周 祥， 潘金錫， 張欽杰， 李 蘊(yùn)，3， 陳 穎，3， 譚皓月， 彭 飛， 黃 穗， 譚治平，吳 皓，賈 歡

1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，上海 200011；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院耳科學(xué)研究所，上海市耳鼻疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200125；3. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院聽覺植入中心，上海 200125；4.浙江諾爾康神經(jīng)電子科技股份有限公司，杭州 311100

人工聽覺腦干植入（auditory brainstem implantation，ABI）是植入式聽覺重建中最尖端的技術(shù)［1-2］，可以克服人工耳蝸植入（cochlear implantation，CI）的禁忌，使重度以上耳聾患者重獲聲音感知。目前，全球已有超過2 000例患者接受ABI手術(shù)，其適應(yīng)證最初僅針對(duì)2型神經(jīng)纖維瘤病（neurofibromatosis type 2，NF2）患者。NF2為常染色體顯性遺傳病，患者最終會(huì)由于腫瘤的生長(zhǎng)壓迫、手術(shù)切除或術(shù)后放射治療的實(shí)施而出現(xiàn)雙側(cè)聽神經(jīng)損毀，無法因CI獲益，只能依賴ABI重建聽力［3］。隨后，ABI適應(yīng)證逐步擴(kuò)大到其他無法進(jìn)行CI的非NF2耳聾患者。同時(shí)，ABI手術(shù)的年齡限制也從18歲以上下降至12月齡以上，對(duì)于先天性耳聾患兒的建議手術(shù)年齡也與CI相同［4］。然而，對(duì)ABI長(zhǎng)期隨訪結(jié)果表明，其臨床獲益?zhèn)€體差異大［5］，且總體開放性言語感知不如CI理想。近年來，各研究團(tuán)隊(duì)也不斷關(guān)注造成這種局限性的原因［6-7］；而ABI作為腦機(jī)接口的一員，有研究表明其性能與電極神經(jīng)界面之間病理生理變化及轉(zhuǎn)歸息息相關(guān)［8］。因此，ABI電極植入后，電極與腦組織的關(guān)系也值得深入研究。

動(dòng)物模型的建立是研究ABI植入后電極組織界面關(guān)系及改進(jìn)電極性能的重要內(nèi)容和手段。但因電極植入的靶點(diǎn)——耳蝸背側(cè)核（dorsal cochlear nucleus，DCN）為耳蝸神經(jīng)向顱內(nèi)延伸的聽覺核團(tuán)，位于重要的生命中樞腦干處，小動(dòng)物植入模型的建立由于耳蝸核尺寸、電極工藝、植入技術(shù)等限制因素而面臨極大的挑戰(zhàn)， 目前該領(lǐng)域尚無基于ABI 技術(shù)的小型動(dòng)物長(zhǎng)期植入模型。因此，本研究為構(gòu)建成功率高、重復(fù)性好的小動(dòng)物模型，進(jìn)行了手術(shù)步驟的標(biāo)準(zhǔn)化分析，優(yōu)化了一套完整詳細(xì)的建模標(biāo)準(zhǔn)化步驟，并在此基礎(chǔ)上觀察了電極神經(jīng)界面，為今后探索長(zhǎng)期植入效果欠佳的原因及優(yōu)化電極方案提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性白化豚鼠23 只，年齡4～6 周，體質(zhì)量200～400 g；其中20 只用于手術(shù)植入電極，3 只用于定量PCR （q-PCR）實(shí)驗(yàn)中無干預(yù)對(duì)照。動(dòng)物均購自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滬）2020-0006，使用許可證號(hào)為20200006000969。

1.2 電極植入標(biāo)準(zhǔn)化步驟

1.2.1 麻醉 將白化豚鼠利用鹽酸替來他明唑拉西泮注射液（50 mg/kg）及噻拉嗪（25 mg/kg）腹腔注射麻醉，5～10 min起效，麻醉標(biāo)準(zhǔn)為豚鼠下肢夾捏反射消失，呼吸深慢，切開皮膚及分離頸部組織時(shí)無抵抗及肌肉顫動(dòng)。若未達(dá)到滿意麻醉效果，可按麻醉劑量的1/4～1/3予以追加。

