蔣華科，龔燕飛，向陽(yáng)海，陳靜怡，陳 靜，徐錦波

(岳陽(yáng)市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，湖南 岳陽(yáng) 414000)

出生缺陷、不良孕產(chǎn)史、不孕不育是重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，其中遺傳性因素是造成上述問(wèn)題的主要原因之一，染色體異常是其中重要的遺傳因素。染色體異常是導(dǎo)致習(xí)慣性流產(chǎn)、原發(fā)性不孕不育、死胎、死產(chǎn)、胎兒畸形的病因之一。為了解岳陽(yáng)地區(qū)遺傳咨詢患者染色體異常類(lèi)型和多態(tài)發(fā)生率，指導(dǎo)該地區(qū)輔助生殖診療和提高優(yōu)生優(yōu)育率，本文回顧性分析了2019-2021年1 340例遺傳咨詢患者外周血染色體核型，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019-2021年岳陽(yáng)市某醫(yī)院1 340例遺傳咨詢患者，其中女658例，男682例，年齡16～51歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：原發(fā)性不孕不育、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、性腺發(fā)育異常、原發(fā)性閉經(jīng)、繼發(fā)性閉經(jīng)、無(wú)精癥等生殖遺傳問(wèn)題；均來(lái)自湖南岳陽(yáng)地區(qū)。

1.2方法 抽取患者外周血，用肝素抗凝，在無(wú)菌操作下接種(男0.4 mL，女0.42 mL)于5 mL外周血培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)68～70 h，加秋水仙素(0.02%～0.04%)，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，0.075 mol/L氯化鉀低滲液處理細(xì)胞30 min，用甲醇、冰醋酸混合液(甲醇∶冰醋酸為3∶1)固定細(xì)胞2次，取懸液滴干片，75 ℃烤片8 h，顯帶前再烤片1～2 h，胰酶(0.02%)消化顯帶，Giemsa染色。采用蔡司全自動(dòng)核型分析系統(tǒng)進(jìn)行核型分析，計(jì)數(shù)20個(gè)分裂中期細(xì)胞，分析5個(gè)核型。若遇異常，計(jì)數(shù)分析100個(gè)細(xì)胞，≥3%即可報(bào)告。核型描述按照人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體系2016年版進(jìn)行描述。染色體多態(tài)判讀：1號(hào)、9號(hào)、16號(hào)染色體異染色質(zhì)片段長(zhǎng)度大于16號(hào)染色體次縊痕長(zhǎng)度，且為正常的同源染色體的異染色質(zhì)長(zhǎng)度2倍以上時(shí)，判讀為1q+/9qh+/16qh+；Y染色體長(zhǎng)度大于或等于18號(hào)染色體時(shí)判讀為Yqh+；Y染色體長(zhǎng)度小于或等于21號(hào)染色體時(shí)判讀為Yqh-。

外周血細(xì)胞培養(yǎng)基、40 μg/mL的秋水仙堿購(gòu)自廣州白云山拜迪生物公司，甲醇、冰醋酸和氯化鉀購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司(純度為分析純)。DHP-9256B型電熱恒溫培養(yǎng)箱、DHG-9250型鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自濟(jì)南鑫貝西公司，HH-60型數(shù)顯恒溫?cái)嚢柩h(huán)水箱購(gòu)自常州國(guó)華電器公司，SC-3612型低速離心機(jī)購(gòu)自安徽中科中佳公司，Synergy UV型超純水儀購(gòu)自美國(guó)Millpore公司，F(xiàn)A1204B型電子天平購(gòu)自上海天美公司，染色體核型分析為蔡司全自動(dòng)核型分析系統(tǒng)(顯微鏡型號(hào)Imager.Z2)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率或百分率表示。

2 結(jié) 果

2.1異常核型檢測(cè)結(jié)果 1 340例患者中，異常核型檢出率為2.54%(34/1 340),其中男性占2.05%(14/682)，女性占3.04%(20/658)。性染色體異常21例,占異常核型的61.76%(21/34)，包括克氏綜合征7例、特納綜合征8例、超磁綜合征3例，性染色體結(jié)構(gòu)異常7例；常染色體異常11例，占異常核型的32.35%(11/34)，包括數(shù)目異常1例，平衡易位7例，倒位2例，染色體重復(fù)1例，見(jiàn)表1。同時(shí)檢出46,XY性反轉(zhuǎn)1例，標(biāo)記染色體(47,XY，+mar)1例。

