CLNM的危險因素 原發(fā)腫瘤大小在CLNM陰性和CLNM陽性組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。根據(jù)單因素Logistic回歸分析，腫瘤大小與CLNM顯著相關(guān)。此外，男性、年齡<55歲、濾泡型乳頭狀癌、多灶性和ETE(包膜侵犯、微小侵犯和大體侵犯)也與CLNM顯著相關(guān)。遠處轉(zhuǎn)移未見與CLNM相關(guān)。在多因素Logistic回歸分析中，除了遠處轉(zhuǎn)移外，以上因素均與CLNM有關(guān)(表3)。

新《條例》下的化妝品原料安全與功效評價

作為世界第二化妝品大國，中國的化妝品消費市場規(guī)模日漸龐大。在巨大的經(jīng)濟需求下，國際眾多知名品牌大舉進入，不僅給我國化妝品行業(yè)帶來了不小的沖擊，也促進了國內(nèi)品牌的快速崛起。在我國化妝品市場和行業(yè)高速發(fā)展的當下，屢禁不止的禁限用成分的違法添加、假冒偽劣及仿造等現(xiàn)象也非常嚴重，不僅干擾了我國化妝品行業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，還對市場環(huán)境、行業(yè)環(huán)境、消費者信心和行業(yè)認知都造成了不良影響，因此需要利用法規(guī)進行有針對性的監(jiān)督和管理。

化妝品原料的安全性直接關(guān)系到產(chǎn)品和使用者的身心安全。世界各國對于化妝品產(chǎn)品安全的監(jiān)管很大程度上是依靠對化妝品原料的嚴格管理，尤其歐盟、美國、日本等國際主要的化妝品生產(chǎn)和銷售國家，立法系統(tǒng)歷史較久，且管理體系較完整，其對于化妝品原料成分及新原料的管理模式，也成為其他國家和地區(qū)立法監(jiān)管的參考和借鑒對象。我國自1987年頒布首部關(guān)于化妝品及其原料質(zhì)量安全性評價的技術(shù)依據(jù)《化妝品衛(wèi)生標準》，至2020年發(fā)布《化妝品監(jiān)督管理條例》（中國人民共和國國務(wù)院第727號令）并于2021年1月1日開始實施，表明我國對于化妝品原料、生產(chǎn)經(jīng)營、安全及功效管理方面的監(jiān)管日趨嚴格和規(guī)范。

例如通過自由基清除實驗，即是以氧化物與易氧化物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)形成氧化產(chǎn)物，之后加入某種原料檢測其自由基清除能力從而評價抗氧化能力。類似的還有氧自由基吸收能力實驗(ORAC 法)、羥自由基清除能力測定、超氧陰離子自由基清除能力測定、還原能力測定、總抗氧化能力測試(ABTS法)等檢測方法。除了檢測自由基外，ROS活性氧、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT) 等指標都可以從不同角度反映待測成分的抗氧化能力。

化妝品原料安全及功效評價技術(shù)現(xiàn)狀

在體外實驗室條件下，模擬人體生理環(huán)境或特定刺激條件下，對細胞進行培養(yǎng)和孵育，對比添加藥物或化妝品原料前后的細胞生長狀態(tài)、生理指標及代謝反應(yīng)的差異和變化，從而評價該原料在安全濃度下是否具備一定的功效。依據(jù)化妝品的使用特點，細胞生物學(xué)方法多使用人皮膚細胞系，如表皮角質(zhì)形成細胞、成纖維細胞、黑素細胞、上皮細胞、皮脂腺細胞、毛囊細胞以及一些免疫細胞作為體外細胞評價模型的細胞來源?？梢赃x擇以一種細胞或兩種細胞混合培養(yǎng)的方式，如通過H

O

或LPS等刺激物損傷細胞，建立過氧化或炎癥模型，也可以通過UV對細胞進行輻照，建立光損傷或光老化模型，進行相應(yīng)的評價和測試。

2003年，美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）將斑馬魚列為小鼠和大鼠之后的第三大脊椎類模式生物。美國環(huán)境保護署（EPA）在2007年啟動化學(xué)品毒性研究項目（ToxCast），將斑馬魚作為首選的脊椎類動物模型，并已公布了相關(guān)研究進展和成果。2009年，斑馬魚安全和毒理學(xué)評價方法通過了美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）和歐洲藥品監(jiān)督管理局（EMA）的GLP認證，標志著斑馬魚安全性評價數(shù)據(jù)正式被歐美監(jiān)管部門認可。美國FDA自建斑馬魚實驗室，用于進行藥品、食品及化妝品的安全性研究和評價。