1.2.2 經(jīng)聽泡暴露耳蝸圓窗 固定豚鼠頭部后，予以顱頂正中至耳后乳突切開皮膚（圖1A），逐層分離筋膜及肌肉，露出顱底孔狀骨質(zhì)，即聽泡篩區(qū)（圖1B）。將豚鼠頭部稍向后側(cè)偏，用尖刀挑開聽泡薄弱骨質(zhì)后，用直徑1.5 mm 鉆頭磨除聽泡骨質(zhì)，暴露耳蝸底圈、耳蝸圓窗及中耳腔（圖1C）。

1.2.3 經(jīng)迷路暴露DCN 定位耳蝸圓窗，向顱底方向繼續(xù)磨除聽泡骨質(zhì)，見上半規(guī)管后更換直徑0.8 mm 鉆頭并調(diào)低鉆速，繼續(xù)磨除骨質(zhì)直至腦膜（圖1C）。小心挑開腦膜后可見小腦絨球，用吸引器輕柔吸除部分絨球組織，可見上方小腦、下方腦干及隆起于腦干表面的DCN一側(cè)（圖1D）。

圖1 豚鼠ABI手術(shù)流程Fig 1 ABI surgical procedure in guinea pigs

1.2.4 記錄與測(cè)試電誘發(fā)聽性腦干反應(yīng)（evoke auditory brainstem response，eABR）利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連接聽覺誘發(fā)電位儀（海神醫(yī)療器械有限公司，中國(guó)）測(cè)試評(píng)估eABR。術(shù)中暴露DCN后，即將刺激電極分別置于耳蝸及DCN 表面予以電刺激，同時(shí)將記錄電極放置于顱頂，參考電極放置于左側(cè)乳突，接地電極放置于左下肢，記錄波形。

1.2.5 電極固定及術(shù)后護(hù)理 ABI 植入術(shù)采用的是依據(jù)豚鼠DCN 大?。s4.0 mm×2.0 mm）設(shè)計(jì)的專用ABI電極，由平板硅膠片和4 個(gè)刺激電極觸點(diǎn)組成（鉑銥合金，90∶10）；每個(gè)電極觸點(diǎn)上都引出一條鉑銥合金導(dǎo)線電極線與相應(yīng)的刺激器刺激電路相連，電極觸點(diǎn)之間距離如圖所示（圖2）。術(shù)中及術(shù)后eABR 記錄均采用雙極刺激模式（Bipolar，BP），植入前電極進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌消毒。術(shù)中在DCN 處測(cè)試eABR 后，取適量止血棉固定電極頭端，肌肉填塞腦膜缺損，將電極導(dǎo)線用光固化膠固定于聽泡，并將電極頭端固定縫合至豚鼠背部后，將手術(shù)切口逐層縫合。

圖2 豚鼠專用ABI外形及電極局部示意圖Fig 2 Schematic diagram of ABI electrode for guinea pig

1.3 術(shù)后觀察及評(píng)估

1.3.1 一般情況評(píng)估 術(shù)后每日觀察生命體征，以及傷口有無出血、感染、腫脹等情況；記錄術(shù)后動(dòng)物攝食、活動(dòng)、生存時(shí)間及并發(fā)癥等情況。

1.3.2 電生理評(píng)估 術(shù)中暴露DCN 后分別記錄耳蝸及DCN 處eABR，于動(dòng)物安樂死前再次記錄術(shù)后DCN 處eABR。實(shí)驗(yàn)中電極陣列植入的標(biāo)準(zhǔn)：耳蝸處eABR 在電刺激觸發(fā)后出現(xiàn)4 波（Wave Ⅳ）即為有效，閾值定義為引出4 波振幅低于0.15 μV 時(shí)的刺激電流，潛伏期為刺激后至引出4 波正峰出現(xiàn)的時(shí)間；DCN 處eABR 在電刺激觸發(fā)后出現(xiàn)3 波（Wave Ⅲ）即為有效，閾值定義為引出3 波振幅低于0.15 μV 時(shí)的刺激電流，潛伏期為刺激后至引出3 波正峰出現(xiàn)的時(shí)間。

