果如圖6所示，給受體小鼠移植同種野生型脾淋巴細(xì)胞組和NKT 細(xì)胞激活組的移植皮片存活時(shí)間比對(duì)照組顯著縮短（P＜0.01和P＜0.05）。IL-10 阻斷組盡管與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但亦可觀察到移植物生存時(shí)間的縮短，這一結(jié)果并不排除小樣本相關(guān)的誤差。

圖6 治療后移植皮片的存活時(shí)間Fig.6 Days of grafts survival after treatment

3 討論

眾所周知，器官移植是一項(xiàng)重要的臨床治療手段，但機(jī)體對(duì)移植物的排斥反應(yīng)是極其復(fù)雜難以控制的醫(yī)療問題。器官移植后對(duì)移植物的排斥反應(yīng)可分為早期急性排斥反應(yīng)和晚期適應(yīng)性免疫反應(yīng)，前者被認(rèn)為決定后者，即排斥還是免疫耐受的關(guān)鍵一環(huán)。急性排斥反應(yīng)是由供體器官的獲取、保存以及植入等一系列過程中，組織細(xì)胞的損傷所釋放的危險(xiǎn)信號(hào)觸發(fā)受體的先天性免疫系統(tǒng)而啟動(dòng)。

本研究旨在觀察CD1d 對(duì)小鼠皮膚移植急性排斥反應(yīng)的影響，并探討其作用機(jī)制。CD1d是一種非多態(tài)性MHCⅠ類家族蛋白。CD1d 作為一種抗原遞呈分子為NKT 細(xì)胞提供脂類抗原，以此激活和增殖［7］。在嚙齒動(dòng)物中，CD1d 是唯一的脂類抗原遞呈分子，通常在成熟的T 細(xì)胞以外的多種淋巴造血系統(tǒng)細(xì)胞中表達(dá)。最引人注目的是由APC 表達(dá)，此外脂肪細(xì)胞也廣泛表達(dá)。因此，利用富含脂類抗原的小鼠皮膚移植實(shí)驗(yàn)是研究CD1d分子的最佳選擇。

本研究結(jié)果BALB.B（H-2b）小鼠尾部全層皮膚移植到B6（H-2b）小鼠胸背部的動(dòng)物模型中，當(dāng)CD1d基因缺失時(shí)，移植皮片平均存活時(shí)間與野生型相比顯著延長，說明CD1d 基因的缺失導(dǎo)致移植皮片的排斥反應(yīng)減弱，有利于移植物的延壽。在另一個(gè)配對(duì)實(shí)驗(yàn)中也可以觀察到同樣的結(jié)果，即雌性BALB/c（H-2d）小鼠對(duì)雄性Y 抗原相關(guān)的移植免疫排斥反應(yīng)中，當(dāng)CD1d 基因缺失時(shí)移植物平均存活時(shí)間明顯長于野生型。本實(shí)驗(yàn)在設(shè)計(jì)上考慮到組織相容性復(fù)合物抗原性的大小，即MHCⅠ和/或MHCⅡ完全不一致時(shí)，移植物的抗原性太強(qiáng)，移植物存活時(shí)間過短不便于觀察靶基因的功能。因此，選擇了小鼠組織相容性復(fù)合物（H-2）一致而次要組織相容性復(fù)合物不同的小鼠做皮膚移植實(shí)驗(yàn)。

LI 等［8］在小鼠腎臟缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)用單克隆抗體阻斷CD1d 時(shí)明顯減輕腎損傷，其保護(hù)機(jī)制與阻斷CD1d 介導(dǎo)的NKT 細(xì)胞活化和細(xì)胞因子 IFN-γ 分泌有密切相關(guān)。還認(rèn)為分泌 IFN-γ 的主要細(xì)胞為GR-1+CD11b+中性粒細(xì)胞所組成，但也含有 CD1d 限制性 NKT 細(xì)胞。LAPPAS 等［9］研究者在肝臟再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也證實(shí)了CD1d 介導(dǎo)的糖脂遞呈給NKT 細(xì)胞，使其激活并急速產(chǎn)生IFN-γ 是肝損傷的主要原因。本研究的結(jié)果同樣證實(shí)了類似的現(xiàn)象，在小鼠皮膚移植模型實(shí)驗(yàn)中當(dāng)CD1d基因缺失時(shí)，移植物的生存時(shí)間明顯長于野生型，而且其細(xì)胞因子IFN-γ 的表達(dá)明顯低于野生型對(duì)照組。由此，推理阻斷CD1d-NKT細(xì)胞為軸的生物學(xué)效應(yīng)時(shí)，NKT 細(xì)胞的直接細(xì)胞毒作用和細(xì)胞因子風(fēng)暴受到阻尼是保護(hù)移植物使其延壽的主要機(jī)制。