目前我國也有多項基于斑馬魚技術(shù)的化妝品評價方法團標出臺，包括美白功效的黑素抑制、炎癥、胚胎急性毒性測試、溫和刺激性、抗皺、舒緩及緊致等方法。除了安全及功效數(shù)據(jù)支撐，斑馬魚實驗還可以提供直觀的效果呈現(xiàn)。如圖1所示，斑馬魚用于黑色素形成抑制劑活性測試中，測試組斑馬魚黑色素明顯減少。

01 生物化學(xué)方法

生物化學(xué)以及分析化學(xué)是實驗室最常見也是操作較簡單的方法，通過一些簡單的基本化學(xué)儀器和常用試劑，借助化學(xué)分析、光譜分析等手段，對一些在原料安全性和發(fā)揮功效相關(guān)的特殊指標進行檢測和分析。此類方法一般多屬于成熟方法，包括經(jīng)典文獻、專業(yè)教材、標準及法規(guī)等所列方法，操作技術(shù)和儀器要求不高，但需要注意精密度、準確性、線性范圍以及實驗誤差等。

皮膚芯片等生物芯片，可以在實驗室環(huán)境下協(xié)助體外皮膚培養(yǎng)并建模，基于微流控技術(shù)，在芯片內(nèi)進行體外皮膚培養(yǎng)。如利用不同的通道模擬血流和皮膚生成，由培養(yǎng)基供給養(yǎng)分。生物芯片在二氧化碳（CO

）含量為5%、溫度為37攝氏度、濕度可控的環(huán)境中孵育。這種芯片可生成具有真皮、表皮等兩個主要皮膚層的三維皮膚細胞。如大多數(shù)“器官芯片”一樣，這種新型細胞培養(yǎng)系統(tǒng)能夠在微觀尺度上模擬活體器官的主要功能，用于開發(fā)新藥，也可作為毒理學(xué)研究和臨床試驗中動物試驗的低成本替代方案。

通過情景設(shè)置和導(dǎo)入，明確本節(jié)課教學(xué)任務(wù)。教師介紹“魁北克大橋坍塌”例子，提醒學(xué)生設(shè)計紙橋時要注意對關(guān)鍵部位進行加固處理；且作為設(shè)計師要有高度責(zé)任感，發(fā)展學(xué)生社會參與方面的核心素養(yǎng)[21]。學(xué)生在探究過程中理解影響結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的因素，并通過小組合作與動手實踐，制作出外表美觀大方、穩(wěn)定性強、承重效果良好的紙橋。

02 細胞生物學(xué)方法

化妝品原料及產(chǎn)品的安全和功效是從研發(fā)到上市銷售中間各個環(huán)節(jié)中都非常重要的部分。我國化妝品監(jiān)管日漸嚴格，尤其是上市產(chǎn)品的功效宣稱都必須有充分的科學(xué)依據(jù)來支持。因此真實可信的功效評價數(shù)據(jù)將直接影響到產(chǎn)品的研發(fā)與銷售。

3D皮膚模型經(jīng)過近十年的發(fā)展，也已經(jīng)成為一種較為成熟的體外評價模型。這種實驗室環(huán)境下利用組織工程技術(shù)，由人源皮膚細胞構(gòu)建而成的立體細胞模型，可以在組織結(jié)構(gòu)等方面一定程度上模擬人體皮膚，實現(xiàn)一些普通2D細胞培養(yǎng)實驗中無法實現(xiàn)的操作，還可以通過染色切片等方式，直觀地呈現(xiàn)皮膚結(jié)構(gòu)的差異變化。如化妝品原料合成品的腐蝕性、刺激性、經(jīng)皮吸收及致突變性、光毒性等安全性測試以及功效性測試均可得到良好的應(yīng)用。目前的商業(yè)化的3D皮膚模型，EpiSkin、EpiDerm 和SkinEthic可作為ECVAM( 歐洲替代方法驗證中心) 驗證的皮膚腐蝕性檢測動物替代方法。此外還有一些其他公司開發(fā)的EpiKutis、EpiOcular、FP-3D、Phenion F 等皮膚模型。3D皮膚模型可以直接測試水不溶性物質(zhì)和配方產(chǎn)品，這是普通2D培養(yǎng)體系無法實現(xiàn)的。但目前技術(shù)下的各類皮膚模型只是較為單一的細胞組合，無法重現(xiàn)皮膚器官的血液循環(huán)和物質(zhì)代謝，不能檢測較長時間處理下的功效水平，并且不能真實反映皮膚的屏障功能。此外，大部分品牌的皮膚模型還存在一致性較差，無法實現(xiàn)高通量一致性篩選，因此可以視作為2D細胞模型的升級版，作為體外測試方法的一種選擇，但并不能真正實現(xiàn)在體皮膚器官的替代。