1.3.3 組織學(xué)觀察 于術(shù)后電生理測(cè)試后對(duì)動(dòng)物行安樂死，心臟灌注后進(jìn)行組織取材。包埋后48 h（n=1）進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，H-E）染色評(píng)估。另在術(shù)后48 h（n=3）、7 d（n=3）、30 d（n=2）、180 d（n=1），經(jīng)過上述心臟灌注后進(jìn)行組織取樣，固定后進(jìn)行梯度脫水。包埋后制成厚度為50 μm的冰凍切片并貼片于載玻片上。依次烤片、清洗、封閉后，加入封閉液配置的一抗溶液（1∶1 000稀釋），包括膠質(zhì)纖維酸性蛋白（rabbit anti GFAP；Novus，美國(guó)）、小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞特異性蛋白抗體（goat anti Iba-1；Abcam，英國(guó)） 及神經(jīng)元核抗原抗體（mouse anti NeuN；Sigma，美國(guó)）；次日，清洗結(jié)束后加入封閉液配置的二抗溶液（分別為Alexa Fluor 488-conjugated donkey anti goat IgG、Alexa Fluor 594-conjugated donkey anti mouse IgG 和Alexa Fluor 647-conjugated donkey anti rabbit IgG），均以1∶500 濃度稀釋。最后，用適量的含DAPI 的抗熒光淬滅劑封片。

1.3.4 q-PCR 分析 取術(shù)后48 h（n=3）、7 d（n=3）豚鼠，另取3 只未行手術(shù)的正常豚鼠為對(duì)照。過量麻醉后斷頭處死豚鼠，在無酶環(huán)境中快速進(jìn)行雙側(cè)耳蝸核組織取材，置于消毒后離心管中；將快速制備的組織放入RNAnase （R0901；Sigma，美國(guó)） 中防止RNA 降解，放入勻漿機(jī)（JXFSTPRP-48，上海凈信）研磨勻漿（總運(yùn)行時(shí)長(zhǎng)37 s，運(yùn)行7 s 后中斷3 s，頻率為65 Hz）。隨后按照TRIzol 法提取組織RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA 后，使用SYBR Green Premix Pre Taq HS qPCR Kit 在熒光定量PCR 儀（Roche LightCycler 480；Roche，瑞士）中進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。目的基因?yàn)榘捉樗?1β（interleukin-1β，IL-1β）和基質(zhì)金屬蛋白酶9 （matrix metalloprotein-9，MMP-9），序列參照GeneBank 數(shù)據(jù)庫，引物由NCBI Primer-blast 設(shè)計(jì)，蘇州金唯智生物科技有限公司合成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用Image J 軟件分別對(duì)耳蝸處和DCN 處eABR波形進(jìn)行測(cè)量。通過GraphPad Prism v.8.0程序，采用方差分析（ANOVA）結(jié)合Bonferroni 檢驗(yàn)（數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊性）或Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。采用Turkey post-hoc 檢驗(yàn)比較組間以及各時(shí)間點(diǎn)差異。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

手術(shù)過程中無豚鼠死亡，均順利完成ABI 手術(shù)，平均手術(shù)耗時(shí)為（89.25±8.45）min（n=20）。術(shù)后急性期（0～7 d）死亡率為20%（n=4），集中在術(shù)后36～48 h。其中，3 只術(shù)后未恢復(fù)攝食反射；另1 只蘇醒后恢復(fù)攝食，但在48 h 時(shí)死亡。其余16 只動(dòng)物均在術(shù)后24 h 恢復(fù)攝食反射，恢復(fù)期未見傷口明顯出血、感染等；在術(shù)后48 h 內(nèi)有輕微平衡障礙，后逐漸恢復(fù)；未見腦脊液漏等其他明顯并發(fā)癥。

2.2 電生理結(jié)果

術(shù)中20 只豚鼠均成功引出耳蝸處及DCN 處eABR，除1只動(dòng)物外，其余術(shù)中耳蝸處eABR在電刺激后引出4個(gè)正波，其形態(tài)與DCN 處引出eABR 類似（圖3），且后者在電刺激后引出3 個(gè)正波。耳蝸處eABR 中Ⅳ波潛伏期為（2.57±0.21）ms（n=19），閾值為（0.59±0.10）mA（n=19）。術(shù)中DCN 處Ⅲ波潛伏期為（1.74±0.13） ms （n=20），閾值為（0.50±0.09）mA（n=20）。術(shù)中DCN 處eABR中Ⅲ波相較術(shù)中耳蝸處eABR 中Ⅳ波潛伏期縮短（0.84±0.22）ms（n=19），DCN 處相比耳蝸處閾值降低（0.11±0.14）mA（n=19）。術(shù)后對(duì)動(dòng)物在不同時(shí)間點(diǎn)行安樂死前記錄DCN 處eABR 波形，Ⅲ波潛伏期為（1.92±0.20）ms（n=16），閾值為（0.59±0.10）mA（n=16）。術(shù)后DCN 處eABRⅢ波與術(shù)中比較，潛伏期延長(zhǎng)（0.19±0.22） ms （n=16）， 閾 值 增 加（0.03±0.32） mA（n=16）。

