張 潔，王曉娥

(咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712000)

人類(lèi)利用天然植物防治農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害已有幾千年的歷史，如在《氾勝之書(shū)》中就記載用艾草防治倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)，用附子水浸泡種子后再種植，可以防治農(nóng)作物生長(zhǎng)期的多種害蟲(chóng)。在現(xiàn)代，人們利用這些天然植物或者對(duì)植物的某些器官(如根、莖、葉、花、果實(shí)、種子)等進(jìn)行提取，用這些天然植物或者提取物制成具有殺蟲(chóng)、抑菌、除草或者調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的活性化合物，這些被稱(chēng)為植物源農(nóng)藥。植物源農(nóng)藥具有不易產(chǎn)生抗藥性、對(duì)人和天敵動(dòng)物安全易降解等多種優(yōu)勢(shì)成為現(xiàn)代農(nóng)藥發(fā)展的新趨勢(shì)。

巴東醉魚(yú)草(BuddlejaalbifloraHemsl.)，為馬錢(qián)科醉魚(yú)草屬灌木，抗逆性強(qiáng)，分布于我國(guó)陜西、甘肅、湖北、四川、貴州等地。在醫(yī)學(xué)研究方面，大葉醉魚(yú)草全株均可入藥，根有毒，可活血、祛風(fēng)除濕；葉和花具有消炎治療濕疹等功效[1]。在農(nóng)用方面，其生物活性研究多集中在殺蟲(chóng)抑菌方面，張宏利等研究發(fā)現(xiàn)巴東醉魚(yú)草對(duì)粘蟲(chóng)有較好的拒食及毒殺活性[2]；張秀云等研究發(fā)現(xiàn)其提取物對(duì)粘蟲(chóng)、小菜蛾、菜青蟲(chóng)、朱砂葉螨有較好的拒食與毒殺活性[3]；李治偉等研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)4齡小菜蛾有較好的拒食活性[4]；抑菌方面，陸德玲等研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)水稻紋枯病、玉米小斑病、番茄灰霉病及水稻稻瘟病等病菌有較好的抑制作用[5]；謝玉峰等研究發(fā)現(xiàn)，巴東醉魚(yú)草的提取物對(duì)油番茄灰霉病菌、菜菌核病菌、和水稻稻瘟病菌、玉米小斑病菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率均超過(guò)了80%[6]。

在此研究的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步明確巴東醉魚(yú)草的抑菌活性，筆者實(shí)驗(yàn)選取小麥紋枯病菌(RhizoctoniacerealisVander Hoeven)、棉花黃萎病菌(Verticilliumdahliae)、水稻紋枯病菌(Thanatephoruscucumeris(Frank) Donk.)、番茄葉霉病菌(Fulviafulva(Cooke) Ciferri)為試驗(yàn)菌種，測(cè)定巴東醉魚(yú)草對(duì)以上兩種病菌的生物活性，以期對(duì)巴東醉魚(yú)草的農(nóng)用生物活性提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試植物：巴東醉魚(yú)草(BuddlejaalbifloraHemsl.)：野生品種，于2021年6月采集于太白山。

供試植物病菌：小麥紋枯病菌(R.cerealis)、棉花黃萎病菌(V.dahliae)、水稻紋枯病菌(T.cucumeris)、番茄葉霉病菌(F.fulva)由咸陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院植物生理實(shí)驗(yàn)室提供。

試驗(yàn)主要儀器設(shè)備：微型植物粉碎機(jī)(型號(hào)：FZ102)、超凈工作臺(tái)(型號(hào)：SW-CJ-2FD)、恒溫雙層搖床、滅菌鍋(型號(hào)：ES-315)、智能人工氣候箱(型號(hào)：RQX-250B)、電子天平、恒溫雙層搖瓶機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(型號(hào)：RE-52AA)、水浴鍋(型號(hào)：HHS-0-100)。

試驗(yàn)試劑：乙醇、丙酮、石油醚、正丁醇、乙酸乙酯等試劑均為市購(gòu)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 浸膏的制備 將采集的供試植物樣品在正常室溫下陰干后用微型植物粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，得粗提粉。用95%的乙醇浸泡3次，每次浸泡7 d，過(guò)濾。提取后將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓，濃縮后去乙醇得到總浸膏。將得取的總浸膏用水捏溶，依次用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚(極性由大到小)進(jìn)行萃取，得到正丁醇浸膏、乙酸乙酯浸膏、石油醚浸膏。將以上3種浸膏用丙酮充分溶解，置于5℃以下冰箱保存。

1.2.2 抑菌活性的測(cè)定方法 測(cè)定巴東醉魚(yú)草的抑菌活性采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法[7,8]。