皮膚類器官作為一種新型的類器官模型，不僅能高度模擬皮膚組織的生理結(jié)構(gòu)和功能，更好地在不同體外環(huán)境下還原較為真實的皮膚生態(tài)，還可以應(yīng)用于皮膚發(fā)育研究、皮膚疾病病理研究及藥物篩選等領(lǐng)域。在目前實驗室的條件下，皮膚類器官模型可以在特殊的生態(tài)環(huán)境下對具有特定功能的器官組織進行重建和改造，以彌補現(xiàn)有體外皮膚模型在結(jié)構(gòu)、功能等方面的不足，如增加皮膚附屬物器官及功能等。皮膚附屬物的定植，甚至免疫細胞的加入，都會使皮膚類器官在皮膚再生、組織修復(fù)、藥物篩選及醫(yī)學(xué)美容等方面扮演越來越重要的角色。

2.班主任管理手段應(yīng)全面發(fā)展。班主任應(yīng)及時對自身的管理方式進行更新，傳統(tǒng)的班級管理方式不再適應(yīng)當前時代。因此，班主任可以從多角度多層次入手，對管理手段進行全面拓展。例如，在想要通過與學(xué)生交流促進師生關(guān)系時，采用面對面的談話方式未免會讓學(xué)生覺得心理壓力較大，不容易敞開心扉，平時在互聯(lián)網(wǎng)發(fā)達的教學(xué)背景下，教師可以采取網(wǎng)絡(luò)信息技術(shù)對學(xué)生進行實時溝通，可以通過建立微信群或者QQ群的方式與學(xué)生溝通，不但快捷方便還能減輕學(xué)生的心理負擔(dān)，從而打造良好的師生溝通環(huán)境，有助于管理進展。

所謂生態(tài)破壞，即城市水環(huán)境中的生態(tài)結(jié)構(gòu)受到破壞，而水體修復(fù)技術(shù)的應(yīng)用是重新構(gòu)建水生態(tài)環(huán)境，促使其恢復(fù)原有的生態(tài)結(jié)構(gòu)和相關(guān)功能。對于城市水環(huán)境治理工作，其開展方向主要包括源頭治理、水流控制、人工生態(tài)技術(shù)應(yīng)用3個方面，具體闡述如下。

03 斑馬魚替代方法

斑馬魚（Danio rerio，Zebrafsh）是細胞生物學(xué)研究中常見的經(jīng)典模式生物。斑馬魚與人類基因同源性高達87%，生理功能、免疫系統(tǒng)及生物信號傳導(dǎo)通路等方面具有與人類高度的相似性。斑馬魚具備模式生物的多項優(yōu)點，如生長周期短、體積小、遺傳背景清晰、可實現(xiàn)高通量篩選等。同時，5天以內(nèi)的斑馬魚胚胎和幼魚在實驗動物倫理方面符合實驗動物福利保護的國際“3R”原則，是一種優(yōu)秀的藥物篩選模型。

食品生產(chǎn)過程中，微乳常暴露在不同pH環(huán)境下。因此，考察微乳的pH穩(wěn)定性對于擴大其應(yīng)用范圍具有重要意義。本研究分別考察丁香酚微乳和海藻酸鈉修飾微乳的在pH 3.0～7.0穩(wěn)定性。如圖3所示，丁香酚微乳在pH 5.0～7.0時，呈現(xiàn)為乳白液狀，粒徑均小于200 nm；在pH 3.0～4.5時，丁香酚微乳出現(xiàn)了明顯的沉淀與分層，可見在該pH條件下丁香微乳十分不穩(wěn)定。結(jié)合表1可知，在pH 3.0～4.5范圍下，丁香酚微乳的粒徑及PDI明顯增大。酪蛋白酸鈉在等電點附近所帶電荷量較少，靜電斥力減弱，導(dǎo)致粒子發(fā)生聚集現(xiàn)象[23]。

傳統(tǒng)的化妝品原料安全與功效評價往往使用生物化學(xué)方法、動物模型、體外細胞模型、體外動物替代方法和臨床評價等方法。此外，感官評價和消費者調(diào)查，也可以對化妝品的功效實現(xiàn)不同角度的數(shù)據(jù)支撐。

皮膚刺激性所表現(xiàn)出來的皮膚灼熱、紅腫等表觀現(xiàn)象通常伴隨著炎癥細胞的響應(yīng)和炎癥因子的釋放。通過使用炎癥細胞發(fā)綠色熒光的轉(zhuǎn)基因斑馬魚，可以實時觀察炎癥細胞的遷移和消退，可以很直觀地看到受試物的舒緩功效，定量計數(shù)統(tǒng)計也很方便（綠色亮點為炎癥細胞），如圖2所示。