圖3 術(shù)中及術(shù)后eABR波形圖Fig 3 eABR waveform elicited intraoperatively and postoperatively

2.3 DCN組織學(xué)變化

對(duì)電極植入后不同時(shí)間點(diǎn)DCN 組織進(jìn)行免疫熒光染色分析，可見電極刺激并植入后DCN 表面仍保持完整結(jié)構(gòu)。其中術(shù)后48 h進(jìn)行H-E染色發(fā)現(xiàn)，植入側(cè)與未植入側(cè)比較，耳蝸核及相鄰腦干組織出現(xiàn)類似組織空泡樣改變，即變性細(xì)胞的胞質(zhì)出現(xiàn)大小不一的空泡，組織整體呈蜂窩樣或網(wǎng)狀改變（圖4）。在術(shù)后7 d 的免疫熒光染色中也發(fā)現(xiàn)植入側(cè)耳蝸核易與腦干連接部分出現(xiàn)分離。自術(shù)后48 h起，植入側(cè)的耳蝸核表面即出現(xiàn)膠質(zhì)成分增多，術(shù)后180 d 仍較為明顯（圖5）。神經(jīng)元密度在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)內(nèi)未見明顯改變。

圖4 術(shù)后雙側(cè)耳蝸核及腦干組織H-E染色Fig 4 H-E staining of bilateral cochlear nuclei and brainstem tissues after operation

圖5 術(shù)后DCN免疫熒光染色圖Fig 5 Immunofluorescence staining of postoperative DCN

2.4 IL-1β和MMP-9基因表達(dá)變化

對(duì)電極植入術(shù)后48 h 及7 d 動(dòng)物DCN 組織進(jìn)行q-PCR 分析后發(fā)現(xiàn)，植入電極豚鼠（n=3）IL-1β和MMP-9基因表達(dá)量在術(shù)后48 h、7 d 時(shí)比未植入電極的對(duì)照豚鼠（n=3） 升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖6）。

圖6 q-PCR檢測(cè)豚鼠電極植入后DCN部位IL-1β和MMP-9 mRNA表達(dá)量Fig 6 mRNA expression of IL-1β and MMP-9 in DCN after implantation in guinea pigs by q-PCR

3 討論

ABI 作為目前人工聽覺植入最尖端的技術(shù)之一，為那些無法通過CI 獲得聽力的患者帶來了希望。但ABI 的臨床獲益始終不盡如人意，如何提升ABI性能始終是研究重點(diǎn)［7，9-11］。新式電極的研發(fā)、電極性能的測(cè)試或電極植入后微環(huán)境的觀察及改善，都離不開動(dòng)物模型。