將上述方法得到的總浸膏與丙酮配置成供試藥劑，將藥劑與融化的PDA培養(yǎng)基混合搖勻后(比例為1∶9)倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，成帶毒平板待用，并以丙酮溶劑為對(duì)照。將供試的小麥紋枯病菌及棉花黃萎病菌分別用打孔器制成直徑為4 mm的大小均勻的菌餅后直接放入帶毒培養(yǎng)基中間(每個(gè)培養(yǎng)皿中只接入一種病菌)，重復(fù)三次。將接好的兩種病菌放置于28℃的室內(nèi)根據(jù)病菌實(shí)際情況培養(yǎng)3～7 d。然后采用十字交叉法測(cè)量每種病菌的直徑。菌絲生長(zhǎng)抑制率按公式(1)和公式(2)計(jì)算。

菌落直徑(mm)=測(cè)量直徑-4

(1)

(2)

同時(shí)將浸膏分別用丙酮與滅菌水(按體積比1∶9)稀釋備用，并用無(wú)菌水和丙酮的混合液對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇總浸膏對(duì)4種病原菌菌絲的抑制作用

分別測(cè)定了巴東醉魚(yú)草總浸膏濃度在10 mg干樣/ml及50 mg干樣/mL下對(duì)4種病原菌菌絲的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 巴東醉魚(yú)草總浸膏不同濃度下對(duì)4種病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

由表1可見(jiàn)，在濃度為10 mg干樣/mL下，巴東醉魚(yú)草對(duì)小麥紋枯病菌及棉花黃萎病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，分別為70.14%±0.41%、75.46%±0.35%，但當(dāng)濃度為50 mg干樣/mL時(shí)，對(duì)這兩種病原菌菌絲的抑制作用差異不大，分別為77.65%±0.22%、78.27%±0.31。巴東醉魚(yú)草總浸膏對(duì)水稻紋枯病菌及番茄葉霉病菌在不同濃度在對(duì)其病原菌菌絲的抑制差異明顯，在濃度為10 mg干樣/mL下，抑制率分別為52.21%±0.51%及35.21%±0.68%，當(dāng)濃度為50 mg干樣/mL下，抑制率明顯增高，分別為83.90%±0.19%、80.82%±0.36%，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制率。

2.2 正丁醇、乙酸乙酯、石油醚等極性溶劑萃取對(duì)植物病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

為了明確巴東醉魚(yú)草抑菌活性物質(zhì)的極性段，將巴東醉魚(yú)草總浸膏用無(wú)菌水充分捏溶分散，再分別用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚進(jìn)行萃取后得到不同的萃取相，測(cè)定其對(duì)小麥紋枯病菌、棉花黃萎病菌、水稻紋枯病菌、番茄葉霉病菌菌絲的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同極性萃取物對(duì)4種病原真菌生長(zhǎng)的抑制作用

由表2可見(jiàn)，乙酸乙酯萃取物對(duì)4種病原菌生長(zhǎng)均有較強(qiáng)的抑制率，尤其在質(zhì)量濃度為5 g/L時(shí)對(duì)小麥紋枯病菌、棉花黃萎病菌、水稻紋枯病菌、番茄葉霉病菌菌絲的抑制率分別達(dá)79.76%±0.88%、74.55%±0.11%、81.88%±0.23%、72.89%±0.65%。

3 討論與結(jié)論

醉魚(yú)草屬植物資源豐富，全世界約有100多種，其中我國(guó)分布50多種，以西南地區(qū)分布最為廣泛[9]， 多數(shù)具有生物活性，其中研究最為廣泛的為醉魚(yú)草、巴東醉魚(yú)草、大葉醉魚(yú)草及皺葉醉魚(yú)草等，其農(nóng)用活性多為殺蟲(chóng)、抑菌方面。研究發(fā)現(xiàn)其有效活性物質(zhì)為環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)等[4]。

研究通過(guò)對(duì)巴東醉魚(yú)草在10 mg干樣/mL濃度及50 mg干樣/mL濃度下對(duì)小麥紋枯病菌、棉花黃萎病菌具有較強(qiáng)的抑制作用，抑制率都達(dá)到了70%以上，但是在兩種濃度下抑制率差異不大；對(duì)水稻紋枯病菌、番茄葉霉病菌菌絲生長(zhǎng)在濃度10 mg干樣/mL時(shí)抑制效果不明顯，當(dāng)濃度為50 mg干樣/mL下，抑制率明顯增高，分別為83.90%±0.19%、80.82±0.36%，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制率。為了明確東醉魚(yú)草抑菌活性物質(zhì)的極性段，研究通過(guò)對(duì)其正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物的研究發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯萃取物對(duì) 4種病原菌的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出不同程度的抑制率，其中乙酸乙酯萃取物對(duì) 4種病原菌的生長(zhǎng)的抑制率最強(qiáng)。

綜上所述，巴東醉魚(yú)草具有較好的抑菌活性，且抑菌普廣，有進(jìn)一步進(jìn)行開(kāi)發(fā)研究的必要。