目前發(fā)展起來的各種體外測試方法，無論是安全性測試，還是功效性評價，都可以在化妝品原料和產(chǎn)品研發(fā)的前期實現(xiàn)篩選和初步驗證，并為人體臨床測試提供理論支持和數(shù)據(jù)參考。并且，不同維度的體外測試方法，和人體臨床測試、感官評價、消費者調(diào)查等不同的方法有機結(jié)合，可以共同構(gòu)建起化妝品原料及產(chǎn)品的安全與功效評價的科學(xué)體系。

高中音樂對于學(xué)生的綜合發(fā)展，以及對學(xué)生情操的培養(yǎng)都具有非常重要的作用，在新課改形式下加強對音樂教學(xué)的創(chuàng)新研究，具有非常重要的理論和現(xiàn)實意義。并且由于音樂教學(xué)與其他學(xué)科的教學(xué)在教學(xué)方法以及內(nèi)容上都有很大的不同，所以在新課改形勢下，我們可以采取以下措施，來進行高中音樂教學(xué)的創(chuàng)新：

新《條例》下化妝品原料安全及功效評價地位

化妝品原料的安全性直接關(guān)系到產(chǎn)品和使用者的身心安全。我國對于化妝品及原料的監(jiān)管一直較為嚴格,尤其是2020年新《條例》的頒布和實施，對化妝品原料、生產(chǎn)經(jīng)營、產(chǎn)品的安全與功效等方面都制定了嚴格的監(jiān)管要求。

化妝品原料不僅是化妝品整個生命周期的源頭和根基,也是產(chǎn)品的主體構(gòu)成,尤其是以活性原料為代表的功效添加成分,更是賦予了化妝品豐富多樣的功效和特點。隨著化妝品行業(yè)的快速發(fā)展和消費者認知的提高,化妝品產(chǎn)品的宣稱從概念性逐漸向功效性轉(zhuǎn)變。

關(guān)于新《條例》規(guī)定的原料監(jiān)管及新原料注冊備案制度，我國境內(nèi)新原料申報提供的毒理學(xué)資料仍以動物試驗為主。鑒于現(xiàn)階段的科研水平,體外替代方法并不能完全等同于或取代動物在體試驗。但在化妝品原料研發(fā)和申報過程中,可以針對原料和產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)特點、特定的毒理學(xué)終點,選擇合適的整合測試和評估方法(IATA)對新原料的毒性進行風(fēng)險評估或功效測試。如在試驗過程中使用的評估方法尚未收錄于我國現(xiàn)行的《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中,也應(yīng)收錄于國際權(quán)威替代方法驗證機構(gòu)所公布的方法中,同時還需提交該毒理學(xué)試驗方法與我國現(xiàn)行方法所得結(jié)果一致的證明材料,包括申請人的試驗資料、科學(xué)文獻、國內(nèi)外政府、國際組織發(fā)布的內(nèi)容等都可作為被認可的毒理學(xué)試驗資料。但作為申報資料項目或提供新原料安全評價資料豁免依據(jù)時所引用的科學(xué)文獻法規(guī)資料內(nèi)容,應(yīng)與該新原料具有邏輯關(guān)聯(lián)性。如原料來源、使用目的、使用規(guī)格、適用或使用范圍、安全使用等限制條件應(yīng)一致。新《條例》還要求化妝品原料及其應(yīng)用產(chǎn)品的功效宣稱必須具有充分的科學(xué)依據(jù),并在國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門規(guī)定的專門網(wǎng)站向社會公開,包括支撐其功效宣稱的相關(guān)文獻資料、研究數(shù)據(jù)或產(chǎn)品功效評價資料的摘要,并接受全社會的監(jiān)督。

隨著新《條例》的頒布和實施，作為第二大化妝品市場，我國化妝品行業(yè)的創(chuàng)新熱情被點燃。但繁榮的盛景之下，還有很多亟待解決的問題是行業(yè)必須面對的。在這場創(chuàng)新的浪潮中，原料創(chuàng)新無疑是重頭戲之一。無論是化妝品原料企業(yè)、制造企業(yè)，還是品牌商，都必須堅持科技創(chuàng)新,關(guān)注前沿科學(xué)技術(shù)發(fā)展及其在化妝品行業(yè)的推廣應(yīng)用,為我國化妝品行業(yè)健康、科學(xué)、可持續(xù)發(fā)展提供堅實的基礎(chǔ)。