在穿透性ABI 電極相關(guān)論著中，OTTO 等［12］利用貓這一聽覺系統(tǒng)與人最為相似的物種進(jìn)行研究，手術(shù)方式上同樣利用經(jīng)聽泡-迷路徑路，將穿透式電極植入靠近聽神經(jīng)根部的耳蝸腹側(cè)核處（ventral cochlear nucleus，VCN）。而 后，GUEX 和KOZIN等［6，13］圍繞柔性ABI 電極的開發(fā)，先后利用小鼠、大鼠，通過顱底徑路吸除小腦暴露DCN 表面的方式植入電極。另外，非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物也是ABI臨床前測(cè)試中不可或缺的動(dòng)物模型物種［14］。豚鼠模型的優(yōu)勢(shì)在于成本低，動(dòng)物較易獲得，耳蝸核大小適中；且在耳蝸核結(jié)構(gòu)相關(guān)研究中也證實(shí)，不論是神經(jīng)元分布或DCN 組織結(jié)構(gòu)，豚鼠都比大鼠更接近于貓［15］。在手術(shù)徑路上，盡管早期已有文獻(xiàn)［16-17］利用豚鼠經(jīng)聽泡-迷路徑路，依據(jù)聽神經(jīng)走行判斷DCN 位置，但對(duì)豚鼠的相關(guān)解剖學(xué)研究［18-19］顯示，豚鼠聽神經(jīng)與腦干耳蝸核之間存在一定程度的夾角，且具有個(gè)體差異。另外，DCN 表面隆起腦干1.5 mm 高度，因此，直接通過聽神經(jīng)尋找DCN 的困難與創(chuàng)傷程度不言而喻。在本研究中，我們?cè)谛g(shù)中盡量避免損傷聽神經(jīng)，通過辨認(rèn)豚鼠上半規(guī)管、側(cè)顱底與第四腦室關(guān)系，在可視狀態(tài)下暴露DCN 表面后植入電極。這不僅提高了動(dòng)物建模的有效率，也大大保障了植入過程不因視野受限而導(dǎo)致電極或器械損傷柔軟的腦組織。

腦干為重要的生命中樞，且電極植入靶點(diǎn)鄰近后組顱神經(jīng)，因此術(shù)中應(yīng)注意監(jiān)測(cè)呼吸、心跳以預(yù)防相關(guān)并發(fā)癥。若電刺激引出其他非聽覺反應(yīng)，則會(huì)在eABR 波形上表現(xiàn)為5 ms左右高聳寬大的波形；而本研究中的eABR 波形中未觀察到此現(xiàn)象，因此排除其他反應(yīng)的產(chǎn)生。術(shù)后發(fā)生的死亡事件集中在36～48 h，猜測(cè)可能是由于電極植入腦干后移位，對(duì)呼吸、心率、體溫，甚至攝食反射產(chǎn)生影響所致，或因豚鼠DCN 表面毗鄰前庭核［18-19］，影響其進(jìn)食所致。后續(xù)改進(jìn)可增加術(shù)后制動(dòng)、電極固定及監(jiān)護(hù)，以期進(jìn)一步提高豚鼠植入后生存質(zhì)量。

在ABI相關(guān)研究中，術(shù)中DCN處引出典型eABR波形能夠說明電極位置的準(zhǔn)確性［20］；且在豚鼠實(shí)驗(yàn)中，刺激DCN 后引出的第三個(gè)正波（Ⅲ波）較為穩(wěn)定［21］，波形與前人研究基本一致［16，22］。在本研究結(jié)果中，暴露DCN后仍能順利引出耳蝸eABR，可驗(yàn)證該術(shù)式及操作未損傷聽神經(jīng)，且兩處eABR 波形相似也同時(shí)驗(yàn)證電極均成功放置于DCN表面。術(shù)后eABR相較術(shù)中，在閾值和潛伏期上稍有延后，猜測(cè)可能與術(shù)后電極組織界面因纖維化、膠質(zhì)增厚或電極稍有移位有關(guān)［23］。

目前在腦機(jī)接口相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，植入腦組織的皮質(zhì)電極存在性能不穩(wěn)定問題，可能由于電極表面涂層退化、電極植入后引出急性炎癥、局部膠質(zhì)成分激活有關(guān)。尤其是圍繞電極周圍形成包裹鞘的星形膠質(zhì)細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞［24-27］，研究其在ABI 植入后的激活、清除、極化的動(dòng)態(tài)變化，對(duì)于提升ABI電極的性能極有幫助。本研究觀察到植入后48 h起，局部星形膠質(zhì)細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞開始增多，與先前針對(duì)皮質(zhì)內(nèi)插入式相關(guān)研究的發(fā)現(xiàn)一致［23］。此外，在術(shù)后48 h樣本中，植入側(cè)可觀察到耳蝸核及相鄰腦干區(qū)域的空泡樣改變，這與早前在沙鼠的噪音暴露后的耳蝸核海綿樣改變相似［28］。我們猜測(cè)該現(xiàn)象可能為電刺激后的興奮毒性改變，即激活過多興奮性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)，引發(fā)了細(xì)胞水腫或線粒體損傷。q-PCR 結(jié)果顯示48 h 時(shí)出現(xiàn)IL-1β的激活。由于該細(xì)胞因子由活化的巨噬細(xì)胞作為前蛋白產(chǎn)生，而膠質(zhì)增生的激活來源于巨噬細(xì)胞作用，說明ABI植入后局部有膠質(zhì)活動(dòng)。另外，MMP-9基因在48 h 也出現(xiàn)升高。由于這一基因功能是降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡，參與維持血腦屏障的完整性［29］，因此說明即使ABI 板狀電極未侵入組織深部，但同樣引發(fā)了血腦屏障的破壞。