表1 異常核型檢測(cè)結(jié)果

續(xù)表1 異常核型檢測(cè)結(jié)果

2.2染色體多態(tài)性變異結(jié)果 1 340例患者中，共檢出染色體多態(tài)性變異201例，多態(tài)率為15.0%(201/1 340)，其中男性占75.62%(152/201)，女性占24.38%(49/201)。染色體多態(tài)變異以Y染色體長(zhǎng)臂異染色質(zhì)區(qū)和D/G組染色體隨體區(qū)變異檢出率最高。見(jiàn)表2。

表2 染色體多態(tài)性變異結(jié)果(n)

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，異常染色體檢出率為2.54%，與何思等[1]報(bào)道的2.9%基本一致，并且與本地省級(jí)婦幼保健院統(tǒng)計(jì)的染色體異常檢出率也基本一致。本研究結(jié)果顯示，21例性染色體數(shù)目異?；颊吲R床表型為不孕不育癥、原發(fā)閉經(jīng)、無(wú)精或弱精癥、身材矮小等性染色體異常[2]。47,XXY克氏綜合征是男性不育中最常見(jiàn)的性染色體疾病，其男性群體發(fā)病率為1/1 000[3]?？耸暇C合征患者青春期前癥狀并不明顯，進(jìn)入第二青春期后，常以無(wú)精或弱精癥及性激素異常、卵泡刺激素和促黃體生成素水平升高、睪酮水平降低就診[4]。本研究中的1例克氏綜合征患者同時(shí)合并2型糖尿病。44%的克氏綜合征患者可表現(xiàn)為腹部肥胖和普遍代謝綜合征[5]。

特納綜合征是較常見(jiàn)的性染色體疾病，占女性新生兒的1/5 000,主要的表型為身材矮小、后發(fā)際線低、頸蹼、胸平而寬、乳頭間距增寬及原發(fā)閉經(jīng)、性腺發(fā)育不良等異常，以及可能存在軀體異常如心臟畸形、腎臟異常等[6]。特納綜合征的染色體核型有45,X單體型、嵌合體型、等臂X型、X缺失型、末端重排、假雙著絲粒型、環(huán)狀X型及含Y染色體型。本研究中有8例特納綜合征患者，其中單體型3例、嵌合型1例、X缺失型3例、等臂型1例,單體型占37.5%,與SAENGER等[7]報(bào)道的45,X占30%～55%基本一致。本研究中有1例46,X,dup(X)(q21)患者，X長(zhǎng)臂q21至長(zhǎng)臂末端區(qū)域重復(fù)，比健康人群多1個(gè)拷貝。該患者臨床表現(xiàn)為原發(fā)閉經(jīng)，其他的體格檢查未見(jiàn)明顯異常。一般認(rèn)為X短臂與身材矮小等有關(guān)，X長(zhǎng)臂與卵巢發(fā)育不全等有關(guān)。特納綜合征患者絕大部分都是X單體型、X等臂型，或長(zhǎng)臂、短臂缺失的部分單體型，僅長(zhǎng)臂部分重復(fù)的較少見(jiàn)。有研究報(bào)道過(guò)1例45X/46,X,dup(X)(q12-22)嵌合型特納綜合征，該患者僅有原發(fā)性閉經(jīng)無(wú)其他特納綜合征典型體征，其原因與X染色體短臂正常、長(zhǎng)臂部分區(qū)域重復(fù)有關(guān)[8-10]。