CD1d 是 NKT 細(xì)胞的抗原遞呈分子，而 NKT 細(xì)胞是一種進(jìn)化的先天性免疫細(xì)胞樣T 淋巴細(xì)胞亞型。其具有與NK 細(xì)胞相同的表型和直接的細(xì)胞毒作用，并表達(dá)高度特異的T 細(xì)胞受體。根據(jù)其TCR表達(dá)可進(jìn)一步分為Ⅰ型NKT 細(xì)胞和Ⅱ型NKT 細(xì)胞［10］。然而，最近研究表明存在許多不同功能的NKT 細(xì)胞亞群。FARR 等［11］通過分子和功能的比對(duì)方法證明了CD1d 非依賴性NKT 細(xì)胞群的存在。EBERL 等［12］也發(fā)現(xiàn)了 Vα14 NKT 細(xì)胞一樣表達(dá)NK1.1 的一類微量淋巴細(xì)胞群體，分為CD1d 依賴性和CD1d 非依賴性Vα14 NKT 細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果在所有接受手術(shù)的移植物中都能檢測(cè)到NKT 特異性 Vα14 信號(hào) RNA 的表達(dá)，包括 CD1d 基因缺失組；并且CD1d 基因缺失導(dǎo)致引流淋巴結(jié)內(nèi)NKT 細(xì)胞比例顯著減少。早在 1986 年 MOSMANN 等［13］提出了移植免疫相關(guān)的免疫偏離學(xué)說，即當(dāng)Th1 偏離Th2時(shí)，移植物產(chǎn)生免疫耐受，反之產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，這些免疫偏離現(xiàn)象又受相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。

皮膚移植免疫排斥反應(yīng)的過程中，普遍認(rèn)為APC 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)主要在次級(jí)淋巴器官中啟動(dòng)。在此過程中，APC 通過MHC、CD1d 等分子將識(shí)別的抗原提呈在細(xì)胞表面，使TCR 受體識(shí)別引起激活和擴(kuò)增相應(yīng)的免疫細(xì)胞，并迅速釋放大量細(xì)胞因子［14］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)BALB.B 小鼠為供體B6小鼠為受體進(jìn)行皮膚移植實(shí)驗(yàn)時(shí)，手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)激和同種異體抗原誘導(dǎo)下，受體野生型小鼠產(chǎn)生正常的免疫排斥反應(yīng)，此時(shí)NKT 細(xì)胞數(shù)量以及細(xì)胞因子IFN-γ 和 IL-4 分泌均增加；然而 CD1d 基因缺失時(shí)NKT 細(xì)胞比例減少，細(xì)胞因子 IL-10 和 TGF-β 均明顯增高。因此，CD1d抑制移植物排斥反應(yīng)的機(jī)制是通過阻尼NKT 細(xì)胞的活化和增殖，并且通過CD1d-NKT 細(xì)胞為軸調(diào)控其他各種免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子來實(shí)現(xiàn)。這一推理在脾淋巴細(xì)胞過繼免疫、α-GalCer治療和單克隆抗體阻斷IL-10中得到證實(shí)。眾所周知，IFN-γ 作為一種促炎癥細(xì)胞因子，主要由Th1細(xì)胞、活化的APC以及NKT等細(xì)胞分泌，在同種異體免疫反應(yīng)中促進(jìn)排斥反應(yīng)；而IL-10和TGF-β是有利于移植物免疫耐受的抗炎癥細(xì)胞因子［15-16］。杜文靜等［17］也認(rèn)為 IL-10 和 TGF-β 作為抑制型細(xì)胞因子，在RA 疾病過程中重要的細(xì)胞因子，它們還可能介導(dǎo)免疫耐受和抑制過度免疫反應(yīng)。

總之，CD1d 分子通過CD1d-NKT 細(xì)胞為軸的免疫反應(yīng)，抑制NKT 細(xì)胞的激活和細(xì)胞因子微環(huán)境的改變，在器官移植早期免疫排斥反應(yīng)中起到舉足輕重的作用。早期免疫排斥反應(yīng)又決定著晚期的適應(yīng)性免疫反應(yīng)，即決定器官移植成敗的結(jié)局。因此，本文基于傳統(tǒng)的免疫抑制療法，以CD1d 分子為靶標(biāo)，開發(fā)新型有效的生物藥物提供一定的理論依據(jù)。