綜合考慮到實(shí)驗(yàn)周期及成本（條件反射訓(xùn)練等），本研究中未采用行為學(xué)測(cè)試進(jìn)行驗(yàn)證。雖然行為學(xué)測(cè)試能更好地評(píng)估聽覺功能，但通常聽覺電生理也能反映聽覺植入裝置的有效性［30］。此外，本次實(shí)驗(yàn)樣本量較少，雖然觀察到組織學(xué)疑似變化，但需后期加大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。因?yàn)楸狙芯恐?，?dòng)物并發(fā)癥少，eABR 反應(yīng)好，電極組織界面理想，仍足以驗(yàn)證該動(dòng)物模型的可靠性和有效性。

由于ABI手術(shù)難度大，且適合人群范圍窄（適用于NF2、耳蝸/蝸神經(jīng)嚴(yán)重畸形等罕見病患者），并涉及多學(xué)科領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)外基礎(chǔ)及臨床研究團(tuán)隊(duì)較少。但由于我國(guó)人口基數(shù)較大，罹患這類疾病的患者數(shù)量仍然較多，且該方向與腦科學(xué)、腦機(jī)接口等前沿領(lǐng)域關(guān)系密切，因此值得深入研究。未來ABI的研究方向應(yīng)當(dāng)向柔性電極、表面修飾、電刺激策略等方面發(fā)展。構(gòu)建成功的動(dòng)物模型，無疑是相關(guān)研究得以開展的重要基石。

綜上，本研究改良構(gòu)建的經(jīng)聽泡-迷路徑路ABI植入豚鼠模型安全可靠。術(shù)后急性期、短期可觀察到ABI 電極組織界面的變化，尤其是膠質(zhì)成分的增多，及其對(duì)聽覺電生理閾值與潛伏期的影響。

利益沖突聲明/Conflict of Interests

所有作者聲明不存在利益沖突。

All authors disclose no relevant conflict of interests.

倫理批準(zhǔn)和知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究涉及的所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均已通過上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)（審批號(hào)SH9H-2021-A538-SB）。所有實(shí)驗(yàn)過程均遵照上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)相關(guān)條例進(jìn)行。

All experimental animal protocols in this study were reviewed and approved by Shanghai Ninth People’s Hospital， Shanghai Jiao Tong University School of Medicine （Approval Letter， SH9H-2021-A538-SB， dated 22/02/2021）， and all experimental animal protocols were carried out by following the guidelines of Experimental Animal Ethics Committee of Shanghai Jiao Tong University School of Medicine.

作者貢獻(xiàn)/Authors'Contributions

周祥參與了數(shù)據(jù)采集和分析、論文撰寫；潘金錫、張欽杰參與了數(shù)據(jù)處理、論文修改；李蘊(yùn)參與了聽覺電生理測(cè)試指導(dǎo)；陳穎參與了聽覺電生理測(cè)試；譚皓月參與了論文修改；彭飛、黃穗、譚治平參與了實(shí)驗(yàn)及電極設(shè)計(jì)；吳皓參與了實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)；賈歡參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、監(jiān)督及論文修改。所有作者均閱讀并同意了最終稿件的提交。ZHOU Xiang acquired and analyzed the data， and drafted the manuscript. PAN Jinxi and ZHANG Qinjie analyzed and interpreted the data， and revised the manuscript. LI Yun guided the auditory electrophysiological test. CHEN Ying participated in the auditory electrophysiological test. TAN Haoyue revised the manuscript. PENG Fei， HUANG Sui， and TAN Zhiping participated in the experiment and electrode design. WU Hao participated in the experimental study guidance. JIA Huan conceived and designed the study supervision and manuscript correction. All the authors have read the last version of paper and consented for submission.

·Received：2022-03-27

·Accepted：2022-04-15

·Published online：2022-05-28