本研究結(jié)果顯示，2例患者為X染色體重排，其中臂間倒位46,XX,inv(X)(p11.2q22)核型患者表現(xiàn)為習(xí)慣性流產(chǎn)，臂內(nèi)倒位46,XX,inv(X)(q21q23)核型患者表現(xiàn)為繼發(fā)性不孕。X染色體倒位與常染色體倒位一樣，在同源染色體配對(duì)時(shí)形成了倒位環(huán)，理論上形成4種配子，一種正常核型，一種攜帶者核型，2種異常核型配子[11-12]。本研究中，1例46,XY,患者生物學(xué)性別為男性，社會(huì)性別為女性，具有女性生殖系統(tǒng)。腹股溝探查雙側(cè)有隱睪，家族中有2例同樣癥狀患者，經(jīng)臨床多學(xué)科會(huì)診初步診斷為性發(fā)育異常，可能的遺傳病因?yàn)樾奂に夭幻舾芯C合征，雄激素受體基因AR突變導(dǎo)致雄激素受體的正常生物學(xué)效應(yīng)消失，引起男性假兩性畸形。雄激素不敏感綜合征臨床診斷需要與雄激素合成缺陷，如17α-羥化酶缺乏、5α-還原酶缺乏等，以及性腺睪丸發(fā)育異常等進(jìn)行鑒別[13]。該患者的明確診斷需要進(jìn)行家系研究及完善相關(guān)遺傳基因檢測(cè)。

本研究結(jié)果顯示，染色體異常攜帶者共9例，分別為平衡易位6例，羅氏易位1例，倒位2例。染色體攜帶者因?yàn)闆](méi)有遺傳物質(zhì)的丟失,一般沒(méi)有臨床表型，但可以引起反復(fù)流產(chǎn)、不孕不育。在不孕不育和流產(chǎn)夫婦中，染色體異常攜帶者占3%～6%[14]。對(duì)于有不良孕產(chǎn)史、反復(fù)流產(chǎn)、不孕不育、新生兒畸形或死亡史的夫婦，應(yīng)建議行夫妻外周血染色體檢查，警惕雙親之一可能是染色體異常攜帶者，對(duì)于夫妻之一為染色體異常攜帶者，下次妊娠須進(jìn)行產(chǎn)前診斷。本研究還發(fā)現(xiàn)1例標(biāo)記染色體患者，因繼發(fā)性不育就診。有研究指出，標(biāo)記染色體的出現(xiàn)率在性發(fā)育不全中占2.93‰，其中70%為新發(fā)，30%為遺傳，76%的家族性病例沒(méi)有臨床癥狀，而75%的新發(fā)病例可能表型異常[15-16]。本研究研究顯示，多態(tài)性變異核型檢出率為4.3%。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，染色體多態(tài)是異染色質(zhì)的變異。由于異染色質(zhì)區(qū)域不含有結(jié)構(gòu)基因及沒(méi)有轉(zhuǎn)錄活性，屬于正常變異現(xiàn)象，不引起表型的異常變化，不具有臨床意義。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者提出，染色體多態(tài)性對(duì)生殖和妊娠有著不可忽視的影響,可導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常，其原因可能是異染色質(zhì)中高度重復(fù)的DNA在減數(shù)分裂過(guò)程中出現(xiàn)異常重組，進(jìn)而影響基因調(diào)節(jié)和細(xì)胞分化[17-18]。染色體多態(tài)與多核胚胎形成獨(dú)立相關(guān)，提示可能會(huì)對(duì)胚胎發(fā)育過(guò)程產(chǎn)生影響[19]。在不孕不育人群中，染色體多態(tài)檢出率高于染色體正常的生育人群[20-21]。染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致一定的臨床效應(yīng),如不孕不育和自然流產(chǎn)[22]。但目前認(rèn)為，染色體多態(tài)性不影響輔助生殖體外受精/卵泡漿內(nèi)單精子注射助孕患者的臨床結(jié)局[23]。

綜上所述，染色體異常是導(dǎo)致不孕不育等生育問(wèn)題的重要原因之一，臨床上對(duì)生殖遺傳咨詢患者進(jìn)行外周血染色體檢查，可為臨床診斷與輔助生殖技術(shù)提供依據(jù)。采用輔助生殖技術(shù)結(jié)合產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)，可提高生育率，降低異常胎兒出生率，達(dá)到提高生育質(zhì)量、優(yōu)生優(yōu)育的目的。